Name: development of a negative selectable marker for entamoeba histolytica
Uploaded: 2010-12-12T17:30:00
Duration: 6 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica at JoVE.com

نود أن نشكر الدكتور فيليب Erbs لتزويدنا تسلسل FCU1 الجينات. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح منظمة العفو الدولية 26649.

1. FCU نظام التحديد السلبية في نسج المتحولة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم إنشاء خط السيطرة ناقلات (HM1 / pKT3M) والخط التجريبي (HM1/pKT3M-FCU1) من 1،2 التقنيات الموصوفة سابقا. البذور خطوط قيد الدراسة من أنابيب الأسهم إلى T - 25 قوارير والحفاظ على الاختيار عن طريق إضافة المضادات الحيوية المناسبة (12 ميكروغرام / مل G418) في المتوسط ​​3 TYI - S - 33. والقوارير وينبغي 70-80 ٪ متموجة بعد 16-18 ساعة من النمو بنسبة 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعداد جديدة من محلول المخزون 50mM فلوروسيتوزين - 5 (5 - FC ، سيغما) في المتوسط ​​TYI - S - 33 الدافئة. دوامة بصرامة لعدة دقائق لإذابة 5 - FC تماما. فلتر تعقيم محلول المخزون بتمريرها من خلال 0،22 ميكرون التصفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النواشط الحصاد بوضع القوارير على الجليد لمدة 3-5 دقائق وجمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 200xg لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. Resuspend الكرية في المتوسط ​​TYI الطازجة وعدد الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم تجربة نموذجية يستخدم 0.5 X 10 4 خلايا لكل بئر من 48 لوحة بشكل جيد في الحجم النهائي من 1 مل ، وتكرر ثلاث نسخ لكل حالة اختبار. بالإضافة إلى ذلك ، لتسهيل القياسات الفلورسنت ، وتستخدم لوحة منفصلة لكل سلالة في نقطة زمنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور 0.5 X 10 4 خلايا في كل اختبار جيد ل5 - FC التركيز ، في ثلاث نسخ. الحفاظ على ضغط اختيار المضادات الحيوية في المتوسط ​​TYI. الآن إضافة المبلغ المطلوب من 5 FC حل الأسهم والنواشط كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحات في حقيبة اللاهوائي عند 37 درجة مئوية. </li></ol> 2. تحديد اختيار الكفاءة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 2 ملغ / مل حل الأسهم الخضراء CMFDA تعقب الخلية (Invitrogen) في DMSO. الحل لجعل العمل تمييع المخزون 1000 - أضعاف في المتوسط ​​TYI المصل الحرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المتوسطة تماما من لوحات واستبدال ثقافة أتروفة مع 150 ميكرولتر CMFDA TYI المصل خالية تحتوي. تستمر الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة محلول الصبغة من الآبار وقراءة لوحة في مقياس التألق الطيفي Spectramax microplate M2. يجب تعيين الطول الموجي 492 نانومتر في الإثارة وانبعاث مضان قراءة في 517 نانومتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقارنة القيم مضان للخلايا السيطرة مقابل transfectants الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة القراءة لوحات في كل فترة زمنية. الاستخدام الإيجابي المناسب (TYI فقط) والسلبية (25 ميكروغرام / مل هيغروميسين) آبار مراقبة في كل لوحة. </li></ol> 3. ممثل النتائج وهاء وأظهرت transfectants نسج التعبير القوي للFCU1 كودون الأمثل المؤتلف (الشكل 1) ، وعندما يتبع هذا البروتوكول بشكل صحيح النتائج في القضاء الانتقائي للE. معربا عن الخلايا نسج FCU1 في وجود 0.5 مم 5 - فلوروسيتوزين. الخلايا السيطرة ، في المقابل تستمر في النمو عادة ما يصل الى 5 من تركيز ملي FC - 5 والوصول التقاء بين 72 و 96 ساعة (الشكل 2 - A). وlysed تماما الخلايا FCU1 تحمل في 48 ساعة عندما يتم النظر إلى الآبار التي تمت معالجتها تحت المجهر. هذه أيضا تظهر عندما انخفض مضان ملطخة CMFDA صبغ الحيوية التي تستخدم في الدراسات الكمية التي تنطوي على عدد كبير من العينات (الشكل 2 ب). نظام FCU1/5-FC هو أداة فعالة وقوية لاختيار سلبية E. نسج النواشط. <img src="/files/ftp_upload/2410/2410fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. جيل من E. نسج HM1 transfectants معربا عن اختيار علامة سلبية (أ) تم الكشف عن بروتين FCU1 المؤتلف وصمة عار على استخدام الألغام المضادة للغرب ج Myc الأضداد (اللوحة العلوية). كما هو متوقع ، يمكن الكشف عن عصابة 42kDa (الذي أبداه سهم) في مجموع lysate من transfectants FCU ولكن ليس في ناقلات وحدها transfectants السيطرة. لوحة أسفل يظهر نفسه لطخة بحث مع الأضداد المضادة أكتين كعنصر تحكم التحميل. (ب) نتائج PCR الوقت الحقيقي يظهر التعبير عن الكمية FCU1 مرنا محددة لتطبيع lgl4 السيطرة. <img src="/files/ftp_upload/2410/2410fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. الحساسية المخدرات في المختبر من E. transfectants نسج معربا عن اختيار علامة سلبية منحنيات بقاء transfectants التحكم (أ) و (ب) transfectants FCU1 معربا عن تربيتها في 48 لوحة جيدا. زرعت الخلايا في وجود تركيزات المتزايد للدواء مساعد - 5 - فلوروسيتوزين ؛ كان كميا بقاء الخلية تلطيخ CMFDA في كل فترة زمنية كما تدل على محور X. ويمثل المحور Y - الوحدات ومضان هو انعكاس مباشر للسكان الخلية على قيد الحياة. يرجى ملاحظة أن التعبير عن transfectants FCU1 أظهرت حساسية كبيرة في تركيز دواء مساعد 0.5mM مقارنة السيطرة. ولوحظ وجود خلايا في نقطة زمنية 120h في هذه الآبار وCOMقلص لنمو متموجة ينظر في آبار المراقبة المقابلة تحت المجهر (لا تظهر البيانات). الرطوبة يدل 25μg / مل هيغروميسين يستخدم كعنصر تحكم سلبية.

<ol>
	<li>Olvera, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Entamoeba+histolytica+trophozoites+by+lipofection.">Stable transfection of Entamoeba histolytica trophozoites by lipofection.</a> Arch. Med. Res. , 49-51 (1997).</li><li>Saito-Nakano, Y., Yasuda, T., Nakada-Tsukui, K., Leippe, M., Nozaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rab5-associated+vacuoles+play+a+unique+role+in+phagocytosis+of+the+enteric+protozoan+parasite+Entamoeba+histolytica.">Rab5-associated vacuoles play a unique role in phagocytosis of the enteric protozoan parasite Entamoeba histolytica.</a> J. Biol. Chem. 279, 49497-49507 (2004).</li><li>Diamond, L. S., Harlow, D. R., Cunnick, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+medium+for+the+axenic+cultivation+of+Entamoeba+histolytica+and+other+Entamoeba.">A new medium for the axenic cultivation of Entamoeba histolytica and other Entamoeba.</a> Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 72, 431-432 (1978).</li><li>Clark, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anaerobic parasitic protozoa : genomics and molecular biology. , (2010).</li><li>Linford, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+hairpin+RNA-mediated+knockdown+of+protein+expression+in+Entamoeba+histolytica.">Short hairpin RNA-mediated knockdown of protein expression in Entamoeba histolytica.</a> BMC Microbiol. 9, 38-38 (2009).</li><li>Solis, C. F., Guill&#233;n, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+genes+by+RNA+interference+in+the+protozoan+parasite+Entamoeba+histolytica.">Silencing genes by RNA interference in the protozoan parasite Entamoeba histolytica.</a> Methods Mol. Biol. 442, 113-128 (2008).</li><li>Solis, C. F., Santi-Rocca, J., Perdomo, D., Weber, C., Guill&#233;n, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+bacterially+expressed+dsRNA+to+downregulate+Entamoeba+histolytica+gene+expression.">Use of bacterially expressed dsRNA to downregulate Entamoeba histolytica gene expression.</a> PLoS ONE. 4, e8424-e8424 (2009).</li><li>MacFarlane, R. C., Singh, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+dsRNA-based+gene+silencing+in+Entamoeba+histolytica:+implications+for+approaches+to+genetic+analysis.">Loss of dsRNA-based gene silencing in Entamoeba histolytica: implications for approaches to genetic analysis.</a> Exp. Parasitol. 119, 296-300 (2008).</li><li>Dhar, S. K., Vines, R. R., Bhattacharya, S., Petri, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosomal+DNA+fragments+enhance+the+stability+of+transfected+DNA+in+Entamoeba+histolytica.">Ribosomal DNA fragments enhance the stability of transfected DNA in Entamoeba histolytica.</a> J. Eukaryot. Microbiol. 45, 656-660 (1998).</li><li>Erbs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cancer+gene+therapy+by+adenovirus-mediated+transfer+of+a+bifunctional+yeast+cytosine+deaminase/uracil+phosphoribosyltransferase+fusion+gene.">In vivo cancer gene therapy by adenovirus-mediated transfer of a bifunctional yeast cytosine deaminase/uracil phosphoribosyltransferase fusion gene.</a> Cancer Res. 60, 3813-3822 (2000).</li><li>Braks, J. A. M., Franke-Fayard, B., Kroeze, H., Janse, C. J., Waters, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+application+of+a+positive-negative+selectable+marker+system+for+use+in+reverse+genetics+in+Plasmodium.">Development and application of a positive-negative selectable marker system for use in reverse genetics in Plasmodium.</a> Nucleic Acids Res. 34, e39-e39 (2006).</li><li>Maier, A. G., Braks, J. A. M., Waters, A. P., Cowman, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+selection+using+yeast+cytosine+deaminase/uracil+phosphoribosyl+transferase+in+Plasmodium+falciparum+for+targeted+gene+deletion+by+double+crossover+recombination.">Negative selection using yeast cytosine deaminase/uracil phosphoribosyl transferase in Plasmodium falciparum for targeted gene deletion by double crossover recombination.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 150, 118-121 (2006).</li></ol>

وقد رعت إنتاج هذا الفيديو من قبل الدريتش سيغما ، المؤتمر الوطني العراقي ، والتي تنتج بعض الكواشف المستخدمة في هذه المقالة.

وإن كانت هناك تقدما ملموسا في مجال البيولوجية الجزيئية الأدوات المتحولة لا توجد طرق الحالية المتاحة لحذف أو تعطيل الجينات 4. أحرز ضربة قاضية للتعبير جين معين عن طريق استخدام دبوس الشعر من RNAs 5 و 6 صغيرة بالتدخل RNA ، وأعرب عن البكتريا الرنا المزدوج الجديلة 7. لكن هذه الأساليب في حين فعالة للجينات الهدف منها ، والعديد من القيود بما في ذلك استخدام المواد الكيميائية مكلفة ، واختيار المستمرة ضد المضادات الحيوية وضرورة التحقق من صحة مستمر بسبب ارتفاع معدل حدوث انعكاس على مر الزمن (أليسيا ينفورد ، اتصال شخصي) 8. يمكن لأي البلازميد في تكرار المتحولة كما أن هناك على ما يبدو ليس شرطا التسلسل الدقيق لأصول تكرار الحمض النووي 9 ، ومرة واحدة حتى transfected ، فإنه عادة ما يكون من الصعب علاج البلازميد. وهذا يحد من إمكانية استخدام البلازميدات سليمة في التجارب خروج المغلوب وإعادة التركيب الجيني. علامات التحديد السلبي هي المكونات الرئيسية لاستهداف الجينات والأساليب التي يمكن استخدامها للقضاء على المجموعات السكانية الفرعية المترابطة. أعربنا عنها بنجاح كودون الأمثل FCU1 الجينات المتحولة في نسج واختبار قدرته على اختيار علامة a سلبية. وقد استخدم هذا الانصهار الجين للعلاج بالجينات انتحار الخلايا السرطانية البشرية والتمثيل الغذائي للدواء مساعد 5 - FC في المنتجات السامة الناتجة المصب في تثبيط تخليق الحمض النووي الريبي و10. وقد استخدمت مؤخرا في FCU1 a علامة سلبية في اختيار المتصورة ، وآخر طفيلي ، وتم العثور على الخلايا المنجلية berghei FCU1 معربا عن أن ما يقرب من 1000 مرات أكثر حساسية للدواء مساعد في المختبر والمجراة في المعاملة مع نادي - 5 عن مقتل أكثر من 99،9 ٪ من اصابة الطفيليات المؤتلف في نموذج الفأر الكريات الحمر في المرحلة 11 من الملاريا. E. وأظهرت الخلايا نسج FCU1 فقط التعبير عن حساسية 30 ضعفا متزايدا لدواء مساعد 5 - FC على النقيض من الحساسية التي لوحظت في P. berghei. يمكن أن الأسباب المحتملة لهذا الأمر مجموعة كبيرة من النيوكليوتيدات المتاحة في وسط النمو تتنافس مع الأيضات السامة. في كلا P. وberghei P. وقد استخدمت علامة FCU1 المنجلية في تعطيل الجينات المستهدفة. دراسات 11،12. ونحن نهدف إلى التلاعب في الجينات المتحولة باستخدام إعادة التركيب مثلي. المصادقة على نظام اختيار السلبية FCU1/5-FC يعد خطوة هامة نحو تحقيق هذا الهدف.

<table border="1">
<tr>
<td>Material Name</td>
<td>Type</td>
<td>Company</td>
<td>Catalogue Number</td>
<td>Comments</td>
</tr>
<tr>
<td>TYI-S-33 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Reference included in the text</td>
</tr>
<tr>
<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&N4=F7129|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC">5-Fluorocytosine</a></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F7129</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell tracker green CMFDA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>C2925</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spectra Max M2 plate-reader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Devices</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		
</table>

development of a negative selectable marker for entamoeba histolytica

المتحولة الحالة للنسج هو العامل المسبب لداء الأميبات وتصيب ما يصل الى 10 ٪ من سكان العالم. التقنيات الجزيئية التي مكنت من المتابعة وأسفل تنظيم التعبير الجيني الاعتماد على ترنسفكأيشن من البلازميدات حافظت بثبات. في حين أن هذه قد زادت من فهمنا للعوامل الفوعة المتحولة ، والقدرة على الاندماج في جينوم الحمض النووي الخارجية ، الأمر الذي سيسمح عكس التجارب علم الوراثة ، وسيكون ميزة كبيرة في دراسة هذا الطفيلي. التحديات التي يمثلها هذا الكائن الحي وتشمل عدم القدرة على تحديد للأحداث ، وصعوبة إعادة التركيب مماثل لعلاج DNA البلازميد episomal من النواشط transfected. النتائج في وقت لاحق على خلفية عالية من الحمض النووي الخارجية ، وهي مشكلة رئيسية في تحديد النواشط فيه بحسن نية الحدث التكامل الجينومية حدث. نحن تقرير وضع نظام اختيار سلبية على أساس التعبير المعدلة وراثيا من خميرة نازعة أمين السيتوزين واليوراسيل phosphoribosyl ترانسفيراز خيمر (FCU1) مع دواء مساعد واختيار 5 - فلوروسيتوزين (5 - FC). انزيم تحويل FCU1 غير سامة 5 - FC السامة في فلورويوراسيل - 5 و 5 ، 5&#39; - fluorouridine الأدينوزين هاء. تم العثور على خطوط نسج معربا عن FCU1 ليكون 30 أضعاف أكثر حساسية للدواء مساعد مقارنة سلالة السيطرة.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica at JoVE.com

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

نحن تقرير وضع نظام اختيار سلبية في<em&gt; E. نسج</em&gt; استنادا إلى التعبير المعدلة وراثيا من البروتين خيالية (FCU1) والاختيار مع دواء مساعد 5 - فلوروسيتوزين. البروتين FCU1 هي عبارة عن اندماج نازعة أمين السيتوزين الخميرة واليوراسيل ناقلة الفسفوريبوزيل. نتج تعبير عن زيادة في FCU1<em&gt; E. نسج</em&gt; الحساسية تجاه فلوروسيتوزين - 5.

وضع علامة سلبية لإختيار a المتحولة الحالة للنسج</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) Enzyme

In vitro tRNA Methylation Assay with the Entamoeba histolytica DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 Ehmeth Enzyme

الفحص في المختبر مثلأيشن الحمض الريبي النووي النقال مع الحمض النووي للنسج المتحولة والحمض الريبي النووي النقال Dnmt2 Methyltransferase (Ehmeth) انزيم

Protozoan parasites are among the most devastating infectious agents of humans responsible for a variety of diseases including amebiasis, which is one of ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

دراسة التوتة اختيار الإيجابية والسلبية من قياس التدفق الخلوي

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

باستخدام الكيمياء فوق لقياس تأثير عدوى فيروسية في خلية المضيف RNA التجميعي

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

التعرف السريع على البكتيريا سالبة الجرام من ثقافة الدم في مرق عن طريق MALDI-TOF الطيف الكتلي

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

تحليل الأضرار الظهارية التي تنتجها<em&gt; المتحولة الحالة للنسج</em&gt; عدوى

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

الكشف عن خلايا الدم البيضاء الإنسان مستضد المؤشرات الحيوية في سرطان الثدي الاستفادة تسمية خالية جهاز الاستشعار البيولوجي تقنية

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

تطوير نظام الفيروسات مراسل التهاب الكبد B لرصد المراحل المبكرة من دورة النسخ المتماثل

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

استخدام كبسولات لالتلطيخ السلبي من العينات الفيروسية ضمن بيوكنتينمنت

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

Simultaneous Distinction of Monospecific and Mixed DFS70 Patterns During ANA Screening with a Novel HEp-2 ELITE/DFS70 Knockout Substrate

تمييز واحد من مونوسبيسيفيك وأنماط DFS70 مختلطة أثناء الفحص أنا مع الركازة رواية خروج المغلوب النخبة/DFS70 أبو عبدالله 2

Systemic autoimmune connective tissue disorders are characterized by circulating antinuclear antibodies (ANA). Although there are several technologies ...