Name: preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00
Duration: 14 min 57 s
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Lavoro sostenuto da NIH concedere AG027297, un premio dal Kentucky Spinal Cord Injury e fiducia capo della ricerca, e un dono da parte della Fondazione Kleberg.

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	<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase/phosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging.">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li><li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging.">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li><li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+'zipper'+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca(2+)+channels+with+aging.">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li><li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics.">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain.">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li><li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+changes+in+Ca(2+)-dependent+processes:+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity.">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li><li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer's+disease:+minding+the+store.">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li><li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease.">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li><li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer's+disease.">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li><li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1.">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2++channels.">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li><li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury.">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li><li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin/NFAT+activity.">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li><li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+large-conductance+Ca(2+)-activated+K(+)+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+(swe/ind)+TgCRND8+mice.">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li><li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity:+LTP+and+LTD.">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline.">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li><li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats.">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li><li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation.">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li><li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats.">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li><li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATs+and+Alzheimer's+Disease.">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li><li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+decline+in+Alzheimer's+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin/NFAT+signaling.">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li><li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase:+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH/NLH+X+PS-1P264L/P264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li><li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP/PS1+mouse+model+of+Alzheimer's+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice.">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li><li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses.">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li><li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+high+Mg2+-to-Ca2++ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats.">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li><li>Ames, A., Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NA,+K,+CA,+MG,+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE.">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li><li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2+-induced+Ca2++release.">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li><li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+postsynaptic+[Ca2+]i+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons:+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity.">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li><li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging.">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li><li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer's-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2++signals+and+altered+membrane+excitability.">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li><li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2++disruptions+in+young,+adult,+and+aged+Alzheimer's+disease+mice.">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li><li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats.">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li><li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata:+cooperativity+among+coactive+afferents.">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li></ol>

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La procedura descritta in questo protocollo aiuterà ad assicurare che dissezioni del cervello sono effettuati almeno più rapidamente ed efficacemente in età, come nei ratti adulti giovani. Inoltre fornisce dettagli sufficienti per il principiante di stabilire la loro fetta propri studi su LTP e LTD. Se ulteriori esplorazioni di invecchiamento e le modifiche dC in funzione sinaptica e la plasticità è uno dei vostri obiettivi, ci sono almeno due altre questioni metodologiche, accennato sopra, che meritano ulteriore considerazione. In primo luogo, molti laboratori hanno dimostrato che il Ca 2 +: Mg2 + in rapporto registrazione ACSF può avere un effetto marcato sulla plasticità sinaptica induzione in fettine di ippocampo 2,10,24,25. Nel liquor dei mammiferi, il Ca 2 +: Mg2 + rapporto è di circa un (vedi ad esempio 26). Tuttavia, ACSF Ca 2 +: Mg2 + rapporto più vicino al 2 sono comunemente utilizzati negli studi fetta di funzione sinaptica e della plasticità. Nei primi studi, questa pratica era probabilmente adattato per ottimizzare l&#39;induzione di LTP, poi successivamente è diventato di routine per tutti gli studi plasticità. Tuttavia, questa pratica può essere problematico in studi di invecchiamento e dC a causa delle differenze ben caratterizzato in neuronale Ca 2 + regolamento. In particolare, Ca 2 + afflusso e / o Ca 2 + indotto da Ca 2 +-release è elevato in ratti anziani e / o topi modello dC durante l&#39;attivazione neuronale 3,27-31. Induzione di LTD è particolarmente sensibile ai cambiamenti sottili ACSF Ca 2 + livelli. Il nostro protocollo, che utilizza 2mM Ca 2 + e 2 mM Mg2 +, comunemente risultati LTD per anziani, ma non animali giovani adulti 2, mentre gli studi con un Ca 2 +: Mg2 rapporto + vicino a due, hanno osservato LTD robusto negli adulti in assenza di una differenza di età 2,10 o in combinazione con LTD ridotto nei ratti di 32 anni. Queste osservazioni evidenziano la necessità di considerare attentamente ACSF Ca 2 + e Mg2 + quando si confrontano livelli di Ca 2 +-dipendente plasticità in animali adulti anziani e giovani. Il secondo problema metodologico riguarda la forte dipendenza della LTP in depolarizzazione postsinaptica 33 e possibile l&#39;invecchiamento / genotipo differenze nella forza sinaptica. In un esperimento tipico LTP, al basale e l&#39;intensità di stimolazione LTP è generalmente regolata per produrre una mezza massimo (o di tre quarti massima) EPSP ampiezza. Il problema potenziale è che ratti anziani e APP/PS1 topi di solito mostrano una ridotta forza sinaptica rispetto alle loro controparti più giovani tipo e / o selvatici, il che significa che i valori basali EPSP sarà anche più piccolo in ratti anziani e APP/PS1 topi. Piccoli EPSPS può tradurre a meno depolarizzazione durante la stimolazione LTP, con un conseguente probabilità ridotta per indurre LTP 33. A causa di questo potenziale confondere, è difficile stabilire se questi animali presentano un deficit di produttività, un deficit di plasticità o entrambi. Cioè, i meccanismi di induzione LTP in età e / o APP/PS1 topi possono essere funzionalmente intatta (nessun deficit di plasticità), ma non sufficientemente stimolato (deficit di throughput) in queste condizioni. Questa distinzione è fondamentale, come i meccanismi di velocità e meccanismi di plasticità può rispondere in modo molto diverso a un determinato trattamento farmacologico. Cerchiamo di minimizzare l&#39;impatto di throughput ridotto sull&#39;induzione LTP normalizzando l&#39;ampiezza EPSP allo stesso livello (ad esempio 1 mV) in tutte le sezioni prima di stimolazione LTP. Altre strategie possono essere efficaci anche (ad esempio l&#39;uso di tensione o corrente pinza per equalizzare il potenziale di membrana tra i gruppi durante la stimolazione LTP), e deve essere considerata nell&#39;ambito delle indagini sulla LTP in questi modelli animali.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Pescatore </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Pescatore </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monobasico) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (diidrato) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Pescatore </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (destrosio) </td><td> Pescatore </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Reagenti Tabella 1. Necessaria <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Beute </td><td> Pescatore </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Acquario Bubbler </td><td></td><td></td><td> Utilizzati per i media ossigenante. Disponibile nella maggior parte negozi di animali </td></tr><tr><td> 50 ml di vetro bicchiere </td><td> Pescatore </td><td> 02-540g </td><td> Per storarge cervello in ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescatore </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Animali piccola ghigliottina </td><td> Mondo Strumenti di precisione (WPI) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Tovagliolo di carta piatto </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 Feather lama chirurgica </td><td> Pescatore </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee osso forbici </td><td> Strumenti Scienza Fine (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8321 </td><td> Utilizzare per i ratti </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> Da utilizzare per topi o ratti </td></tr><tr><td> Hippocampus strumento </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Cucchiaio </td><td></td><td></td><td> Un cucchiaino di plastica farà </td></tr><tr><td> Spatola </td><td> Pescatore </td><td> 21-401-25A </td><td> Spatola </td></tr><tr><td> Iris forbici chirurgiche </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> pipette di trasferimento di plastica </td><td> Pescatore </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 millimetri filtro di carta Whatman </td><td> Pescatore </td><td> 09-805E </td><td> Cat Whatman. 1001-110 </td></tr><tr><td> Vetro scatola di Petri </td><td> Pescatore </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P manuale vibrante microtomo </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0,1 millimetri FA-10 Feather S lama </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> 0,1 millimetri FA-10 Feather S lama </td></tr><tr><td> Pipettare Pasteur in vetro borosilicato (con gommino) </td><td> Pescatore </td><td> 13-678-20A </td><td> Per il trasferimento di fette: Tip è rotto e il calore-lucido per le più grandi di apertura </td></tr><tr><td> Piatto 35 millimetri Cultura Polysterine </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Utilizzati per la raccolta fette dopo la dissezione </td></tr></tbody></table> Strumenti tabella 2. E materiali per la dissezione <table border="1"><tbody><tr><td> Attrezzature / Materiali </td><td> Azienda </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Tenendo camera </td><td> Custom Built </td><td></td></tr><tr><td> P-97 orizzontale pipette Puller </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Isolamento dalle vibrazioni tavolo </td><td> Tecnico Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Gabbia di Faraday </td><td> Su misura </td><td></td></tr><tr><td> Pirex Bottiglia Aspiratore con Sidearm inferiore (Product # 1220-1L) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Gravità contolled serie IV con regolatore (Product # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Vuoto Central Line </td><td></td><td> Disponibile nella maggior parte dei laboratori moderni </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% di CO 2 Mix Gas </td><td> Scozzeset-Gross Co. </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM Lab tubi Per O 2 / CO 2 di consegna </td><td> Fisher Scientific </td><td> Non tossico, non ossidanti, è disponibile in una varietà di formati. </td></tr><tr><td> Eclipse E600FN Microscopio </td><td> Nikon </td><td> con obiettivi 10x e 40x, vicino infared filtro, e GFP, DS-Rosso2 filtri </td></tr><tr><td> Raffreddare ES Snap Digital Camera </td><td> Fotometrici </td><td> Raffreddare ES Snap Digital Camera </td></tr><tr><td> X-Cite Illuminatore fluorescente </td><td> EXFO </td><td> X-Cite Illuminatore fluorescente </td></tr><tr><td> Microscopio Piattaforma </td><td> Siskiyou </td><td> Assemblati su misura </td></tr><tr><td> RC-22 sommergibili camera di registrazione (Product # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Richiede P-1 adattatore piattaforma e lo stadio (Product # 64-0277 da Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch Regolatore di temperatura </td><td> Cellula Microcontrols </td><td> TC2BIP 2/3Ch Regolatore di temperatura </td></tr><tr><td> 4 assi manuale manipolatore in miniatura </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> Filo di platino iridio (0,002 in) (Articolo # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Stimolo isolatore </td><td> WPI </td><td> A365 Stimolo isolatore </td></tr><tr><td> Multiclamp Amplificatore 700B </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A convertitore A / D </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> PClamp software </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Personal Computer (Pentium 4) </td><td> Conca </td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 3. Elettrofisiologia attrezzature e materiali

preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology

L&#39;ippocampo preparazione fetta roditore è forse lo strumento più largamente utilizzato per lo studio dei mammiferi funzione sinaptica e la plasticità. L&#39;ippocampo può essere estratto rapidamente e facilmente da ratti e topi e fette rimangono vitali per ore in ossigenato artificiale liquido cerebrospinale. Inoltre, le tecniche di base electrophysisologic sono facilmente applicati allo studio di funzione sinaptica in fettine di ippocampo e hanno fornito alcuni dei migliori marcatori di disturbi cognitivi. La fetta ippocampo è particolarmente popolare per lo studio dei meccanismi di plasticità sinaptica coinvolti nell&#39;apprendimento e nella memoria. Cambiamenti nella induzione di potenziamento a lungo termine e la depressione (LTP e LTD) di efficacia sinaptica in fettine di ippocampo (o la loro mancanza) sono spesso usate per descrivere il fenotipo neurologico di animali con problemi cognitivo e / o per valutare il meccanismo d&#39;azione di composti nootropica. Questo articolo descrive le procedure che utilizziamo per la preparazione di fettine di ippocampo di ratti e topi transgenici per lo studio delle alterazioni sinaptiche del cervello associata con l&#39;invecchiamento e la malattia di Alzheimer (AD) 1-3. Uso dei ratti anziani e topi modello AD può presentare una serie di sfide per i ricercatori abituati ad usare i ratti più giovani e / o topi nelle loro ricerche. Ratti anziani hanno spesso teschi e più dura del tessuto connettivo più giovani ratti e topi, che può ritardare l&#39;estrazione del cervello e / o di dissezione e di conseguenza negare o esagerare reali differenze età-correlate in funzione sinaptica e la plasticità. Invecchiamento e patologia amiloide può anche aggravare i danni subiti dell&#39;ippocampo durante la procedura di dissezione, di nuovo complicando ogni deduzioni tratte dalla valutazione fisiologica. Qui, discutiamo i passi compiuti durante la procedura di dissezione per minimizzare questi problemi. Esempi di risposte sinaptiche acquisite in &quot;buona salute&quot; e &quot;malsana&quot; fette di ratti e topi vengono forniti, oltre che rappresentante esperimenti di plasticità sinaptica. L&#39;eventuale impatto di altri fattori metodologici sulla funzione sinaptica in questi modelli animali (ad esempio i componenti della soluzione di registrazione, i parametri di stimolazione) vengono anche discussi. Mentre l&#39;attenzione di questo articolo è l&#39;utilizzo di ratti anziani e topi transgenici, i novizi di tagliare fisiologia dovrebbe trovare abbastanza dettagli qui per iniziare i propri studi, utilizzando una varietà di modelli di roditori.

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Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Questo articolo descrive le procedure per la preparazione di fettine di ippocampo di ratti e topi transgenici per lo studio delle alterazioni sinaptiche associate con l&#39;invecchiamento cerebrale e le malattie neurodegenerative legate all&#39;età, come la malattia di Alzheimer.

Preparazione di acuta fettine di ippocampo di ratti e topi transgenici per lo studio delle alterazioni sinaptiche durante l&#39;invecchiamento e Amiloide Patologia

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric &#946;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparazione di oligomeriche β-amiloide 1-42 E induzione di Impairment plasticità sinaptica in fettine di ippocampo

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Ricerca

Neuroscienze

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation di neuroni da fettine di cervello di roditore studio di trasmissione sinaptica e Immagine terminali presinaptici

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Preparazione di acuta fette zona subventricolare for Imaging di calcio

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Due registrazioni elettrofisiologiche di sinapticamente-evocati Risposte astrogliale e neuronale in acute fettine di ippocampo

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Infuso stereotassico di Oligomeric amiloide-beta nelle Hippocampus mouse

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Indagine di Synaptic Tagging / Cattura e Cross-cattura utilizzando acuta fettine di ippocampo da Roditore

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparazione di fettine di cervello acuto utilizzando un' ottimizzata N-metilico-D-metodo di ripristino protettivo glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Registrazione di plasticità sinaptica in fettine ippocampali Acute mantenuti in un piccolo volume riciclaggio - aspersione- e sistema di immersione-tipo camera

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Indicatori di sinapsi singola di Soldamento Release e Uptake in Acute Brain Slices da Topi Normali e Huntington

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Preparazione di fette acute di ippocampale umano per registrazioni elettrofisiologiche

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...