Name: primary cell cultures from drosophila gastrula embryos
Uploaded: 2011-02-28T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos at JoVE.com

JB a été soutenue par la Damon Runyon Cancer Research Fellowship Foundation DRG-1716-1702. JZ a été soutenu par le NIH / NIGMS Bourse F32 GM082174-02. NP est un enquêteur de l&#39;Institut médical Howard Hughes.

1. Préparation des cages volée <ol><li> Cultivez la drosophile (souches sauvages tels que l&#39;Oregon-R ou tout autre génotype) dans des contenants pratiques tels que des tasses d&#39;insectes 32-oz </li><li> Transfert mouches nouvellement eclosed à de grandes cages d&#39;embryon de collecte ou de voler des cages de la population. </li><li> Déplacer les cages dans une pièce avec une température de ~ 25 ° C et une humidité ~ 65% dans une lumière de 12 h et une noire de 12 h du cycle afin de facilite...

<ol>
	<li>Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory culture of Drosophila. , 588-599 (1999).</li><li>Bai, J., Hartwig, J. H., Perrimon, N. S. A. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+WH2-domain-containing+protein,+promotes+sarcomeric+actin+filament+elongation+from+pointed+ends+during+Drosophila+muscle+growth.">a WH2-domain-containing protein, promotes sarcomeric actin filament elongation from pointed ends during Drosophila muscle growth.</a> Dev. Cell. 13, 828-842 (2007).</li><li>Bai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+screening+in+Drosophila+primary+cells+for+genes+involved+in+muscle+assembly+and+maintenance+.">RNA interference screening in Drosophila primary cells for genes involved in muscle assembly and maintenance .</a> Development. 135, 1439-1449 (2008).</li><li>Sepp, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+neural+outgrowth+genes+using+genome-wide+RNAi.">Identification of neural outgrowth genes using genome-wide RNAi.</a> PloS. Genet. 4, e1000111-e1000111 (2008).</li><li>Donady, J. J., Fyrberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+culturing+of+Drosophila+embryonic+cells+in+vitro.">Mass culturing of Drosophila embryonic cells in vitro.</a> TCA Manual. 3, 685-687 (1977).</li><li>Seecof, R. L., Alleaume, N., Teplitz, R. L., Gerson, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+neurons+and+myocytes+in+cell+cultures+made+from+Drosophila+gastrulae.">Differentiation of neurons and myocytes in cell cultures made from Drosophila gastrulae.</a> Exp. Cell Res. 69, 161-173 (1971).</li><li>Bai, J., Sepp, K. J., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+primary+cells+dissociated+from+gastrula+embryos+and+their+use+in+RNAi+screening.">Culture of Drosophila primary cells dissociated from gastrula embryos and their use in RNAi screening.</a> Nature Protocols. 4, 1502-1512 (2009).</li></ol>

Le schéma de développement des cultures primaires de cellules de drosophile peut varier considérablement, probablement due à des variables de plusieurs cours du processus de préparation de cellules primaires. Tout d&#39;abord, les mouches utilisées pour la ponte doivent être jeunes (dans une semaine) et saine (exempte d&#39;infection virale ou bactérienne). Embryons non fécondés ou infectés doivent être évités, car ils sont inutiles et des cellules dérivées de ces embryons ne peuvent pas se diff...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Shields and Sang M3 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S3652</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>JRH Biosciences</td>
<td>12103-500M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin from bovine pancreas</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-6634</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Large embryo collection cages</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#25 US standard testing sieve</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>57334-454</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#45 US standard testing sieve</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>57334-462</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#120 US standard testing sieve</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>57334-474</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>62400-620</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>KT885300-0040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>KT885300-0100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Costar, 384-well plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>29444-078</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab-Tek II Chambered coverglass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>171080</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

primary cell cultures from drosophila gastrula embryos

Nous décrivons ici une méthode de préparation et de la culture de cellules primaires dissociées à partir d&#39;embryons de drosophile gastrula. En bref, une grande quantité d&#39;embryons mis en scène des mouches jeunes et sains sont collectées, stérilisée, puis physiquement dissocié en une suspension cellulaire unique à l&#39;aide d&#39;un homogénéiseur de verre. Après avoir été plaqué sur des plaques de culture ou des diapositives de chambre à une densité appropriée dans le milieu de culture, ces cellules peuvent se différencier en d&#39;autres de plusieurs types de cellules morphologiquement distinctes et qui peuvent être identifiés par leurs marqueurs cellulaires spécifiques. Par ailleurs, nous présentons les conditions pour le traitement de ces cellules avec double brin (ds) ARN pour susciter inactivation génique. Efficace ARNi dans les cellules de drosophile primaire est accomplie par la simple baignant les cellules dans un milieu de culture contenant ARNdb. La capacité de mener efficacement une perturbation ARNi, avec d&#39;autres moléculaire, analyses biochimiques, d&#39;imagerie cellulaire, permettra une variété de questions à répondre dans les cellules de drosophile primaire, en particulier ceux liés à la musculaires différenciées et des cellules neuronales.

Watch this Scientific Journal Video about Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos at JoVE.com

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos (Video) | JoVE

Nous fournissons un protocole détaillé pour la préparation de cellules primaires dissociées de<em&gt; Drosophil</em&gt; Un embryon. La capacité à mener à bien la perturbation effective ARNi, avec d&#39;autres méthodes d&#39;imagerie moléculaire, biochimique et cellulaire permettra une variété de questions qui seront abordées dans les<em&gt; Drosophile</em&gt; Cellules primaires.

Cultures de cellules primaires à partir Drosophile Embryons Gastrula

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae (Video) | JoVE

Cultures neuronales primaires du cerveau des drosophiles stade tardif pupes

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Recherche

Biologie

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos (Video) | JoVE

Préparation des cultures de neurones d&#39;embryons de drosophile Midgastrula scène

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates (Video) | JoVE

Primaire Dissocié cultures Mésencéphale dopamine cellulaire du nouveau-né contre les rongeurs

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation (Video) | JoVE

La préparation des cultures primaires de cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse murine pour l&#39;électroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation (Video) | JoVE

Tissu ciblé chimères embryonnaires: Zebrafish cellulaire Gastrula transplantation

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents (Video) | JoVE

Établir des cultures primaires de fibroblastes adultes à partir de rongeurs

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos (Video) | JoVE

Imagerie verticale de<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryons

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos (Video) | JoVE

Changement de forme d&#39;imagerie cellulaire en vie Drosophile Embryons

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos (Video) | JoVE

Isolement et purification de la kinésine de Drosophila Embryons

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÂ¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures (Video) | JoVE

Naïve cellules souches adultes Isolation de cultures de fibroblastes humains primaires

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...