Name: large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen
Uploaded: 2010-12-30T17:00:00
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1) Collection d&#39;œufs de poisson zèbre <ol><li> Sur l&#39;après-midi précédant le jour de l&#39;écran chimique, mis en place 10 à 20 bassins d&#39;élevage de poisson zèbre. Remplissez chaque réservoir avec l&#39;eau du système de l&#39;aquaculture. En utilisant un filet de poisson, le transfert un mâle adulte et un à deux femelles adultes à l&#39;intérieur de conteneurs dans chaque bac d&#39;élevage. Séparez les poissons mâles et femelles de l&#39;autre avec un diviseur. Étiqueter les cages et me...

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	<li>Bayliss, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+receptor+signaling+inhibits+regenerative+angiogenesis+in+adult+zebrafish.">Chemical modulation of receptor signaling inhibits regenerative angiogenesis in adult zebrafish.</a> Nature chemical biology. 2, 265-273 (2006).</li><li>Burns, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+assay+for+small+molecules+that+modulate+zebrafish+embryonic+heart+rate.">High-throughput assay for small molecules that modulate zebrafish embryonic heart rate.</a> Nature chemical biology. 1, 263-264 (2005).</li><li>Hao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+structure-activity+relationship+study+of+dorsomorphin+analogues+identifies+selective+VEGF+and+BMP+inhibitors.">In vivo structure-activity relationship study of dorsomorphin analogues identifies selective VEGF and BMP inhibitors.</a> ACS chemical biology. 5, 245-253 (2010).</li><li>Hong, C. C., Peterson, Q. P., Hong, J. Y., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artery/vein+specification+is+governed+by+opposing+phosphatidylinositol-3+kinase+and+MAP+kinase/ERK+signaling.">Artery/vein specification is governed by opposing phosphatidylinositol-3 kinase and MAP kinase/ERK signaling.</a> Curr Biol. 16, 1366-1372 (2006).</li><li>Milan, D. J., Peterson, T. A., Ruskin, J. N., Peterson, R. T., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+that+induce+repolarization+abnormalities+cause+bradycardia+in+zebrafish.">Drugs that induce repolarization abnormalities cause bradycardia in zebrafish.</a> Circulation. 107, 1355-1358 (2003).</li><li>Peterson, R. T., Link, B. A., Dowling, J. E., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecule+developmental+screens+reveal+the+logic+and+timing+of+vertebrate+development.">Small molecule developmental screens reveal the logic and timing of vertebrate development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12965-12969 (2000).</li><li>Yu, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsomorphin+inhibits+BMP+signals+required+for+embryogenesis+and+iron+metabolism.">Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism.</a> Nature chemical biology. 4, 33-41 (2008).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature reviews. 4, 35-44 (2005).</li><li>Stern, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecules+that+delay+S+phase+suppress+a+zebrafish+bmyb+mutant.">Small molecules that delay S phase suppress a zebrafish bmyb mutant.</a> Nature chemical biology. 1, 366-370 (2005).</li><li>Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+suppression+of+a+genetic+mutation+in+a+zebrafish+model+of+aortic+coarctation.">Chemical suppression of a genetic mutation in a zebrafish model of aortic coarctation.</a> Nature biotechnology. 22, 595-599 (2004).</li></ol>

Lors de la planification d&#39;un écran chimiques à base de poisson zèbre, une attention particulière doit être portée à la robustesse du phénotype à l&#39;étude et le taux de base du phénotype tel. Ceci est particulièrement important pour les écrans des suppresseurs chimique d&#39;un phénotype induit. Par exemple, pour un phénotype causé par un choc thermique par induction d&#39;un transgène, la condition qui provoque le phénotype reproductible doit être précisément tracé avant de lancer l&#39;éc...

<ol><li> Minimum de 20 paires de poisson zèbre adulte du génotype voulu. </li><li> Filets de poisson, les réservoirs d&#39;élevage, avec récipient intérieur amovible et séparateurs (habitats aquatiques). </li><li> Boîtes de Pétri (10 cm). </li><li> Passoire à thé en plastique. </li><li> L&#39;eau de lavage d&#39;embryon bouteille containg. </li><li> Pipettes de transfert jetables en polyéthylène. </li><li> Polystyrène plaques de 96 puits d&#39;essai à fond rond (Corning Costar, Lowell, MA). </li><li> Pipette Pasteur en verre (Fisher Scientific). </li><li> Manuel pipette pompe, 10 ml (Bel-Art Products, Pequannock, NJ). </li><li> Moyennes embryon E3: 5 mM de NaCl, 0,17 mM de KCl, 0,33 mM de CaCl2, 0,33 mM MgSO 4, contenant 0,003% (phénylthio-urée, Sigma, St. Louis, MO) PTU. PTU peut être préparée comme une solution en dissolvant 0,3 10x-g PTU dans 1 L de médias embryon E3. Les solutions contenant du PTU devrait être protégé de la lumière en couvrant avec du papier aluminium. </li><li> 12-canaux des pipettes, 2-20 uL (Eppendorf). </li><li> 12-canaux pipettes, 300-300 uL (Eppendorf). </li><li> Jetable en polystyrène pipettes bassin, 50 ml (Fisher Scientific). </li><li> Bibliothèques de petites molécules de divers composés structurellement disposés dans un format 96-WLL à 10 mM dans le DMSO stocks. Chaque plaque maître est répartie dans des plaques de 96 puits de stockage en polypropylène (Corning), et conservés à -80 ° C jusqu&#39;à utilisation. </li><li> Aluminium Bande d&#39;étanchéité pour les plaques 96 puits (Nunc, Rochester, NY). </li><li> DMSO (Sigma, St. Louis, MO). </li><li> Base incubateur, 28,5 ° C (Fisher Scientific). </li><li> Stéréomicroscope avec la base de lumière transmise (Leica Microsystems, Bannockburn, IL). </li></ol>

large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen

Compte tenu de leur taille petit embryon, le développement rapide, la transparence, la fécondité, et de nombreuses similitudes moléculaires, morphologiques et physiologiques chez les mammifères, le poisson-zèbre est apparu comme un puissant<em&gt; In vivo</em&gt; Plate-forme pour les écrans de la drogue basée sur le phénotype et l&#39;analyse chimique génétique. Ici, nous démontrons une méthode simple et pratique pour criblage à grande échelle de petites molécules à partir d&#39;embryons de poisson zèbre.

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Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Le poisson zèbre est apparu comme un puissant<em&gt; In vivo</em&gt; Plate-forme pour les écrans de la drogue basée sur le phénotype et l&#39;analyse chimique génétique. Ici, nous démontrons une méthode simple et pratique pour criblage à grande échelle de petites molécules à partir d&#39;embryons de poisson zèbre.

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Écran petites molécules

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

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