Name: large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen
Uploaded: 2010-12-30T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen at JoVE.com

1) la recolección de huevos de pez cebra <ol><li> En la tarde antes del día de la pantalla químicos, creado desde 10 hasta 20 tanques de cría de pez cebra. Llenar cada tanque con agua del sistema de la acuicultura. Utilizando una red de pesca, la transferencia de un macho adulto y uno o dos hembras adultas en el recipiente interior de cada tanque de cría. Separar los peces machos y hembras de unos a otros con un divisor. Etiqueta de las jaulas y poner una tapa sobre ellos. </li><li> En la mañana de la pantalla, ...

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	<li>Bayliss, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+receptor+signaling+inhibits+regenerative+angiogenesis+in+adult+zebrafish.">Chemical modulation of receptor signaling inhibits regenerative angiogenesis in adult zebrafish.</a> Nature chemical biology. 2, 265-273 (2006).</li><li>Burns, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+assay+for+small+molecules+that+modulate+zebrafish+embryonic+heart+rate.">High-throughput assay for small molecules that modulate zebrafish embryonic heart rate.</a> Nature chemical biology. 1, 263-264 (2005).</li><li>Hao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+structure-activity+relationship+study+of+dorsomorphin+analogues+identifies+selective+VEGF+and+BMP+inhibitors.">In vivo structure-activity relationship study of dorsomorphin analogues identifies selective VEGF and BMP inhibitors.</a> ACS chemical biology. 5, 245-253 (2010).</li><li>Hong, C. C., Peterson, Q. P., Hong, J. Y., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artery/vein+specification+is+governed+by+opposing+phosphatidylinositol-3+kinase+and+MAP+kinase/ERK+signaling.">Artery/vein specification is governed by opposing phosphatidylinositol-3 kinase and MAP kinase/ERK signaling.</a> Curr Biol. 16, 1366-1372 (2006).</li><li>Milan, D. J., Peterson, T. A., Ruskin, J. N., Peterson, R. T., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+that+induce+repolarization+abnormalities+cause+bradycardia+in+zebrafish.">Drugs that induce repolarization abnormalities cause bradycardia in zebrafish.</a> Circulation. 107, 1355-1358 (2003).</li><li>Peterson, R. T., Link, B. A., Dowling, J. E., Schreiber, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecule+developmental+screens+reveal+the+logic+and+timing+of+vertebrate+development.">Small molecule developmental screens reveal the logic and timing of vertebrate development.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12965-12969 (2000).</li><li>Yu, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsomorphin+inhibits+BMP+signals+required+for+embryogenesis+and+iron+metabolism.">Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism.</a> Nature chemical biology. 4, 33-41 (2008).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature reviews. 4, 35-44 (2005).</li><li>Stern, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+molecules+that+delay+S+phase+suppress+a+zebrafish+bmyb+mutant.">Small molecules that delay S phase suppress a zebrafish bmyb mutant.</a> Nature chemical biology. 1, 366-370 (2005).</li><li>Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+suppression+of+a+genetic+mutation+in+a+zebrafish+model+of+aortic+coarctation.">Chemical suppression of a genetic mutation in a zebrafish model of aortic coarctation.</a> Nature biotechnology. 22, 595-599 (2004).</li></ol>

Cuando se planifica una pantalla de química basada en el pez cebra, se debe prestar especial atención a la solidez del fenotipo en estudio y la tasa previa de tal fenotipo. Esto es particularmente importante para las pantallas de los supresores de química de un fenotipo inducido. Por ejemplo, para un fenotipo causado por la inducción de choque térmico de un transgén, la condición que induce el fenotipo debe ser reproducible con precisión trazado antes de iniciar la pantalla para evitar inaceptablemente altos ín...

<ol><li> Mínimo de 20 parejas de adultos de pez cebra de genotipo deseado. </li><li> Redes de pesca, los tanques de cría, con el recipiente interior extraíble y separadores (hábitats acuáticos). </li><li> Placas de Petri (10 cm). </li><li> Colador de plástico. </li><li> Lavado de botellas de agua contendo embrión. </li><li> Pipetas desechables de polietileno de transferencia. </li><li> Poliestireno de 96 pocillos de fondo redondo de las placas de ensayo (Corning Costar, Lowell, MA). </li><li> Vidrio pipeta Pasteur (Fisher Scientific). </li><li> Manual pipeta bomba, 10 ml (Bel-Art Products, Pequannock, NJ). </li><li> Medio embrión E3: 5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl 2, 0,33 mM MgSO 4, que contiene 0,003% PTU (feniltio-carbamida, Sigma, St. Louis, MO). PTU se puede preparar como una solución de 10 veces por disolución de 0,3 g PTU en 1 litro de los medios de comunicación embrión E3. Las soluciones que contienen PTU debe ser protegido de la luz cubriendo con papel de aluminio. </li><li> 12 canales de pipetas, 20.2 l (Eppendorf). </li><li> 12 canales de pipetas, 300-300 l (Eppendorf). </li><li> Desechables de poliestireno pipeta de la cuenca, 50 mL (Fisher Scientific). </li><li> Biblioteca de moléculas pequeñas de compuestos estructuralmente diferentes dispuestos en un formato de 96 wll en acciones 10 mM en DMSO. Cada placa principal se dividió en alícuotas en placas de 96 pozos de almacenamiento de polipropileno (Corning) y se almacenan a -80 ° C hasta su uso. </li><li> Aluminio cinta aislante para placas de 96 pocillos (Nunc, Rochester, NY). </li><li> DMSO (Sigma, St. Louis, MO). </li><li> Básicos incubadora, 28,5 ° C (Fisher Scientific). </li><li> Estereomicroscopio con la base de luz transmitida (Leica Microsystems, Bannockburn, IL). </li></ol>

large scale zebrafish-based in vivo small molecule screen

Debido a su tamaño pequeño embrión, el rápido desarrollo, la transparencia, la fecundidad, y numerosas similitudes moleculares, morfológicas y fisiológicas de los mamíferos, el pez cebra se ha convertido en un poderoso<em&gt; In vivo</em&gt; Plataforma para las pantallas de drogas basada en el fenotipo y el análisis químico genético. Aquí, demostramos un método sencillo y práctico a gran escala de detección de moléculas pequeñas con embriones de pez cebra.

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Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Pez cebra se ha convertido en un poderoso<em&gt; In vivo</em&gt; Plataforma para las pantallas de drogas basada en el fenotipo y el análisis químico genético. Aquí, demostramos un método sencillo y práctico a gran escala de detección de moléculas pequeñas con embriones de pez cebra.

A gran escala basado en pez cebra En vivo Pantalla de moléculas pequeñas

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

A gran escala de pantallas de bibliotecas metagenómicas

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Investigación

Biología

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