Name: isolation and in vitro activation of caenorhabditis elegans sperm
Uploaded: 2011-01-31T19:00:00
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Damos las gracias a Samuel Ward, Diane C. batidos y Gregory Nelson por ser pionero en esta técnica. Damos las gracias a Pavan Kadandale y Geldziler Brian de videos que muestran los espermatozoides activados, los miembros del laboratorio de Singson útil para los debates; CGC para las cepas y los NIH por su apoyo a través de la subvención (R01HD054681).

1) El enriquecimiento de la población masculina <ol><li> Dependiendo de la necesidad de experimentación, un gran número de hombres se puede obtener mediante el empleo de una de las siguientes estrategias: <ol><li> gran población de hombres de tipo salvaje se puede obtener mediante el cruce 5 machos de tipo salvaje y hermafroditas 1 en un pequeño jardín de OP50 cabeza de serie en el centro de la placa de NGM. Aproximadamente el 50% de la generación siguiente serán hombres de tipo salvaje. </li><li> él-5 (e...

<ol>
	<li>Kimble, J., Crittenden, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controls+of+germline+stem+cells,+entry+into+meiosis,+and+the+Sperm/Oocyte+decision+in+Caenorhabditis+elegans.">Controls of germline stem cells, entry into meiosis, and the Sperm/Oocyte decision in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 23, 405-433 (2007).</li><li>Lhernault, S. W., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Cell Biology. , 273-301 (1995).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+Caenorhabditis+elegans.">Nondisjunction Mutants of the Nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li><li>Altun, Z. F., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+to+male+C.+elegans+anatomy.">Introduction to male C. elegans anatomy.</a> WormAtlas. , (2008).</li><li>Shakes, D., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+spermiogenesis+in+C.+elegans:+a+pharmacological+and+genetic+analysis.">Initiation of spermiogenesis in C. elegans: a pharmacological and genetic analysis.</a> Dev Biol. 134, 189-200 (1989).</li><li>Nelson, G. A., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+fusion,+pseudopod+extension+and+amoeboid+motility+are+induced+in+nematode+spermatids+by+the+ionophore+monensin.">Vesicle fusion, pseudopod extension and amoeboid motility are induced in nematode spermatids by the ionophore monensin.</a> Cell. 19, 457-464 (1980).</li><li>L'Hernault, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+cell+biology+of+spermatogenesis+in+the+nematode+C.+elegans.">The genetics and cell biology of spermatogenesis in the nematode C. elegans.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 306, 59-65 (2009).</li><li>Chatterjee, I., Richmond, A., Putiri, E., Shakes, D., Singson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+spe-38+gene+encodes+a+novel+four-pass+integral+membrane+protein+required+for+sperm+function+at+fertilization.">The Caenorhabditis elegans spe-38 gene encodes a novel four-pass integral membrane protein required for sperm function at fertilization.</a> Development. 132, 2795-2808 (2005).</li><li>Xu, X., Sternberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C.+elegans+sperm+TRP+protein+required+for+sperm-egg+interactions+during+fertilization.">A C. elegans sperm TRP protein required for sperm-egg interactions during fertilization.</a> Cell. 114, 285-297 (2003).</li><li>Nelson, G., Roberts, T., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+spermatozoan+locomotion:+amoeboid+movement+with+almost+no+actin.">Caenorhabditis elegans spermatozoan locomotion: amoeboid movement with almost no actin.</a> J Cell Biol. 92, 121-131 (1982).</li><li>Machaca, K., DeFelice, L. J., L'Hernault, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chloride+channel+localizes+to+Caenorhabditis+elegans+spermatids+and+chloride+channel+blockers+induce+spermatid+differentiation.">A novel chloride channel localizes to Caenorhabditis elegans spermatids and chloride channel blockers induce spermatid differentiation.</a> Dev Biol. 176, 1-16 (1996).</li><li>LaMunyon, C., Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+viability+of+mutant+and+manipulated+sperm+by+artificial+insemination+of+Caenorhabditis+elegans.">Assessing the viability of mutant and manipulated sperm by artificial insemination of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 138, 689-692 (1994).</li></ol>

Además de analizar mutantes Espe, este protocolo tiene otras aplicaciones importantes, como el análisis de la morfología del espermatozoide con el envejecimiento. Espermátides y espermatozoides aislados utilizando este protocolo puede ser utilizado en otros experimentos posteriores, tales como, la inmunotinción de tipo salvaje y el espermatozoide mutante 8, 9, motilidad de los espermatozoides en las diapositivas 10, las mediciones fisiológicas 9, 11, o incluso la inseminación arti...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Tuberculin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>309623</td>
<td>Syringe: 1 ml, needle: 27G X &frac12; in</td>
</tr>
<tr>
<td>Pap pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zymed</td>
<td>00-8888</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VWR VistaVision HistoBond Microscope Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>16004-406</td>
<td>Dimension: 75X25X1mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Cover glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>48366045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-6911</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and in vitro activation of caenorhabditis elegans sperm

Los varones y hermafroditas son las dos formas sexuales se encuentran naturalmente en el nematodo C. elegans. Los espermatozoides son ameboides producida tanto por hombres y hermafroditas. En la primera fase de la gametogénesis, las células germinales de los hermafroditas se diferencian en cantidad limitada de espermatozoides - alrededor de 300 - y se almacenan en una pequeña &quot;bolsa&quot; llama la espermateca. Más tarde, los hermafroditas producen continuamente ovocitos 1. Por el contrario, los machos producen exclusivamente espermatozoides durante toda su vida adulta. Los machos producen espermatozoides tanto que representa&gt; 50% del total de células en un típico gusano de dos adultos. Por lo tanto, aislar los espermatozoides de los machos es más fácil que de la de los hermafroditas. Sólo una pequeña proporción de los hombres son naturalmente generado debido a la espontánea no disyunción del cromosoma X 3. Cruzando hermafroditas con los hombres o, más convenientemente, la introducción de mutaciones que dan lugar a él (alta incidencia de varones) fenotipo son algunas de las estrategias a través del cual se puede enriquecer a la población masculina 3. Los machos pueden distinguirse fácilmente de los hermafroditas mediante la observación de la morfología de la cola 4. La cola es hermafrodita en punta, mientras que la cola masculina se completa con las estructuras de apareamiento. Corte de la cola libera gran cantidad de esperma almacenado en el interior del aparato reproductor masculino. La disección se realiza bajo un microscopio estéreo con agujas de calibre 27. Desde espermátidas no están físicamente conectados con cualquier otra célula, la presión hidráulica expulsa contenido interno del cuerpo masculino, incluyendo dos espermátidas. Los machos son directamente disecados en una pequeña gota de &quot;Medio de esperma&quot;. Espermátidas son sensibles a la alteración en el pH. Por lo tanto, HEPES, un compuesto con una buena capacidad de amortiguación se utiliza en los medios de esperma. La glucosa y otras sales presentes en los medios de comunicación ayudan a mantener el esperma presión osmótica para mantener la integridad de los espermatozoides. Post-meiótica diferenciación de las espermátidas en espermatozoides se denomina espermiogénesis o la activación de los espermatozoides. Batidos 5, 6 y Nelson mostraron con anterioridad que espermátidas redondas pueden ser inducidas a diferenciarse en espermatozoides mediante la adición de diferentes compuestos como la activación de pronasa E. Aquí se demuestra in vitro espermiogénesis de C. elegans espermátidas con pronasa E. Espermiogénesis éxito es pre-requisito para la fertilidad y por lo tanto, los mutantes defectuosos en la espermiogénesis son estériles. Hasta ahora, varios mutantes han demostrado que son defectuosos específicamente en el proceso de espermiogénesis 7. Anomalía encontrada durante la activación in vitro de la novela de SPE (espermatogénesis defectuosa) mutantes que nos ayuden a descubrir más jugadores que participan en este evento.

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Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Un protocolo para el aislamiento y la activación de las espermátidas de varón<em&gt; C. elegans</em&gt; Se describe aquí. Cortar el extremo posterior de esperma macho libera. Las espermátides se puede activar mediante la adición de la proteasa.

El aislamiento y la In vitro La activación de Caenorhabditis elegans El esperma

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

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Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans</em

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embryos, the genetic ...

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