Name: cryopreservation of cortical tissue blocks for the generation of highly enriched neuronal cultures
Uploaded: 2010-11-11T18:00:00
Duration: 9 min 13 s
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<p class="jove_content"> इस शोध UCI (ए आर और सपा) में अंडर ग्रेजुएट रिसर्च अवसर कार्यक्रम से अनुदान और कैलिफोर्निया अल्जाइमर रोग पहल और राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान का कोई संस्थान के राज्य से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. HD38466, और अल्जाइमर रोग अनुसंधान केंद्र अनुदान नहीं. AG16573 (जेबी) </p>

<ol>
	<li>Robbins, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+human+brain+tissue.">Cryopreservation of human brain tissue.</a> <em style='font-style: italic'>Exp Neurol</em>. <b>107</b>, 208-213 (1990).</li><li>Ware, C. B., Nelson, A. M., Blau, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled-rate+freezing+of+human+ES+cells.">Controlled-rate freezing of human ES cells.</a> <em style='font-style: italic'>Biotechniques</em>. <b>38</b>, 879-880 (2005).</li><li>Paynter, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+practical+issues+for+cryopreservation+of+nerve+cells.">Principles and practical issues for cryopreservation of nerve cells.</a> <em style='font-style: italic'>Brain Res Bull</em>. <b>75</b>, 1-14 (2008).</li><li>Thirumala, S., Gimble, J. M., Devireddy, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+stromal+vascular+fraction+of+adipose+tissue+in+a+serum-free+freezing+medium.">Cryopreservation of stromal vascular fraction of adipose tissue in a serum-free freezing medium.</a> <em style='font-style: italic'>J Tissue Eng Regen Med</em>. <b>4</b>, 224-232 (2010).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

<p class="jove_content"> Cryopreservation बैंक भविष्य में उपयोग के लिए कीमती मस्तिष्क के ऊतकों के नमूनों के लिए एक अवसर प्रदान करता है. यहाँ हम एक सरल लेकिन प्रभावी प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए दोनों न्यूरॉन समृद्ध संस्कृतियों और जमे हुए मस्तिष्क के ऊतकों ब्लॉक से neuronal कोशिकाओं अग्रदूत उत्पन्न. यह किफायती प्रक्रिया पारंपरिक cryopreservation तकनीक है कि अधिक महंगी दर नियंत्रित फ्रीजर का उपयोग की लागत से बचा जाता है. प्रोटोकॉल व्यवहार्य neuronal संस्कृतियों के बाद विगलन की पीढ़ी के लिए एक तेजी से अभी तक प्रभावी साधन प्रदान करने के लिए ऊतक ब्लॉक फ्रीज द्वारा की अनुमति देता है है. पूरे जमने की प्रक्रिया के रूप में छोटा रूप में 20 मिनट लग सकते हैं. प्राथमिक neuronal संस्कृतियों के अलावा, इस विधि ऊतक ब्लॉक का उपयोग भी मुक्त अस्थायी neurospheres के रूप में हो NPCs उत्पन्न thawed जा सकता है. इस संबंध में, हमारे ठंड माध्यम सीरम की कमी सुनिश्चित करता है कि कोशिकाओं को एक undifferentiated राज्य में संरक्षित कर रहे हैं. फर्क शर्तों के तहत, neurospheres जमी ऊतक शो विस्तार और भेदभाव बहुत ताजा ऊतकों से उत्पन्न neurospheres करने के लिए तुलनीय दरों से उत्पादन किया. </p>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11995-073</td>
<td>High gluclose 1X</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine calf serum supplemented</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HYCLONE</td>
<td>SH30072.03</td>
<td>For culture medium </td>
</tr>
<tr>
<td>Neurobasal-A Medium (1X), liquid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>1088-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>B27 Supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17504-044</td>
<td>Supplement for Neurobasal medium</td>
</tr>
<tr>
<td>N2 Supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17502-048</td>
<td>Supplement for Neurobasal medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin (10X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro </td>
<td>25-054CI </td>
<td>Tissue dissociation</td>
</tr>
<tr>
<td>Deoxyribonuclease 1 from bovine pancreas (DNase)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D4527-30KU</td>
<td>Tissue dissociation</td>
</tr>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) (10X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14065</td>
<td>Cleaning tissue, washes, and freezing medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-L-Lysine- 500mg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P2636</td>
<td>Substrate for adhesion of neuronal cells</td>
</tr>
<tr>
<td>antibiotic-antimycotic (100X), liquid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240-062</td>
<td>To prevent contamination</td>
</tr>
<tr>
<td>Large orifice pipette Tips (1-200 ul)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>02-681-141</td>
<td>To prevent shear stress to cells</td>
</tr>
<tr>
<td>Graduated pipette tips (101-1000 ul)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>1111-2721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>21 G1 precision guide needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckton Dickinson</td>
<td>305165</td>
<td>To clean tissue</td>
</tr>
<tr>
<td>10 ml pipette </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>1071-0810</td>
<td>Individually wrapped</td>
</tr>
<tr>
<td>50 ml tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>926-9-04</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Single edge razor blade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Smith Brand</td>
<td>67-0238</td>
<td>To chop tissue</td>
</tr>
<tr>
<td>60 x 15 mm polystyrene petri dish </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>8609-0160</td>
<td>For general culture</td>
</tr>
<tr>
<td>100 x 15 mm polystyrene petri dish </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>8609-0010</td>
<td>For cleaning tissue</td>
</tr>
<tr>
<td>Cryogenic box </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NALGENE Labware</td>
<td>5026-1010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Freezing container</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NALGENE Labware</td>
<td>5100-0001</td>
<td>"Mr. Frosty"</td>
</tr>
<tr>
<td>2.0 ml  cryogenic vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NALGENE Labware</td>
<td>5012-0020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>D128-500</td>
<td>For freezing medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethanol 200 proof</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>E7023</td>
<td>For sterilizing razor blade</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

cryopreservation of cortical tissue blocks for the generation of highly enriched neuronal cultures

<p class="jove_content"> इस अध्ययन में, हम सफल cryopreservation और cortical मस्तिष्क के ऊतकों ब्लॉक के विगलन अत्यधिक समृद्ध neuronal संस्कृतियों उत्पन्न करने के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल की रूपरेखा. इस प्रोटोकॉल के लिए ठंड इस्तेमाल किया मध्यम 10% डाइमिथाइल sulfoxide (DMSO) हांक buffered नमक समाधान (HBSS) में पतला है. Cortical ऊतक के ब्लाकों ठंड मध्यम युक्त cryovials को हस्तांतरित कर रहे हैं और धीरे धीरे -1 डिग्री सेल्सियस दर नियंत्रित ठंड कंटेनर में / मिनट पर जमे हुए हैं. पोस्ट पिघलना प्रसंस्करण और जमे हुए ऊतक लगातार neuronal समृद्ध संस्कृतियों जो संस्कृति और neuronal नेटवर्क के विस्तार में महत्वपूर्ण में पहले 5 दिनों के दौरान 10 दिनों के भीतर तेजी से neuritic वृद्धि प्रदर्शन का उत्पादन ब्लॉक के पृथक्करण. Astrocytic मार्कर glial fibrillary अम्लीय (GFAP) प्रोटीन और neuronal मार्कर बीटा ट्यूबिलिन वर्ग III, के साथ Immunocytochemical धुंधला हो जाना और संस्कृतियों में न्यूरॉन्स और astrocytes की उच्च संख्या का पता चला. तंत्रिका ऊतक ब्लॉक हदबंदी के बाद अग्रदूत सेल संस्कृतियों की पीढ़ी तेजी से neurospheres, जो फर्क शर्तों के तहत न्यूरॉन्स और astrocytes की बड़ी संख्या का उत्पादन विस्तार में हुई. यह सरल cryopreservation प्रोटोकॉल cortical मस्तिष्क के ऊतकों ब्लॉक के तेजी से, कुशल और सस्ती संरक्षण, जो neuronal, astrocyte, और neuronal अग्रदूत सेल संस्कृतियों के बाद की पीढ़ी के लिए बढ़ लचीलेपन के अनुदान के लिए अनुमति देता है. </p>

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Cryopreservation of Cortical Tissue Blocks for the Generation of Highly Enriched Neuronal Cultures

<p class="jove_content">यहाँ, हम कुशल cryopreservation के लिए एक विधि का वर्णन और cortical मस्तिष्क के ऊतकों ब्लॉक के विगलन अत्यधिक समृद्ध neuronal संस्कृतियों उत्पन्न. यह सरल प्रोटोकॉल neuronal, astrocyte, और neuronal अग्रदूत सेल संस्कृतियों के बाद की पीढ़ी के लिए लचीलापन प्रदान करता है.</p>

अति समृद्ध Neuronal संस्कृतियों की पीढ़ी के लिए cortical ऊतक ब्लाकों के cryopreservation

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

बेकार मानव भ्रूण cortical ऊतक से तंत्रिका स्टेम सेल की पीढ़ी

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

बहु इलेक्ट्रोड Neuronal हिमस्खलन के Organotypic संस्कृतियों में ऐरे रिकॉर्डिंग

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output.  During development, this activity is important for the ...

Derivation of Enriched Oligodendrocyte Cultures and Oligodendrocyte/Neuron Myelinating Co-cultures from Post-natal Murine Tissues

Oligodendrocyte संस्कृति समृद्ध और Oligodendrocyte न्यूरॉन / डाक प्रसव murine ऊतकों से सह संस्कृतियों Myelinating की व्युत्पत्ति

Identifying the molecular mechanisms underlying OL development is not only critical to furthering our knowledge of OL biology, but also has implications ...

A Fully Automated and Highly Versatile System for Testing Multi-cognitive Functions and Recording Neuronal Activities in Rodents

मल्टी संज्ञानात्मक कार्य परीक्षण और कृन्तकों में neuronal क्रियाएँ रिकॉर्डिंग के लिए एक पूरी तरह से स्वचालित है और बहुत बहुमुखी प्रणाली

We have developed a fully automated system for operant behavior testing and neuronal activity recording by which multiple cognitive brain functions can be ...

Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

सिंगल सेल प्रेसिजन साथ Neuronal सह संस्कृति की तैयारी

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी और कैल्शियम इमेजिंग के लिए तीव्र Neuronal ऊतक लंबे समय तक ऊष्मायन

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

माइक्रो-इलेक्ट्रोड एरेज़ पर न्यूरोनल सेल संस्कृतियों की उत्तेजना के लिए नेटवर्क रिस्पांस में समय पर निर्भर वृद्धि

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

GM-Free Generation of Blood-Derived Neuronal Cells

रक्त-व्युत्पन्न न्यूरोनल कोशिकाओं की जीएम-मुक्त पीढ़ी

Many human&#160;neurological disorders are caused by degeneration of neurons and glial cells in the brain. Due to limitations in pharmacological and other ...

Cone-Enriched Cultures from the Retina of Chicken Embryos to Study Rod to Cone Cellular Interactions

कोन-समृद्ध संस्कृतियों चिकन भ्रूण के रेटिना से शंकु सेलुलर इंटरैक्शन के लिए रॉड का अध्ययन करने के लिए

Human daytime vision relies on the function of cone photoreceptors at the center of the retina, the fovea. Patients suffering from the most prevalent form ...

Robust and Highly Reproducible Generation of Cortical Brain Organoids for Modelling Brain Neuronal Senescence <em>In Vitro</em>

Robust and Highly Reproducible Generation of Cortical Brain Organoids for Modelling Brain Neuronal Senescence In Vitro

<em>इन विट्रो</em> में मस्तिष्क न्यूरोनल सेनेसेंस मॉडलिंग के लिए कॉर्टिकल ब्रेन ऑर्गेनोइड की मजबूत और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पीढ़ी

Brain organoids are three-dimensional models of the developing human brain and provide a compelling, cutting-edge platform for disease modeling and ...