Name: quantifying synapses: an immunocytochemistry-based assay to quantify synapse number
Uploaded: 2010-11-16T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number at JoVE.com

في مختبر بن ألف Barres (جامعة ستانفورد) : نقاط والمكونات في صورة كانت مكتوبة من قبل J ارك باري (استشارات Physion العنوان الحالي) محلل التمويل ؛ <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ألفريد سلون مؤسسة P. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ألف لاستير وجوزيف Klingenstein الصندوق ، وشركة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤسسة بحوث الطبية الحيوية واسعة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج لمرض هنتنغتون مبادرة ليالي </li></ul>

حلول لإعداد : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأضداد الاحتياطي : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 150 مم كلوريد الصوديوم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ملي تريس للقاعدة (فيشر ، القط لا : BP152 - 5 ، 50 ملم) -- 1،21 ز </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ٪ BS...

<ol>
	<li>Barres, B. A., Silverstein, B. E., Corey, D. P., Chun, L. L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological,+morphological,+and+electrophysiological+variation+among+retinal+ganglion+cells+purified+by+panning.">Immunological, morphological, and electrophysiological variation among retinal ganglion cells purified by panning.</a> Neuron. 1, 791-803 (1988).</li><li>Meyer-Franke, A., Kaplan, M. R., Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+signaling+interactions+that+promote+the+survival+and+growth+of+developing+retinal+ganglion+cells+in+culture.">Characterization of the signaling interactions that promote the survival and growth of developing retinal ganglion cells in culture.</a> Neuron. 15, 805-819 (1995).</li><li>Eroglu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gabapentin+receptor+alpha2delta-1+is+a+neuronal+thrombospondin+receptor+responsible+for+excitatory+CNS+synaptogenesis.">Gabapentin receptor alpha2delta-1 is a neuronal thrombospondin receptor responsible for excitatory CNS synaptogenesis.</a> Cell. 139, 380-392 (2009).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 .</li><li>Ullian, E. M., Sapperstein, S. K., Christopherson, K. S., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+synapse+number+by+glia.">Control of synapse number by glia.</a> Science. 291, 657-661 (2001).</li><li>Christopherson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombospondins+are+astrocyte-secreted+proteins+that+promote+CNS+synaptogenesis.">Thrombospondins are astrocyte-secreted proteins that promote CNS synaptogenesis.</a> Cell. 120, 421-433 (2005).</li><li>Godement, P., Salaun, J., Imbert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+and+postnatal+development+of+retinocollicular+projections+in+the+mouse.">Prenatal and postnatal development of retinocollicular projections in the mouse.</a> J. Comp. Neurol. 230, 552-575 (1985).</li><li>Schmidt, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+retinotopic+connections:+selective+stabilization+by+an+activity-dependent+mechanism.">Formation of retinotopic connections: selective stabilization by an activity-dependent mechanism.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 5, 65-84 (1985).</li><li>Sachs, G. M., Jacobson, M., Caviness, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+changes+in+arborization+patterns+of+murine+retinocollicular+axons.">Postnatal changes in arborization patterns of murine retinocollicular axons.</a> J. Comp. Neurol. 246, 395-408 (1986).</li><li>Elmariah, S. B., Oh, E. J., Hughes, E. G., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+regulate+inhibitory+synapse+formation+via+Trk-mediated+modulation+of+postsynaptic+GABAA+receptors.">Astrocytes regulate inhibitory synapse formation via Trk-mediated modulation of postsynaptic GABAA receptors.</a> J. Neurosci. 25, 3638-3650 (2005).</li><li>Hughes, E. G., Elmariah, S. B., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte+secreted+proteins+selectively+increase+hippocampal+GABAergic+length,+branching+and+synaptogenesis.">Astrocyte secreted proteins selectively increase hippocampal GABAergic length, branching and synaptogenesis.</a> Moll. Cell. Neurosci. 43, 136-145 (2010).</li></ol>

يستند مقايسة المشبك المذكورة أعلاه في سياق أهدافنا التجريبية ، حيث نركز بشكل كبير على توقعات مثير للRGCs ، سواء في الثقافة أو المنقى في القسم الدماغ. لقد قدمنا ​​قائمة الأضداد مرجع الجدول الذي تعمل بشكل جيد لوضع العلامات نقاط الاشتباك العصبي مثير (الجدول 1). <p class="jove_...

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> مولد المضاد </td><td> نوع </td><td> وحيدة النسيلة / النسائل المتعددة </td><td> بائع </td><td> رقم كتالوج </td><td> تخفيف </td><td> يعمل في الثقافة </td><td> يعمل في القسمين </td></tr><tr><td rowspan="10"> قبل المشبكي </td><td> Synapsin </td><td> أرنب </td><td> النسائل المتعددة </td><td> نظم متشابك </td><td> 106004 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synapsin </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> نظم متشابك </td><td> 106001 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> الباسون </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> مقايسة تصاميم </td><td> VAM - PS003F </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> الباسون </td><td> خنزير البحر الهندي </td><td> النسائل المتعددة </td><td> نظم متشابك </td><td> 141004 </td><td> 1:1000 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> Synaptotagmin 1 </td><td> أرنب </td><td> النسائل المتعددة </td><td> نظم متشابك </td><td> 105002 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> Synaptobrevin 2 (C1.69.1) </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> نظم متشابك </td><td> 104211 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Synaptophysin (C1.7.2) </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> نظم متشابك </td><td> 101011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut1 </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> ميليبور </td><td> MAB5502 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut1 </td><td> خنزير البحر الهندي </td><td> النسائل المتعددة </td><td> ميليبور </td><td> AB5905 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> VGlut2 </td><td> خنزير البحر الهندي </td><td> النسائل المتعددة </td><td> ميليبور </td><td> AB2251 </td><td> 1:2500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td rowspan="6"> بعد المشبكي </td><td> PSD - 95 (6G6 - 1C9 استنساخ) </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> تقارب بيو الكواشف </td><td> MA1 - 045 </td><td> 1:750 </td><td> Y </td><td> N </td></tr><tr><td> PSD - 95 </td><td> أرنب </td><td> النسائل المتعددة </td><td> Zymed </td><td> 51-6900 </td><td> 1:500 </td><td> N </td><td> Y </td></tr><tr><td> هوميروس </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> نظم متشابك </td><td> 160011 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> ND </td></tr><tr><td> هوميروس </td><td> فأر </td><td> النسائل المتعددة </td><td> ميليبور </td><td> AB5875 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> أرنب </td><td> النسائل المتعددة </td><td> نظم متشابك </td><td> 147003 </td><td> 1:500 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr><tr><td> Gephyrin </td><td> فأر </td><td> وحيدة النسيلة </td><td> نظم متشابك </td><td> 147 </td><td> 1:200 </td><td> Y </td><td> Y </td></tr></tbody></table> الجدول 1 : أمثلة على قوائم علامات جيدة قبل وبعد المشبكي أننا استخدمت بنجاح في مقايسة المشبك لدينا. أن تدرك أن هذه ليست قائمة شاملة لجميع العلامات المتاحة. Y = نعم ، N = لا ، ND = غير محدد. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> القط. رقم </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 20012-027 </td></tr><tr><td> بولي د يسين </td><td> سيغما </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Cultrex </td><td> 3400-010-01 </td></tr><tr><td> تريتون X - 100 </td><td> روش تشخيص جى ام بى اتش </td><td> 9002-93-1 </td></tr><tr><td> مصل طبيعي عنزة </td><td> Gibco </td><td> 16210 </td></tr><tr><td> VectaShield مع دابي </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> H - 1200 </td></tr><tr><td> أكتوبر </td><td> نسيج تيك </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> تريس للقاعدة (50 ملم) </td><td> الصياد </td><td> BP152 - 5 </td></tr><tr><td> الأبقار مصل الزلال </td><td> سيغما </td><td> A2153 </td></tr><tr><td> L - يسين </td><td> سيغما </td><td> L - 1137 </td></tr><tr><td> 16 ٪ PFA الحل </td><td> الإلكترون المجهر العلوم </td><td> 15711 </td></tr><tr><td> الحبيبية PFA </td><td> الإلكترون المجهر العلوم </td><td> 19210 </td></tr><tr><td> 24 لوحة جيدا ثقافة </td><td> صقر </td><td> 35-3047 </td></tr><tr><td> الماعز المضادة للأضداد الفأر اليكسا مترافق </td><td> Invitrogen </td><td> --- </td></tr><tr><td> تزويد </td><td> شركة </td><td> القط. رقم </td></tr><tr><td> 12mm ، 0 رقم coverslips الزجاج </td><td> كارل هيشت جى ام بى اتش </td><td> 1105209 </td></tr><tr><td> رقم 1.5 ساترة الزجاج (لشرائح) </td><td> VWR العلمية </td><td> 48393241 </td></tr><tr><td> الشرائح الزجاجية </td><td> VWR العلمية </td><td> 48311-703 </td></tr></tbody></table>

quantifying synapses: an immunocytochemistry-based assay to quantify synapse number

واحدة من أهم الأهداف في علم الأعصاب هو فهم الاشارات الجزيئية التي توعز المراحل الأولى من تشكيل المشبك. على هذا النحو أصبح من الضروري وضع نهج موضوعي لقياس التغييرات في اتصال متشابك. بدءا من تثبيت العينة ، وهذا البروتوكول تفاصيل كيفية تحديد عدد المشبك في كل ثقافة العصبية وفصلها في أقسام المخ باستخدام كيمياء سيتولوجية مناعية. المقصورة الخاصة به الأضداد ، ونحن تسمية محطات قبل المشبكي وكذلك المواقع ذات التخصص بعد المشبكي. نحدد نقاط الاشتباك العصبي كنقاط colocalization بين الإشارات التي تولدها هذه العلامات. وكميا في عدد من هذه colocalizations باستخدام المكونات في محلل نقاط و(كتبه ارك البارى ، متوفرة عند الطلب ، c.eroglu @ cellbio.duke.edu) في إطار برنامج ImageJ منصة التحليل. يمكن تطبيق مقايسة المشبك وصفها في هذا البروتوكول إلى أي تحضير الأنسجة العصبية أو الثقافة التي لديك علامات انتقائية قبل وبعد المشبكي. هذا الاختبار المشبك هو أداة قيمة التي يمكن استخدامها على نطاق واسع في دراسة التنمية متشابك.

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number at JoVE.com

Quantifying Synapses: an Immunocytochemistry-based Assay to Quantify Synapse Number

هذا البروتوكول تفاصيل كيفية تحديد عدد المشبك في كل ثقافة العصبية وفصلها في أقسام المخ باستخدام كيمياء سيتولوجية مناعية. المقصورة الخاصة به الأضداد ، ونحن تسمية محطات قبل المشبكي وكذلك المواقع ذات التخصص بعد المشبكي. نحدد نقاط الاشتباك العصبي كنقاط colocalization بين الإشارات التي تولدها هذه العلامات.

قياس الوصلات العصبية : حدث الفحص كيمياء سيتولوجية مناعية القائم على القياس الكمي للعدد سنبس

One of the most important goals in neuroscience is to understand the molecular cues that instruct early stages of synapse formation. As such it has become ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

An Engulfment Assay: A Protocol to Assess Interactions Between CNS Phagocytes and Neurons

على الإحاطة الفحص: بروتوكول لتقييم التفاعلات بين الخلايا العصبية والجهاز العصبي المركزي البالعات

Phagocytosis is a process in which a cell engulfs material (entire cell, parts of a cell, debris, etc.) in its surrounding extracellular environment and ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

عالية الدقة التحليل الكمي Immunogold من غشاء المستقبلات في الشبكية نقاط الاشتباك العصبي الشريط

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

الطريقة الكهربية لالردود تسجيل بين الخلايا الجهد ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء وInterneurons إلى النور المحفزات<em&gt; في فيفو</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

كتلة الأنسجة لتحديد تنكس عصبي في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Progressive neurodegenerative diseases like Alzheimer&#39;s disease (AD) or Parkinson&#39;s disease (PD) are an increasing threat to human health ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

تقييم كثافة المشبك في الدماغ القوارض هيبوكامبال شرائح

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

التنمية المقايسة للقياس الكمي المحتوى عالية Sod1 البروتين متحولة تشكيل التجميعية في الخلايا الحية

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Visualization of Thalamocortical Axon Branching and Synapse Formation in Organotypic Cocultures

التصور إكسون ثالاموكورتيكال المتفرعة والمشبك تشكيل في كوكولتوريس أورجانوتيبيك

Axon branching and synapse formation are crucial processes for establishing precise neuronal circuits. During development, sensory thalamocortical (TC) ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

طريقة محسنة لجمع السائل الدماغي النخاعي من الفئران تخديره

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Purification of the Dendritic Filopodia-rich Fraction

تنقية الكسر الدندي الغنية فيلبوديا

Dendritic filopodia are thin and long protrusions based on the actin filament, and they extend and retract as if searching for a target axon. When the ...