Name: paraffin-embedded and frozen sections of drosophila adult muscles
Uploaded: 2010-12-27T17:30:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles at JoVE.com

نشكر الأستاذ Eichele على السماح لنا استخدام مشراح البرد. وقد تم تمويل العمل ماكس بلانك Gesselschaft.

1. إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد طازجة لتثبيتي Carnoy الايثانول من خلال الجمع بين المطلق والكلوروفورم وحمض الخليك الجليدية في نسبة 06:03:01 التوالي. 3 وهذا ، فضلا عن حلول لياقات غمر يجب أن تبقى في تلوين الزجاج الجرار (انظر القسم الكواشف للتوصية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير رقائق الألومنيوم جيوب الحجم الصحيح للالياقات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول التالية في تلطيخ الجرار : 2 X 40 ٪ إيثانول ، إيثانول 70 ٪ ، 2 X الإيثانول بنسبة 100 ٪ ، methylbenzoate (MB) ، 50/50 MB V / V والبارافين ، 2 X البارافين. ضع MB البارافين والحاويات في مجموعة حاضنة ل60-65 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البارافين الدافئ لتصب في جيوب لاحباط 60-65 درجة مئوية. </li></ol> 2. الذباب في تحديد الياقات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق 4 طوق تحت مجهر باستخدام الشريط في وضع عمودي حيث يمكنك ان ترى نقطة دخول للطيران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الذباب باستخدام ثاني أكسيد الكربون أو انخفاض درجة حرارة الجسم عن طريق استخدام كتلة الجليد. يجب الحرص على عدم تجميد الذباب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط ، والتقاط الذباب الفردية عن طريق الاستيلاء على اجنحتها والمكان إلى طوق الموجهة بشكل صحيح (الرأس والصدر على رأس من ريش والبطن تحت ريش). وينبغي أن تناسب بسهولة 10-20 الذباب في الترقوة. </li></ol> ملاحظة : إذا كنت تحليل المورثات عدة ، لا ننسى لتقديم مذكرة لعدد ذوي الياقات البيضاء وراثى المقابلة. 3. أقسام البارافين من الصدور ذبابة الفاكهة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ذوي الياقات البيضاء إلى الحل Carnoy وإصلاح الأنسجة عند 4 درجات مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التثبيت ، يذوى العينة باستخدام تركيزات متزايدة من الايثانول. لمدة 10 دقيقة كل غمر ذوي الياقات البيضاء في 40 ٪ (2 مرات) ، 70 ٪ و 100 ٪ (2 مرات) الايثانول في درجة حرارة الغرفة. احتضان ذوي الياقات المقبل في حل ميغابايت MB والبارافين + (1:1) لمدة 30 دقيقة في كل ثم اختراق طوق في تغييرين من البارافين لمدة 60 دقيقة في كل 60-65 درجة مئوية. الانتقال السريع لذوي الياقات البيضاء في جيب احباط وتمتلئ ذاب (60-65 درجة مئوية) البارافين. وضعه في درجة حرارة الغرفة والسماح للالبارافين ليصبح الثابت (فمن الأفضل أن تترك بين عشية وضحاها). لاحظ أنه يمكن أن توضع في الجيب طوق احباط في توجهات مختلفة ، اعتمادا على اتجاه المقاطع التي تحتاج إليها (الطولية أو العرضية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بسط كتل البارافين الجافة بأطواق من احباط ومنفصلة بلطف طوق من كتلة البارافين. مع مساعدة من شفرة حادة أو مشرط قطع بعناية من البارافين من خارج النسيج من مختلف أنحاء الطيران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض كتلة البارافين مع الخطوات 7-10 ميكرون الباب على مشراح التناوب والسماح بتعويم قطع الأنسجة شقة في حمام المياه 37 درجة مئوية. مكان النسيج مقطوع على شرائح والسماح للتجفيف القطبية طوال الليل. ويمكن استخدام هذه الشرائح لتلطيخ مع hematoxyline ويوزين (الشكل 1A - D) ، طولويدين زرقاء ، الأزرق الأنيلين أو وفاة أخرى لتصور هياكل الأنسجة ، فضلا عن تلطيخ الأضداد (الشكل 1E - E ``). </li></ol> 4. Cryosections الصدور من ذبابة الفاكهة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما هو الحال مع أقسام البارافين ، وإعداد الذباب في الترقوة والأزياء جيب رقائق الألومنيوم. ستكون هناك حاجة إلى تجميد برودة لتحضير العينات. تأكد من أن حوالي برودة -60 درجة مئوية ، واستخدام الايثانول قليلا والثلج الجاف للسماح للوصول إلى هذه الدرجة. وضع قبل ساعة من بدء التجربة زجاجة من البرد المتوسطة تضمين - (الأنسجة تيك مجمع أكتوبر) رأسا على عقب في البراد 4 درجات مئوية وذلك لتبريده والتقليل من تشكيل فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ذوي الياقات البيضاء مع الذباب إلى جيب احباط الذي تم قبل عدة دقائق لتبرد داخل برودة تجميد وتعبئة بسرعة مع مجمع البرد التضمين. السماح لعينة من أجل تجميد 30-10 دقيقة. بسط بعناية تشكيل كتلة داخل برودة ، منفصلة بلطف طوق من كتلة التضمين ووضعها في -20 درجة مئوية لمدة يوم واحد على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع العضلات المجمدة على البرد مشراح بين -15 و -18 درجة مئوية مع سمك مقطع من 10-15 ميكرون. مكان على الشرائح الاستقطاب والحفاظ على -20 درجة مئوية حتى على استعداد للقيام مزيد من المعالجة. نقترح إصلاح الأنسجة في 4 ٪ الفورمالديهايد PBS حل لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل تلوين الأجسام المضادة. </li></ol> 5. الكشف عن الدهون في العضلات ذبابة الفاكهة ويمكن الكشف عن قطيرات الدهن بزيت أحمر يا وصمة عار على cryosections باستخدام البروتوكول المعتمد من سيبر وThummel 5. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التثبيت ، وتغسل الشرائح بالماء مرتين لمدة 5 دقائق ، معايرتها في بروبيلين غليكول لمدة 10 دقيقة وصمة عار لاحتضان ح النفط في الحمراء O 3 في درجة حرارة الغرفة. ثم يغسل عينات 2 مرات لمدة 5 دقائق في غليكول البروبيلين و 30 دقيقة في برنامج تلفزيوني. جبل في الجلسرين 30 ٪. </li></ol> 6. ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/2438/2438fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> تينلدى عودتهم 1. Parrafin جزءا لا يتجزأ من المقاطع وHematoxyline eosine عرضية الملون (AB) والطولية (CD) أجزاء من عضلات الطيران غير المباشرة. A و C منظم معارض العضلات العادية. يتم تمثيل غير طبيعي من قبل العضلات وحجم التشكل على B و D على التوالي (الأسهم السوداء). القسم الملون من عرضية الصدر مع مكافحة ذبابة الفاكهة LamC ، علامة مغلف النووية ودابي النووية وصمة عار (EF). عرض موسع العادية (السهم الأحمر) وتدهورت (السهم الأصفر) العضلات (F). G يمثل الجزء الملون من ذبابة الفاكهة الأمعاء مع LamC ودابي. <img src="/files/ftp_upload/2438/2438fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. أقسام المجمدة ألف المقاطع العرضية المجمدة للالملون الصدر مع ذبابة الفاكهة الحمراء النفط O ، قطرات الدهون التسمية. المقاطع الطولية باء المجمدة للعضلات الطيران غير المباشرة ملطخة المديرية العامة لمكافحة والعضلات علامة غمد الليف العضلي ودابي.

<ol>
	<li>Miller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+internal+anatomy+and+histology+of+the+imago+of+Drosophila+melanogaster.">The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster.</a> , (1950).</li><li>Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+muscle+and+neuronal+disorders+in+a+Drosophila+model+of+muscular+dystrophy.">Dissecting muscle and neuronal disorders in a Drosophila model of muscular dystrophy.</a> The EMBO journal. 26, 481-481 (2007).</li><li>Kucherenko, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+modifier+screens+reveal+new+components+that+interact+with+the+Drosophila+dystroglycan-dystrophin+complex.">Genetic modifier screens reveal new components that interact with the Drosophila dystroglycan-dystrophin complex.</a> PloS one. 3, e2418-e2418 (2008).</li><li>Puchtler, H., Waldrop, F. S., Conner, H. M., Terry, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carnoy+fixation:+practical+and+theoretical+considerations.">Carnoy fixation: practical and theoretical considerations.</a> Histochemie. 16, 361-36 (1968).</li><li>Ashburner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila - A Laboratory Manual. , (1989).</li><li>Sieber, M. H., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DHR96+nuclear+receptor+controls+triacylglycerol+homeostasis+in+Drosophila.">The DHR96 nuclear receptor controls triacylglycerol homeostasis in Drosophila.</a> Cell metabolism. 10, 481-481 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Stainless steel collars</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Specially constructed</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools GmbH</td>
<td>11295-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Aluminum foil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blade or scalpel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wheaton macro staining jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wheaton Science Products </td>
<td>900200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microtome</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Model: Hyrax M25</td>
</tr>
<tr>
<td>Cryo-microtome</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Model CM3050S</td>
</tr>
<tr>
<td>60-65&deg;C Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Large enough to hold at least 4 staining jars</td>
</tr>
<tr>
<td>Freezing cooler with metal block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Store at -80&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Super-frost slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher Scientific</td>
<td>9161155</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Recommend 24 X 40 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Chloroform</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>288306</td>
<td>Analytical grade </td>
</tr>
<tr>
<td>Glacial acetic acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Merck</td>
<td>100063</td>
<td>Analytical grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Merck</td>
<td>100983</td>
<td>Analytical grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Methylbenzoate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M29908-500G</td>
<td>Analytical grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraplast plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>76258</td>
<td>Paraffin</td>
</tr>
<tr>
<td>Tissue-Teck O.C.T. compound</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sakura</td>
<td>4583</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>16% formaldehyde, methanol free</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>18814</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycerol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G5150-1L</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

paraffin-embedded and frozen sections of drosophila adult muscles

التوصيف الجزيئي للضمور العضلات واعتلال العضلات في البشر قد كشف تعقيد مرض في العضلات والتحليل الجيني للمواصفات العضلات ، وقدمت وظيفة في تشكيل نموذج نظم معلومات قيمة حول فسيولوجيا العضلات. ولذلك ، وتحديد وتوصيف الآليات الجزيئية التي تكمن وراء تلف العضلات أمر بالغ الأهمية. بنية العضلات الكبار متعددة الألياف ذبابة الفاكهة تشبه العضلات المخططة الفقاريات (1) وقابلية الإستطراق الوراثي للذبابة الفاكهة جعلت من نظام رائع لتحليل التصنع مورفولوجيا العضلات وتوصيف العمليات التي تؤثر على وظيفة العضلات في البالغين المسنين الذباب 2. هنا نقدم تقنية النسيجي لإعداد البارافين المجمد وجزءا لا يتجزأ من المقاطع للعضلات الصدر ذبابة الفاكهة. تسمح هذه الاستعدادات للأنسجة أن تكون ملطخة البقع النسيجية الكلاسيكية والبروتين المسمى مع الأصباغ كشف ، وتحديدا cryosections مثالية للكشف المناعى من البروتينات في عضلات سليمة. وهذا يسمح لتحليل بنية النسيج العضلي ، وتحديد العيوب الشكلية ، والكشف عن نمط التعبير عن العضلات / عصبون محددة البروتينات في العضلات الكبار ذبابة الفاكهة. ويمكن أيضا أن تكون هذه التقنيات معدلة بشكل طفيف لsectioning من أجزاء أخرى من الجسم.

Watch this Scientific Journal Video about Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles at JoVE.com

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

تحديد الآليات الكامنة وراء تلف العضلات أمر بالغ الأهمية. هنا نقدم تقنية النسيجي لإعداد البارافين المجمد وجزءا لا يتجزأ من المقاطع للعضلات الصدر ذبابة الفاكهة. هذا يسمح تحليل مورفولوجيا العضلات وتوطين البروتين وغيرها من مكونات الخلية العضلية.

البارافين ، جزءا لا يتجزأ من والمجمدة أقسام ذبابة الفاكهة</emالعضلات الكبار>

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Whole Cell Recordings from Brain of Adult Drosophila

تسجيلات كاملة من خلية دماغ ذبابة الفاكهة الكبار

In this video, we demonstrate the procedure for isolating whole brains from adult Drosophila in preparation for recording from single neurons. We begin by ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

عالية الدقة تعقب الفيديو للتنقل في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

إعداد وتطوير الكبار ذبابة الفاكهة الأمخاخ والشبكية للتصوير لايف

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

تشريح Oenocytes من الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses

استخراج الحمض النووي من مادة البارافين جزءا لا يتجزأ من التحليلات الجينية واللا جيني

Disease development and progression are characterized by frequent genetic and epigenetic aberrations including chromosomal rearrangements, copy number ...

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

إعداد الكبار ذبابة الفاكهة لعيون Sectioning رقيقة والتحليل المجهري

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

Proteomic Sample Preparation from Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissue

إعداد نموذج البروتين من الفورمالين الثابتة والبارافين جزءا لا يتجزأ من نسيج

Preserved clinical material is a unique source for proteomic investigation of human disorders. Here we describe an optimized protocol allowing large scale ...

qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue

QPCR هو أسلوب حساس وسريع للكشف عن الحمض النووي من Cytomegaloviral في الفورمالين الثابتة، جزءا لا يتجزأ من البارافين-الأنسجة خزعة

It is crucial to identify cytomegalovirus (CMV) infection in the gastrointestinal (GI) tract of immunosuppressed patients, given their greater risk for ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

المناعي غير المباشر على أقسام المجمدة من الماوس الغدة الثديية

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

توظيف الرقمية القطرة PCR لكشف الطفرات BRAF V600E في البارافين جزءا لا يتجزأ من خطوط الخلايا المعيار المرجعي الفورمالين الثابتة

ddPCR is a highly sensitive PCR method that utilizes a water-oil emulsion system. Using a droplet generator, an extracted nucleic acid sample is ...