Name: labeling f-actin barbed ends with rhodamine-actin in permeabilized neuronal growth cones
Uploaded: 2011-03-17T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Labeling F-actin Barbed Ends with Rhodamine-actin in Permeabilized Neuronal Growth Cones at JoVE.com

الكتاب نشكر الدكتور جيمس Bamburg وأعضاء مختبره للتعاون في هذه الدراسات. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HD19950 ، EY07133 والمنح المقدمة من المؤسسة الطبية ولاية مينيسوتا.

لرودامين - أكتين العلامات ، يتم تربيتها في الخلايا العصبية coverslips الزجاج وضعت في الجزء السفلي من 35 ملم الصحون البلاستيكية ، أو على أطباق coverslips صقها &quot;الفيديو&quot;. 1. إعداد Coverslips أو &quot;فيديو&quot; صحون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";te...

<ol>
	<li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trip+of+the+tip:+Understanding+the+growth+cone+machinery.">The trip of the tip: Understanding the growth cone machinery.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10, 332-343 (2009).</li><li>Letourneau, P., Squire, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+Pathfinding:+Extracellular+Matrix+Role.">Axonal Pathfinding: Extracellular Matrix Role.</a> Encyclopedia of Neuroscience. , 1139-1145 (2008).</li><li>Kalil, K., Dent, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Touch+and+go:+Guidance+cues+signal+to+the+growth+cone+cytoskeleton.">Touch and go: Guidance cues signal to the growth cone cytoskeleton.</a> Curr Opin Neurobio. 15, 521-526 (2005).</li><li>Dent, E. W., Gertler, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal+dynamics+and+transport+in+growth+cone+motility+and+axon+guidance.">Cytoskeletal dynamics and transport in growth cone motility and axon guidance.</a> Neuron. 40, 209-227 (2003).</li><li>Pak, C. W., Flynn, K. C., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin-binding+proteins+take+the+reins+in+growth+cones.">Actin-binding proteins take the reins in growth cones.</a> Nat Rev Neurosci. 9, 136-147 (2008).</li><li>Guan, K. L., Rao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+mechanisms+mediating+neuronal+responses+to+guidance+cues.">Signaling mechanisms mediating neuronal responses to guidance cues.</a> Nat Rev Neurosci. 4, 941-956 (2003).</li><li>Gallo, G., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+growth+cone+actin+filaments+by+guidance+cues.">Regulation of growth cone actin filaments by guidance cues.</a> J. Neurobiology. 58, 92-102 (2004).</li><li>Fass, J., Gehler, S., Sarmiere, P., Letourneau, P., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulating+filopodial+dynamics+through+actin-depolymerizing+factor/cofilin.">Regulating filopodial dynamics through actin-depolymerizing factor/cofilin.</a> Anat Sci Inter. 79, 173-183 (2004).</li><li>Bernstein, B. W., Bamburg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADF/cofilin:+A+functional+node+in+cell+biology.">ADF/cofilin: A functional node in cell biology.</a> Trends Cell Biol. 20, 187-195 (2010).</li><li>Marsick, B. M., Flynn, K. C., Santiago, M., Bamburg, J. R., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+ADF/cofilin+mediates+attractive+growth+cone+turning+toward+nerve+growth+factor+and+netrin-1.">Activation of ADF/cofilin mediates attractive growth cone turning toward nerve growth factor and netrin-1.</a> Dev Neurobiol. 70, 565-588 (2010).</li><li>Symons, M. H., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+actin+polymerization+in+live+and+permeabilized+fibroblasts.">Control of actin polymerization in live and permeabilized fibroblasts.</a> J Cell Biol. 114, 503-513 (1991).</li><li>Chan, A. Y., Raft, S., Bailly, M., Wyckoff, J. B., Segall, J. E., Condeelis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGF+stimulates+an+increase+in+actin+nucleation+and+filament+number+at+the+leading+edge+of+the+lamellipod+in+mammary+adenocarcinoma+cells.">EGF stimulates an increase in actin nucleation and filament number at the leading edge of the lamellipod in mammary adenocarcinoma cells.</a> J Cell Sci. 111, 199-211 (1998).</li></ol>

قدم هنا طرق تسمح القرار الزماني والمكاني من المكونات الخلوية التي تشارك في إعادة عرض ديناميكية الهيكل الخلوي أكتين على هامش الرائدة في مجال الهجرة مخاريط النمو. وكشف عن عمل الجزيئات الجاذبة ، مثل NGF أو netrin ، لتحفيز بلمرة خيوط الأكتين بسرعة وزيادة المحلية في تاريخ أكت...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>18x18 mm coverslip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gold Seal</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35mm Petri dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>351008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Aquarium cement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAP 100% silicone aquarium sealant</td>
<td>Any hardware store</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-D-lysine (mw &gt; 300,000)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Natural mouse laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L1 CAM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R &amp; D systems</td>
<td>777-NC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa-fluor 350 phalloidin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Molecular Probes)</td>
<td>A22281</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rhodamine non-muscle actin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytoskeleton, Inc.</td>
<td>APHR-A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>F12 Culture medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Gibco)</td>
<td>21700-075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>B27</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Gibco)</td>
<td>17504-044</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slowfade </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>536937</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

labeling f-actin barbed ends with rhodamine-actin in permeabilized neuronal growth cones

تسمى نصائح متحركة من محاور النمو مخاريط النمو. مخاريط النمو يؤدي التنقل من خلال المحاور الأنسجة النامية من خلال التفاعل مع أعرب محليا العظة التوجيه المستقبلات الجزيئية التي تربط مخروط النمو وتنظيم ديناميات وتنظيم الهيكل الخلوي 3-6 مخروط النمو. الهدف الرئيسي من هذه الإشارات الملاحية هو meshwork خيوط الأكتين الذي يملأ المحيط مخروط مخروط النمو ودفع عجلة النمو الاقتصادي الذي من خلال حركية البلمرة أكتين المستمر وإعادة تشكيل ديناميكية 7. إشارات إيجابية أو التوجيه جذابة لحث مخروط النمو التي تحول خيوط الأكتين تحفيز (F - أكتين) البلمرة في المنطقة للنمو هامش مخروط هو أقرب مصدر جاذب جديلة. هذا بلمرة أكتين محركات النمو المحلية نتوء مخروطي ، التصاق الهامش الرائدة واستطالة محواري نحو جاذب. خيوط الأكتين البلمرة يعتمد على توافر ما يكفي من مونومر أكتين ونوى البلمرة أو ينتهي خيوط الأكتين الشائكة لإضافة مونومر. أكتين مونومر يتوفر بكثرة في العقدة الجذر الفرخ الشبكية والظهري (DRG) مخاريط النمو. وبالتالي ، البلمرة يزيد بسرعة عندما حرر F - أكتين ينتهي الشائكة تصبح متاحة للإضافة مونومر. هذا يحدث في DRG الفرخ ومخاريط الشبكية النمو عن طريق تنشيط المحلي للأكتين قطع البروتين F - أكتين depolymerizing عامل (ADF / cofilin) ​​في منطقة مخروط النمو أقرب إلى 80-10 جاذب. هذا يزيد ADF / cofilin النشاط يقطع خيوط الأكتين لخلق فرص عمل جديدة من طراز F - أكتين ينتهي الشائكة للبلمرة. الأسلوب التالي يوضح هذه الآلية. المحتوى الكلي من طراز F - أكتين هو تصور من خلال تلطيخ مع phalloidin الفلورسنت. F - أكتين ينتهي الشائكة هي تصور عن طريق دمج أكتين - رودامين داخل مخاريط النمو التي permeabilized للإجراءات المبينة في ما يلي ، وهو مقتبس من الدراسات السابقة من الخلايا متحركة أخرى 11 ، 12. عند إضافة رودامين - الأكتين عند تركيز أعلى من تركيز حاسم لمونومر أكتين بالإضافة إلى نهايات الشائكة ، رودامين - أكتين تجمع على تاريخ الشائكة الحرة. إذا تم عرض جديلة جذابة في الانحدار ، مثل الإفراج عنه من micropipette المتمركزة على جانب واحد من مخروط النمو ، فإن إدماج رودامين - F - أكتين على أكتين ينتهي الشائكة يكون أكبر في نمو الجانب مخروط نحو 10 micropipette . مخاريط النمو هي هياكل الخلية الصغيرة والدقيقة. كلها إجراءات ، permeabilization رودامين - أكتين التثبيت ، التأسيس والتصور مضان عمله بعناية ويمكن أن تجرى على مرحلة مجهر مقلوب. ويمكن تطبيق هذه الأساليب لدراسة محلية بلمرة الأكتين في الخلايا العصبية المهاجرة ، وغيرها من خلايا الأنسجة الابتدائية أو خطوط الخلية.

Watch this Scientific Journal Video about Labeling F-actin Barbed Ends with Rhodamine-actin in Permeabilized Neuronal Growth Cones at JoVE.com

Labeling F-actin Barbed Ends with Rhodamine-actin in Permeabilized Neuronal Growth Cones

تم وصف طريقة لتصور وتحديد F - أكتين ينتهي الشائكة في مخاريط نمو الخلايا العصبية. بعد زراعة الخلايا العصبية على coverslips الزجاج ، وpermeabilized الخلايا بمحلول سابونين المحتوية. ثم ، وهو حضانة قصيرة مع العازلة التي تحتوي على صابونين رودامين - أكتين يشتمل على تاريخ أكتين الفلورسنت الأكتين الحرة الشائكة.

وسم F - أكتين ينتهي شائك مع أكتين - رودامين في نمو الخلايا العصبية Permeabilized المخاريط

The motile tips of growing axons are called growth cones. Growth cones lead navigating axons through developing tissues by interacting with locally ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

DiOLISTIC وصفها من الخلايا العصبية من القوارض والإنسان غير شرائح الدماغ الرئيسيات

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

الآلي Sholl تحليل الصرف متعلق بالخلايا العصبية رقمية على مستويات متعددة

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

تسجيل على نطاق واسع اطقم متعلق بالخلايا العصبية مع مجسات للسيليكون في الجرذ خدر

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

سريع الصغرى، الرحلان الشاردي من الغلوتامات وGABA: أداة مفيدة لبحث تكامل متشابك

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

وصفها الوراء من خلايا الشبكية العقدة في اسماك الزرد الكبار مع الأصباغ نيون

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

إعداد العصبية المشارك الثقافات واحدة مع الدقة الخليوي

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

حمل اللدونة من نجمي المستقبلات بواسطة التلاعب أسعار اطلاق النار متعلق بالخلايا العصبية

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

الكمي لشعيري أكتين (F-الأكتين) نقاط وفي الجرذ العصبونات القشرية

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...