Name: large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen
Uploaded: 2010-12-30T17:00:00
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1) Coleta Egg Zebrafish <ol><li> Na tarde anterior ao dia da tela químicos, criado 10-20 tanques de criação de peixe-zebra. Encher cada tanque com água do sistema de aquicultura. Usando uma rede de pesca, a transferência de um adulto do sexo masculino e 1-2 fêmeas adultas para recipiente interno em cada tanque de criação. Separar os peixes machos e fêmeas do outro com uma divisória. Rótulo as gaiolas e colocar uma tampa em cima deles. </li><li> Na manhã da tela, remover os divisores de tanques de criação...

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	<li>Bayliss, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+receptor+signaling+inhibits+regenerative+angiogenesis+in+adult+zebrafish.">Chemical modulation of receptor signaling inhibits regenerative angiogenesis in adult zebrafish.</a> Nature chemical biology. 2, 265-273 (2006).</li><li>Burns, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+assay+for+small+molecules+that+modulate+zebrafish+embryonic+heart+rate.">High-throughput assay for small molecules that modulate zebrafish embryonic heart rate.</a> Nature chemical biology. 1, 263-264 (2005).</li><li>Hao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+structure-activity+relationship+study+of+dorsomorphin+analogues+identifies+selective+VEGF+and+BMP+inhibitors.">In vivo structure-activity relationship study of dorsomorphin analogues identifies selective VEGF and BMP inhibitors.</a> ACS chemical biology. 5, 245-253 (2010).</li><li>Hong, C. C., Peterson, Q. P., Hong, J. Y., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artery/vein+specification+is+governed+by+opposing+phosphatidylinositol-3+kinase+and+MAP+kinase/ERK+signaling.">Artery/vein specification is governed by opposing phosphatidylinositol-3 kinase and MAP kinase/ERK signaling.</a> Curr Biol. 16, 1366-1372 (2006).</li><li>Milan, D. J., Peterson, T. A., Ruskin, J. N., Peterson, R. T., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+that+induce+repolarization+abnormalities+cause+bradycardia+in+zebrafish.">Drugs that induce repolarization abnormalities cause bradycardia in zebrafish.</a> Circulation. 107, 1355-1358 (2003).</li><li>Peterson, R. T., Link, B. A., Dowling, J. E., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecule+developmental+screens+reveal+the+logic+and+timing+of+vertebrate+development.">Small molecule developmental screens reveal the logic and timing of vertebrate development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12965-12969 (2000).</li><li>Yu, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsomorphin+inhibits+BMP+signals+required+for+embryogenesis+and+iron+metabolism.">Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism.</a> Nature chemical biology. 4, 33-41 (2008).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature reviews. 4, 35-44 (2005).</li><li>Stern, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecules+that+delay+S+phase+suppress+a+zebrafish+bmyb+mutant.">Small molecules that delay S phase suppress a zebrafish bmyb mutant.</a> Nature chemical biology. 1, 366-370 (2005).</li><li>Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+suppression+of+a+genetic+mutation+in+a+zebrafish+model+of+aortic+coarctation.">Chemical suppression of a genetic mutation in a zebrafish model of aortic coarctation.</a> Nature biotechnology. 22, 595-599 (2004).</li></ol>

Ao planejar uma tela químicos baseados em zebrafish, atenção especial deve ser dada a robustez do fenótipo em questão e da taxa de fundo de fenótipo tal. Isto é particularmente importante para as telas de supressores químicos de um fenótipo induzido. Por exemplo, para um fenótipo causado por choque térmico a indução de um transgene, a condição que induz o fenótipo reproducibly deve ser precisamente traçada antes de iniciar a tela para evitar inaceitavelmente elevado as taxas de falsos positivos. Com um ...

<ol><li> Mínimo de 20 pares de peixe-zebra adulto do genótipo desejado. </li><li> Redes de peixes, tanques de criação, com recipiente interno removível e divisores (Habitats Aquáticos). </li><li> Placas de Petri (10 cm). </li><li> Coador de chá de plástico. </li><li> Lavar garrafa de água embrião containg. </li><li> Pipetas de transferência descartável de polietileno. </li><li> Poliestireno de 96 poços de fundo redondo de placas de ensaio (Corning COSTAR; Lowell, MA). </li><li> Pasteur de vidro pipeta (Fisher Scientific). </li><li> Manual da bomba de pipeta, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ). </li><li> Médio embrião E3: 5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl 2, 0,33 mM MgSO 4, contendo 0,003% PTU (feniltio-carbamida, Sigma, St. Louis, MO). PTU pode ser preparado como uma solução 10x dissolvendo 0,3 g-PTU em 1 L de mídia embrião E3. Soluções contendo PTU deve ser protegido da luz, cobrindo com papel alumínio. </li><li> 12 canais pipetas, 20-20 mL (Eppendorf). </li><li> 12 canais pipetas, 300-300 mL (Eppendorf). </li><li> Descartáveis ​​de poliestireno pipeta bacia, 50 mL (Fisher Scientific). </li><li> Biblioteca pequena molécula de compostos estruturalmente diversos, dispostos em um formato de 96 wll menos 10 ações mM em DMSO. Cada prato principal é aliquotado em placas de 96 poços de armazenamento de polipropileno (Corning), e armazenadas a -80 ° C até o uso. </li><li> Vedação de alumínio fita para placas de 96 poços (Nunc, Rochester, NY). </li><li> DMSO (Sigma, St. Louis, MO). </li><li> Básicos incubadora, 28,5 ° C (Fisher Scientific). </li><li> Estereomicroscópio com base de luz transmitida (Leica Microsystems, Bannockburn, IL). </li></ol>

large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen

Dado o seu tamanho pequeno embrião, o rápido desenvolvimento, a transparência, a fecundidade, e numerosas semelhanças moleculares, morfológicas e fisiológicas para os mamíferos, peixe-zebra tem emergido como uma poderosa<em&gt; In vivo</em&gt; Plataforma para telas baseadas em fenótipo de drogas e análise química genética. Aqui, nós demonstramos um método simples e prática em larga escala de triagem de pequenas moléculas usando embriões zebrafish.

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Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Peixe-zebra tem emergido como uma poderosa<em&gt; In vivo</em&gt; Plataforma para telas baseadas em fenótipo de drogas e análise química genética. Aqui, nós demonstramos um método simples e prática em larga escala de triagem de pequenas moléculas usando embriões zebrafish.

Grande Escala Zebrafish-Based In vivo Tela pequena molécula

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

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