Name: isolation and in vitro activation of caenorhabditis elegans sperm
Uploaded: 2011-01-31T19:00:00
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우리는 사무엘 구청 감사, 다이앤 C.이 기술을 개척을위한 쉐익스과 그레고리 넬슨. 우리는 활성 마리의 정자 수야을 보여주는 동영상을위한 파반 Kadandale와 브라이언 Geldziler 감사, 도움이 토론에 대한 Singson 연구실의 구성원, CGC 종자와 NIH에 대한 권한을 부여 (R01HD054681)를 통해 우리를 지원하십시오.

남성 인구의 1) 농축 <ol><li> 실험 필요에 따라 남성의 큰 숫자는 다음 전략 중 하나를 채용하여 구할 수 있습니다 : <ol><li> 야생 타입 남성의 큰 인구는 NGM 판의 중앙에 OP50 씨앗의 작은 잔디 5 야생 타입 남성 1 남녀 추니를 건너하여 얻을 수 있습니다. 성공 세대의 약 50 %가 야생 타입 남성 것입니다. </li><li> 그를 - 5 (e1490) 또는 그를 - 8 (e1489) 나온것 그를 - 5. 남성의 큰 숫자를 던...

<ol>
	<li>Kimble, J., Crittenden, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controls+of+germline+stem+cells,+entry+into+meiosis,+and+the+Sperm/Oocyte+decision+in+Caenorhabditis+elegans.">Controls of germline stem cells, entry into meiosis, and the Sperm/Oocyte decision in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 23, 405-433 (2007).</li><li>Lhernault, S. W., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Cell Biology. , 273-301 (1995).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+Caenorhabditis+elegans.">Nondisjunction Mutants of the Nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li><li>Altun, Z. F., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+to+male+C.+elegans+anatomy.">Introduction to male C. elegans anatomy.</a> WormAtlas. , (2008).</li><li>Shakes, D., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+spermiogenesis+in+C.+elegans:+a+pharmacological+and+genetic+analysis.">Initiation of spermiogenesis in C. elegans: a pharmacological and genetic analysis.</a> Dev Biol. 134, 189-200 (1989).</li><li>Nelson, G. A., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+fusion,+pseudopod+extension+and+amoeboid+motility+are+induced+in+nematode+spermatids+by+the+ionophore+monensin.">Vesicle fusion, pseudopod extension and amoeboid motility are induced in nematode spermatids by the ionophore monensin.</a> Cell. 19, 457-464 (1980).</li><li>L'Hernault, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+cell+biology+of+spermatogenesis+in+the+nematode+C.+elegans.">The genetics and cell biology of spermatogenesis in the nematode C. elegans.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 306, 59-65 (2009).</li><li>Chatterjee, I., Richmond, A., Putiri, E., Shakes, D., Singson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+spe-38+gene+encodes+a+novel+four-pass+integral+membrane+protein+required+for+sperm+function+at+fertilization.">The Caenorhabditis elegans spe-38 gene encodes a novel four-pass integral membrane protein required for sperm function at fertilization.</a> Development. 132, 2795-2808 (2005).</li><li>Xu, X., Sternberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+sperm+TRP+protein+required+for+sperm-egg+interactions+during+fertilization.">A C. elegans sperm TRP protein required for sperm-egg interactions during fertilization.</a> Cell. 114, 285-297 (2003).</li><li>Nelson, G., Roberts, T., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+spermatozoan+locomotion:+amoeboid+movement+with+almost+no+actin.">Caenorhabditis elegans spermatozoan locomotion: amoeboid movement with almost no actin.</a> J Cell Biol. 92, 121-131 (1982).</li><li>Machaca, K., DeFelice, L. J., L'Hernault, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chloride+channel+localizes+to+Caenorhabditis+elegans+spermatids+and+chloride+channel+blockers+induce+spermatid+differentiation.">A novel chloride channel localizes to Caenorhabditis elegans spermatids and chloride channel blockers induce spermatid differentiation.</a> Dev Biol. 176, 1-16 (1996).</li><li>LaMunyon, C., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+viability+of+mutant+and+manipulated+sperm+by+artificial+insemination+of+Caenorhabditis+elegans.">Assessing the viability of mutant and manipulated sperm by artificial insemination of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 138, 689-692 (1994).</li></ol>

Spe 돌연변을 분석뿐만 아니라,이 프로토콜은 노화와 정자의 형태를 분석과 같은 다른 중요한 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 이 프로토콜을 사용 Spermatids과 격리 마리의 정자 수야는 야생 타입과 돌연변이 정자 8, 9, 슬라이드 10, 생리적 측정 9, 11, 또는 인공 수정 12 정자의 운동성의 immunostaining 같은 다른 스트림 실험에서 사용할 수 있습니다.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Tuberculin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>309623</td>
<td>Syringe: 1 ml, needle: 27G X &frac12; in</td>
</tr>
<tr>
<td>Pap pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zymed</td>
<td>00-8888</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VWR VistaVision HistoBond Microscope Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>16004-406</td>
<td>Dimension: 75X25X1mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>48366045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-6911</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and in vitro activation of caenorhabditis elegans sperm

남성과 나온것은 선충류 C. 엘레간스에있는 두 자연스럽게 발견 성적 양식입니다. amoeboid 정자는 남성과 나온것 모두에 의해 생성됩니다. 300 - - gametogenesis의 이전 단계에서 나온것의 배아 세포는 정자의 제한 번호로 차별과 spermatheca라는 작은 &#39;가방&#39;에 저장됩니다. 나중에, 지속 oocytes 1 생산 나온것. 반면, 남성들은 성인에 걸쳐 독점적으로 정자 생산하고 있습니다. 남성은 전형적인 성인 웜 2 전체 세포의&gt; 50 %를 차지하고 그 많은 정자를 생산하고 있습니다. 따라서 남성의 정자를 분리하는 것은 나온것의에서보다 쉽습니다. 남성의 극소수는 자연의 X 염색체 3 자연 이외의 분리로 인해 생성됩니다. 보다 편리하게 남성 또는 그에게 상승을주는 돌연변이의 소개 (수컷의 높은 발병률) 표현형로 나온것 크로싱하면 그 중 하나가 남성 인구 3 풍부 수있는을 통해 전략의 일부입니다. 남성은 쉽게 꼬리 형태 4을 관찰하여 나온것 구별하실 수 있습니다. 남성 꼬리가 짝짓기 구조 둥근 반면 남녀 추니 꼬리는 지적이다. 꼬리를 잘랐다 남성의 생식 요로 내에 저장된 spermatids의 수많은 출시. 해부가 27 게이지 바늘을 사용하여 스테레오 현미경으로 수행됩니다. spermatids가 실제로 다른 세포와 연결되지 않은 상태 때문에, 유압 압력 spermatids이 남성을 포함한 신체의 내부 내용을 퇴학. 말스 직접 &#39;정자 보통&#39;의 작은 방울을 해부하고 있습니다. Spermatids는 산도의 변경에 민감합니다. 따라서 HEPES, 좋은 버퍼링 용량을 가진 화합물은 정자 미디어에서 사용됩니다. 포도당과 정자 매체에있는 다른 소금은 정자의 무결성을 유지하기 위해 삼투압을 유지할 수 있도록 도와주십시오. 마리의 정자 수야에 spermatids의 포스트 meiotic 분화는 spermiogenesis 또는 정자의 정품 인증을 칭했다있다. 5 쉐익스하고, 넬슨 6 이전 라운드 spermatids 여기서 우리는 C.의 체외 spermiogenesis에서 보여주는 Pronase E. 등 다양한 활성화 화합물을 추가하여 마리의 정자 수야으로 차별화할 수있는 유도했다 Pronase E.을 사용 엘레간스의 spermatids 성공 spermiogenesis 임신을위한 필수 조건이며 따라서 spermiogenesis에 결함이 돌연변이 멸균됩니다. 지금까지 여러 가지 돌연변이가 특별히 spermiogenesis 과정 7 결함이 표시되었습니다. 이상은 소설 Spe (Spermatogenesis 결함)의 체외 활성화에 돌연변이 우리가이 행사에 참여 추가 선수를 발견할 도움이 될 중에 발견했습니다.

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Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

남성에서 spermatids을 분리하고 활성화하기위한 프로토콜<em&gt; C. 엘레간스</em&gt; 여기에 설명되어 있습니다. 남성 자료 spermatids의 뒷부분 끝을 절단. spermatids은 프로 테아제를 추가로 활성화할 수 있습니다.

분리 및 체외에서</em의> 활성화 Caenorhabditis 엘레간스 정자

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

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솔리드 플레이트 기반식이 제한에 Caenorhabditis 엘레간스</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

연구

생물학

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

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상순 Embryogenesis의 시간 경과 현미경 Caenorhabditis 엘레간스

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Vampiric Isolation of Extracellular Fluid from Caenorhabditis elegans

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에서 세포 외액의 Vampiric 절연<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

The genetically tractable model organism C. elegans has provided insights into a myriad of biological questions, enabled by its short generation time, ...

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기본<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 방법 : 동기화 및 전망

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

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에서 프로스타글란딘 추출 및 분석<em&gt; Caenorhabditis의 엘레</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

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분리 및 체외에서 활성화 Caenorhabditis 엘레간스 정자

분리 및 체외에서 활성화 Caenorhabditis 엘레간스* 정자*