Name: preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

Trabalho apoiado pelo NIH conceder AG027297, um prêmio do Cabo de Kentucky e Confiança Spinal Injury Research cabeça, e um presente da Fundação Kleberg.

<ol>
	<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase/phosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging.">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li><li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging.">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li><li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+'zipper'+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca(2+)+channels+with+aging.">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li><li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics.">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain.">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li><li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+changes+in+Ca(2+)-dependent+processes:+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity.">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li><li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer's+disease:+minding+the+store.">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li><li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease.">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li><li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer's+disease.">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li><li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1.">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2++channels.">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li><li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury.">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li><li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin/NFAT+activity.">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li><li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+large-conductance+Ca(2+)-activated+K(+)+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+(swe/ind)+TgCRND8+mice.">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li><li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity:+LTP+and+LTD.">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline.">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li><li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats.">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li><li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation.">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li><li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats.">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li><li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATs+and+Alzheimer's+Disease.">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li><li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+decline+in+Alzheimer's+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin/NFAT+signaling.">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li><li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase:+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH/NLH+X+PS-1P264L/P264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li><li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP/PS1+mouse+model+of+Alzheimer's+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice.">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li><li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses.">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li><li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+high+Mg2+-to-Ca2++ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats.">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li><li>Ames, A., Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NA,+K,+CA,+MG,+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE.">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li><li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2+-induced+Ca2++release.">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li><li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+postsynaptic+[Ca2+]i+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons:+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity.">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li><li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging.">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li><li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer's-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2++signals+and+altered+membrane+excitability.">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li><li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2++disruptions+in+young,+adult,+and+aged+Alzheimer's+disease+mice.">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li><li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats.">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li><li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata:+cooperativity+among+coactive+afferents.">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li></ol>

A produção deste vídeo-artigo foi patrocinado pela Leica Microsystems.

Os passos descritos neste protocolo vai ajudar a garantir que dissecações do cérebro são realizadas pelo menos tão rapidamente e eficientemente em idosos, como em ratos adultos jovens. Nós também fornecemos detalhes suficientes para o iniciante a criarem a sua própria fatia estudos sobre LTP e LTD. Se uma maior exploração do envelhecimento e as mudanças AD em função sináptica e plasticidade é um dos seus objetivos, existem pelo menos duas outras questões metodológicas, aludido acima, que merecem análise mais aprofundada. Primeiro, vários laboratórios têm mostrado que o Ca 2 +: Mg2 + taxa em gravação ACSF pode ter um efeito marcante sobre a plasticidade sináptica indução em fatias do hipocampo 2,10,24,25. CSF em mamíferos, o Ca 2 +: Mg2 + taxa é de aproximadamente um (por exemplo, ver 26). No entanto, ACSF Ca 2 +: Mg2 + taxas mais próximas a 2 são comumente usados ​​em estudos fatia de função sináptica e plasticidade. Nos primeiros estudos, esta prática foi provavelmente adaptado para otimizar a indução da LTP e, posteriormente tornou-se rotina para todos os estudos de plasticidade. No entanto, esta prática pode ser problemático em estudos de envelhecimento e AD por causa das diferenças bem caracterizadas em Ca 2 neuronal regulação +. Especificamente, Ca 2 + fluxo e / ou Ca 2 + induzida por Ca 2 +-lançamento é elevada em ratos idosos e / ou camundongos modelo AD durante a ativação neuronal 3,27-31. Indução de LTD é particularmente sensível a mudanças sutis na ACSF Ca 2 + níveis. Nosso protocolo, que usa 2mM Ca 2 + e 2 mM Mg2 +, geralmente resulta em LTD para idosos, mas não jovens animais adultos 2, enquanto que estudos usando um Ca 2 +: Mg2 + relação próxima dos dois, observaram LTD robusta em adultos no ausência de uma diferença de idade 2,10 ou em conjunto com LTD reduzidos em ratos de 32 anos. Estas observações evidenciam a necessidade de considerar cuidadosamente ACSF Ca 2 + e Mg 2 + quando se comparam os níveis de Ca 2 + dependentes de plasticidade em animais adultos idosos e jovens. A segunda questão metodológica diz respeito à forte dependência da LTP na despolarização pós-sináptica 33 e possíveis envelhecimento / genótipo diferenças na força sináptica. Em um experimento de LTP típica, linha de base e LTP a intensidade do estímulo é geralmente ajustada para produzir uma meia máxima (ou três quartos máxima) amplitude EPSP. O problema potencial é que os ratos idosos e APP/PS1 ratos geralmente mostram redução da força sináptica em relação aos seus colegas mais jovens tipo e / ou selvagens, o que significa que os valores EPSP base também será menor em ratos idosos e APP/PS1 camundongos. EPSPs menores podem traduzir para menos despolarização durante a estimulação LTP, resultando em uma menor probabilidade de induzir LTP 33. Devido a isso confundir potencial, é difícil determinar se esses animais apresentam um déficit de transmissão, o déficit de plasticidade, ou ambos. Ou seja, mecanismos de indução de LTP em idade e / ou APP/PS1 ratos podem ser funcionalmente intacto (sem déficit de plasticidade), mas insuficientemente estimuladas (déficit throughput) nessas condições. Esta distinção é fundamental, como mecanismos de transferência e os mecanismos de plasticidade podem responder de forma muito diferente a um tratamento farmacológico específico. Tentamos minimizar o impacto da vazão reduzida na indução de LTP através da normalização da amplitude EPSP ao mesmo nível (por exemplo, 1 mV) em todas as fatias anterior à estimulação LTP. Outras estratégias podem ser eficazes, bem como (por exemplo, utilização de tensão ou pinça de corrente para igualar o potencial de membrana entre os grupos durante a estimulação LTP), e devem ser considerados quando se investiga LTP nestes modelos animais.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Pescador </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Pescador </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monossódico) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (di) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Pescador </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (dextrose) </td><td> Pescador </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Reagentes tabela 1. Necessárias <table border="1"><tbody><tr><td> Nome do equipamento </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Erlenmeyers </td><td> Pescador </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Aquarium Bubbler </td><td></td><td></td><td> Usado para oxigenar mídia. Disponíveis na maioria das lojas de animais </td></tr><tr><td> 50 copo de vidro mL </td><td> Pescador </td><td> 02-540g </td><td> Para storarge cérebro em ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Guilhotina de Pequenos Animais </td><td> Mundial Precision Instruments (WPI) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Toalha de papel plano </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # Feather lâmina cirúrgica 11 </td><td> Pescador </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee osso tesoura </td><td> Multa Ferramentas da Ciência (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8321 </td><td> Use para ratos </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> Use para camundongos ou ratos </td></tr><tr><td> Ferramenta hipocampo </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Colher </td><td></td><td></td><td> Uma colher de chá vai fazer plástica </td></tr><tr><td> Espátula </td><td> Pescador </td><td> 21-401-25A </td><td> Espátula </td></tr><tr><td> Cirúrgica da íris tesoura </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> plástico pipetas de transferência </td><td> Pescador </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 milímetros de papel de filtro Whatman </td><td> Pescador </td><td> 09-805E </td><td> Whatman cat. 1001-110 </td></tr><tr><td> Placa de Petri de vidro </td><td> Pescador </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P manual vibratório micrótomo </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Lâmina de 0,1 milímetros FA-10 Feather S </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> Lâmina de 0,1 milímetros FA-10 Feather S </td></tr><tr><td> Vidro borosilicato Pipetar Pasteur (com bulbo de borracha) </td><td> Pescador </td><td> 13-678-20A </td><td> Para a transferência de fatias: Dica está quebrado e calor polida para maior abertura </td></tr><tr><td> 35 prato de Cultura milímetros Polysterine </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Utilizado para a recolha de cortes após a dissecção </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Ferramentas e materiais para dissecção <table border="1"><tbody><tr><td> Equipamentos / materiais </td><td> Companhia </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Segurando câmara </td><td> Custom Built </td><td></td></tr><tr><td> P-97 Horizontal Pipetar Puller </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Mesa de isolamento de vibração </td><td> Técnico Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Gaiola de Faraday </td><td> Personalizado construído </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Garrafa Aspirador com Sidearm Inferior (Produto # 1220-1E) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Gravidade contolled set IV com regulador (Produto # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Linha de Aspiração Central </td><td></td><td> Disponível na maioria dos laboratórios modernos </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 Gas Mix </td><td> Escocêst-Gross Co. </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM tubulação Lab Para O 2 / CO 2 de entrega </td><td> Fisher Scientific </td><td> Não-tóxica, não-oxidantes, vem em uma variedade de tamanhos. </td></tr><tr><td> Microscópio Eclipse E600FN </td><td> Nikon </td><td> com os objetivos de 10x e 40x, perto do filtro infared e GFP, DS-Red2 filtros </td></tr><tr><td> Legal snap ES Câmera Digital </td><td> Fotométricos </td><td> Legal snap ES Câmera Digital </td></tr><tr><td> X-Cite Iluminador Fluorescente </td><td> EXFO </td><td> X-Cite Iluminador Fluorescente </td></tr><tr><td> Plataforma microscópio </td><td> Siskiyou </td><td> Personalizado montado </td></tr><tr><td> RC-22 submersíveis de gravação da câmara (Produto # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Requer P-1 adaptador de plataforma e palco (Produto # 64-0277 De Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP controlador de temperatura 2/3Ch </td><td> Microcontrols celular </td><td> TC2BIP controlador de temperatura 2/3Ch </td></tr><tr><td> 4 Axis manipulador Miniature manual </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> Fio de platina Iridium (0,002 in) (Item # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Isolator Stimulus </td><td> WPI </td><td> A365 Isolator Stimulus </td></tr><tr><td> Multiclamp Amplificador 700B </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A conversor A / D </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Software PClamp </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Computador pessoal (Pentium 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 3. Eletrofisiologia equipamentos e materiais

preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology

O roedor preparação fatia do hipocampo é talvez a ferramenta mais amplamente utilizado para investigar função sináptica mamíferos e plasticidade. O hipocampo pode ser extraído de forma rápida e facilmente de ratos e camundongos e fatias de permanecer viável por horas em oxigenado líquido cefalorraquidiano artificial. Além disso, técnicas básicas electrophysisologic são facilmente aplicadas à investigação da função sináptica em fatias do hipocampo e forneceram algumas das melhores biomarcadores para deficiências cognitivas. A fatia do hipocampo é especialmente popular para o estudo de mecanismos de plasticidade sináptica envolvida na aprendizagem e memória. Mudanças na indução de potenciação de longa duração e depressão (LTP e LTD) da eficácia sináptica em fatias do hipocampo (ou falta dele) são freqüentemente usados ​​para descrever o fenótipo neurológico de animais com deficiência cognitiva e / ou para avaliar o mecanismo de ação da compostos nootropic. Este artigo descreve os procedimentos que usamos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas com o envelhecimento ea doença de Alzheimer (AD) 1-3. Uso de ratos e camundongos com idade modelo AD pode apresentar um conjunto único de desafios para os pesquisadores acostumados a usar ratos mais jovens e / ou ratos em suas pesquisas. Ratos idosos têm crânios mais espessa e mais resistente do tecido conjuntivo de ratos mais jovens e camundongos, o que pode atrasar extração de cérebro e / ou dissecção e, conseqüentemente, negar ou exagerar verdadeira idade diferenças na função sináptica e plasticidade. Envelhecimento e patologia amilóide também pode agravar a lesão do hipocampo sustentada durante o processo de dissecação, novamente complicando qualquer inferências a partir da avaliação fisiológica. Aqui, discutimos as medidas tomadas durante o processo de dissecção para minimizar esses problemas. Exemplos de respostas sinápticas adquiridos em &quot;saudável&quot; e &quot;insalubre&quot; fatias de ratos e camundongos são fornecidos, bem como representante experimentos plasticidade sináptica. O possível impacto de outros fatores metodológicos sobre a função sináptica nestes modelos animais (por exemplo, componentes de gravação solução, parâmetros de estimulação) também são discutidos. Embora o foco deste artigo é sobre o uso de ratos idosos e camundongos transgênicos, os novatos para cortar fisiologia deve encontrar detalhes suficientes aqui para começar a fazer seus próprios estudos, usando uma variedade de modelos de roedores.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Este artigo descreve procedimentos para preparar fatias do hipocampo de ratos e camundongos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas do cérebro associadas ao envelhecimento e relacionadas com a idade as doenças neurodegenerativas, como doença de Alzheimer.

Preparação de fatias do hipocampo aguda de ratos e camundongos transgênicos para o Estudo das Alterações Synaptic durante o envelhecimento e amilóide Patologia

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric &#946;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparação de Oligoméricas β-amilóide 1-42 Indução e de Impairment plasticidade sináptica em fatias do hipocampo

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Neurociência

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation de neurônios de fatias do cérebro de roedores para estudar a transmissão sináptica e Imagem Terminais pré-sináptica

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Preparação de fatias agudas zona subventricular for Imaging Cálcio

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dois registros eletrofisiológicos de sinapticamente evocadas Respostas astroglial e neuronal em fatias hipocampais agudas

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Infusão estereotáxica de oligomica beta-amilóide no ratinho Hippocampus

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Investigação de Synaptic Tagging / Captura e-captura Cruz usando aguda fatias do hipocampo de roedores

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparação de fatias de cérebro aguda usando um otimizado N-metil-D-método de proteção de recuperação glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Gravação de plasticidade sináptica em fatias Hippocampal agudas, mantidas em um pequeno volume reciclagem - perfusão- e sistema de câmara de submersão-tipo

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Indicadores únicos de sinapse de liberação de glutamato e absorção em fatias cerebrais agudas de ratos normais e huntington

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Preparação de fatias hipocampais humanas agudas para gravações eletrofisiológicas

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...