Name: protocol for recombinant rbd-based sars vaccines: protein preparation, animal vaccination and neutralization detection
Uploaded: 2011-05-02T15:00:00
Duration: 12 min 9 s
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इस अध्ययन के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) (AI68002 RO1) के संयुक्त राज्य अमेरिका के द्वारा समर्थित किया गया था.

1. पुनः संयोजक सार्स-COV आरबीडी प्रोटीन तैयार <ol><li> कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक अभिकर्मक तैयार <ol><li> 2X HBS बफर तैयारी: एक साथ मिश्रण के 16 ग्राम NaCl, ना 2 4 HPO * 7 2 हे के 0.4 ग्राम, और HEPES के 13.0 ग्राम. 7.00 पीएच समायोजित और आसुत जल में 1000 एमएल कुल मात्रा लाने के. समाधान के लिए नसबंदी, विभाज्य फ़िल्टरिंग और यह -20 डिग्री सेल्सियस पर दुकान करने के बाद सुझाव: पीएच मान के कोई बदलाव अभिकर्मक परिणाम को प्रभावित करेगा. इस प्रकार, यह सलाह दी जाती है (उदाहरण के लिए, 6.99, 7.00, या 7.01) 7.00 के आसपास कई पीएच मान का परीक्षण और नीचे शुरू की विधि का उपयोग अभिकर्मक के लिए सबसे अच्छा एक खोजने के है. </li><li> 2.5 एम CaCl 2 तैयारी: आसुत जल के लिए 200 एमएल की एक अंतिम मात्रा में 2 CaCl * 2H 2 हे के 73.5 ग्राम जोड़ें . -20 डिग्री सेल्सियस पर समाधान की दुकान फ़िल्टर </li></ol></li><li> पुनः संयोजक प्लाज्मिड अभिकर्मक और शुद्धि प्रोटीन <ol><li> 50-70% पर 293T कोशिकाओं अभिकर्मक पहले confluency 24 घंटे भाजित. T-175 सेमी 40 एमएल DMEM 37 FBS और 1% पेनिसिलीन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (पी / एस) 10% गर्मी निष्क्रिय (HI) युक्त ° 5% सीओ 2 सी में 2 टिशू कल्चर बोतल में कोशिकाओं के विकास. </li><li> सभी अभिकर्मक अभिकर्मकों कमरे के तापमान पर किया जा चाहिए अभिकर्मक के सामने लाया है. इन अभिकर्मकों 2X HBS, 2.5m 2 CaCl, DiH 2 हे, और rRBD प्लाज्मिड 6 शामिल हैं. सुझाव: अंतिम रीकॉम्बीनैंट प्लाज्मिड के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति एक संकेत पेप्टाइड होते संस्कृति सतह पर तैरनेवाला व्यक्त पुनः संयोजक प्रोटीन का स्राव सुनिश्चित किया जाना चाहिए का निर्माण. एक 6x उनका टैग आसान शुद्धि के लिए व्यक्त प्रोटीन के सी - टर्मिनल के लिए जोड़ा जा सकता है. </li><li> एक 50 (ए) एमएल और एक 15 एमएल (बी) बी.डी. फाल्कन ट्यूब तैयार है, और जैसा कि तालिका 1 में दर्शाए ट्यूबों के लिए अभिकर्मकों जोड़ने. ट्यूब में ट्यूब ए बी 2X HBS बफर जोड़ें, 2.5m CaCl 2 जोड़ने और प्लाज्मिड rRBD, और DiH ओ 2 में आवश्यकता मात्रा लाने <table border="1"><tbody><tr><td colspan="4"> एक ए टी 175 सेमी 2 टिशू कल्चर (4000 / μL फ्लास्क) फ्लास्क: rRBD अभिव्यक्ति के लिए तैयार </td></tr><tr><td colspan="2"> एक ट्यूब </td><td colspan="2"> ट्यूब बी </td></tr><tr><td> 2X HBS </td><td> 2000 μL </td><td> 2.5m 2 CaCl </td><td> 200 μL </td></tr><tr><td></td><td></td><td> rRBD प्लाज्मिड डीएनए </td><td> 40 μg </td></tr><tr><td></td><td></td><td> DiH 2 करने के लिए हे </td><td> 2000 μL </td></tr><tr><td colspan="4"> बी एक 100 मिमी पेट्री पकवान (1000 μL / पकवान): सार्स pseudovirus उत्पादन के लिए तैयार </td></tr><tr><td colspan="2"> एक ट्यूब </td><td colspan="2"> ट्यूब बी </td></tr><tr><td> 2X HBS </td><td> 500 μL </td><td> 2.5m 2 CaCl </td><td> 50 μL </td></tr><tr><td></td><td></td><td> एस सार्स-COV प्लास्मिड डीएनए </td><td> 5 μg </td></tr><tr><td></td><td></td><td> एचआईवी-1 प्लाज्मिड (pNL4 - 3.luc.RE) </td><td> 5 μg </td></tr><tr><td></td><td></td><td> DiH 2 करने के लिए हे </td><td> 500 μL </td></tr></tbody></table> टेबल अभिकर्मक 1. मिश्रण तैयार करने और मात्रा तालिका 1 में सूचीबद्ध मात्रा एक अभिकर्मक इकाई के लिए कर रहे हैं. यदि अधिक बोतल या बर्तन अभिकर्मक के लिए उपयोग किया जाता है, मात्रा तदनुसार समायोजित. </li><li> एक dropwise तरीके से एक ट्यूब में डीएनए कैल्शियम ट्यूब बी समाधान में जोड़ें, जबकि लगातार और कोमल बनाए रखने एक भंवर में मिश्रण. चलो मिश्रण 20-30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर बैठते हैं. सफल कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक के लिए महत्वपूर्ण गठन वेग के आकार और आकार पर निर्भर करता है. इस प्रकार, मिश्रण लगातार धीरे धीरे vortexed होना चाहिए इस आवश्यकता को पूरा करने के लिए और, एक परिणाम के रूप में, अभिकर्मक प्रभावकारिता में सुधार. </li><li> Dropwise और भी तरीके में 293T कोशिकाओं की (4000 μL / फ्लास्क) में मिश्रण जोड़ें. इनक्यूबेटर में 37 में संस्कृति कोशिकाओं ° सी 5% सीओ 2 में. </li><li> ताजा सीरम मुक्त OPTI-सदस्य मैं कम सीरम (50 एमएल / फ्लास्क) मध्यम 8-10 घंटे के बाद अभिकर्मक के साथ संस्कृति के माध्यम से बदलें. संस्कृति कोशिकाओं को उसी हालत में दो और दिनों के लिए आगे बढ़ें. </li><li> सतह पर तैरनेवाला युक्त व्यक्त rRBD प्रोटीन 72 घंटे बाद अभिकर्मक लीजिए. सेल मलबे को हटाने के 15 मिनट के लिए 6000 rpm पर अपकेंद्रित्र. एकत्र की है और 4 ° C रातोंरात सतह पर तैरनेवाला दुकान protease अवरोध करनेवाला कॉकटेल जोड़ें. </li><li> अगले दिन, संस्कृति सतह पर तैरनेवाला से rRBD पुनः संयोजक प्रोटीन शुद्ध नी NTA Superflow निम्नलिखित निर्माता के निर्देशों का उपयोग कर. </li><li> शुद्ध Amicon अल्ट्रा -15 एकाग्रता ट्यूबों का उपयोग प्रोटीन ध्यान लगाओ. प्रोटीन एकाग्रता के बाद,एकाग्रता ट्यूबों पीबीएस जोड़ने और फिर अपकेंद्रित्र elution बफर में imidazole हटायें. प्रोटीन एकाग्रता और दुकान -80 डिग्री सेल्सियस उपयोग करें जब तक प्रोटीन शुद्ध गणना. </li></ol></li></ol> 2. माउस टीकाकरण और नमूना संग्रह <ol><li> पूर्व गर्म सिग्मा सहायक 40-45 प्रणाली (एसएएस) डिग्री सेल्सियस निर्माता के निर्देशों के अनुसार. शीशी प्रति 1 एमएल पीबीएस जोड़ें और मिश्रण अच्छी तरह से. </li><li> तालिका 2 में प्रोटोकॉल के अनुसार प्रोटीन सहायक पायस तैयार करें. पिपेट एक 1.5 एमएल ट्यूब में rRBD प्रोटीन की गणना. ट्यूब और 2-3 करने के लिए पायस फार्म मिनट लिए सख्ती भंवर SAS सहायक के बराबर मात्रा में जोड़ें. सुझाव: तालिका 2 में सूचीबद्ध मात्रा एक माउस के लिए कर रहे हैं. वास्तविक माउस इस्तेमाल किया संख्या के अनुसार मात्रा समायोजित करें. प्रत्येक समूह के लिए, साथ में प्रत्येक टीके के लिए आवश्यक प्रोटीन और सहायक मिश्रण. हमेशा की शुद्धता सुनिश्चित करने के टीकाकरण के लिए एक अतिरिक्त नमूना तैयार. <table border="1"><tbody><tr><td> समूह </td><td> 1 सेंट टीका (200 μL / माउस) </td><td> 2 एन डी टीका (200 μL / माउस) </td><td> 3 तीसरी टीका (200 μL / माउस) </td></tr><tr><td> rRBD प्रोटीन </td><td> पीबीएस में 20 μg प्रोटीन (100 μL) + 100 μL SAS </td><td> पीबीएस में 10 μg प्रोटीन (100 μL) + 100 μL SAS </td><td> पीबीएस में 10 μg प्रोटीन (100 μL) + 100 μL SAS </td></tr><tr><td> पीबीएस नियंत्रण </td><td> 100 μL पीबीएस + 100 μL SAS </td><td> 100 μL पीबीएस + 100 μL SAS </td><td> 100 μL पीबीएस + 100 μL SAS </td></tr></tbody></table> टेबल 2 माउस प्रतिरक्षण प्रोटोकॉल </li><li> Subcutaneously प्राइम - छुटकारा महिला / BALB सी (4-6 पुराने सप्ताह, 5 चूहों / समूह) चूहों, और rRBD और एसएएस के साथ दो बार को बढ़ावा देने के रूप में तालिका 2 में संकेत दिया. नियंत्रण के रूप में पीबीएस समूह का उपयोग करें. उपचर्म इंजेक्शन के लिए आम तौर पर चुना साइट कंधे ब्लेड के बीच ढीली त्वचा है. वैकल्पिक रूप से, उदर पेट सामान्यतः प्रयोग किया जाता है क्योंकि यह आसान करने के लिए इंजेक्षन, और इंजेक्शन साइटों से किसी भी रिसाव निरीक्षण कर सकते हैं. जब टीकों के दोहराया खुराक का उपयोग किया जाता है, यह आसान है के लिए विभिन्न इंजेक्शन साइटों का चयन करने के लिए, संभावित स्थानीय त्वचा प्रतिक्रियाओं को रोकने. </li><li> प्रतिरक्षण और प्रत्येक टीकाकरण के बाद 10 दिनों से पहले चतनाशून्य करनेवाली औषधि के साथ रेट्रो - कक्षीय, और गर्मी सीरा 56 डिग्री सेल्सियस 30 मिनट के लिए पूरक निष्क्रिय करने के लिए के माध्यम से चूहों भरो. स्टोर -20 डिग्री सेल्सियस पर माउस सीरा उपयोग करें जब तक. </li></ol> 3. निराकरण Pseudovirus निराकरण परख का उपयोग कर जांच <ol><li> सार्स pseudovirus तैयार <ol><li> 100 मिमी टिशू कल्चर पेट्री डिश में 293T कोशिकाओं भाजित (2x10 6 कोशिकाओं / पकवान) अभिकर्मक पहले 16 घंटे, और कोशिकाओं के रूप में ऊपर बढ़ने. </li><li> अभिकर्मक के रूप में तालिका 1 में दर्शाए अभिकर्मकों तैयार करें. सह transfect एक प्लाज्मिड एन्कोडिंग एस सार्स-COV प्रोटीन और प्लाज्मिड एन्कोडिंग लि दोषपूर्ण, luciferase व्यक्त एचआईवी -1 (pNL4 3.luc.RE) जीनोम कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक अभिकर्मक का उपयोग कर. </li><li> 10 एमएल ताजा DMEM 10% FBS और% 1 पी / एस 8-10 घंटे के बाद अभिकर्मक युक्त के साथ मध्यम बदलें. सतह पर तैरनेवाला युक्त सार्स pseudovirus 72 घंटे बाद अभिकर्मक लीजिए. </li><li> 0.45 सुक्ष्ममापी फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर pseudovirus. विभाज्य और -80 पर दुकान डिग्री सेल्सियस उपयोग करें जब तक. </li></ol></li><li> सार्स pseudovirus निराकरण परख <ol><li> 96 अच्छी तरह से टिशू कल्चर प्लेटों में 293T 10 में सार्स-COV रिसेप्टर ACE2 (ACE2/293T) 4 cells/100 / μL अच्छी तरह व्यक्त कोशिकाओं को संक्रमण से पहले 16 घंटे भाजित . </li><li> 2 गुना द्वारा सार्स pseudovirus पतला ACE2/293T कोशिकाओं में वायरस टिटर का पता लगाने के लिए. </li><li> Serially 96 अच्छी तरह से टिशू कल्चर प्लेटों में माउस सीरा पतला, और titrated सार्स pseudovirus के बराबर मात्रा में जोड़ें. 37 ° C पर एक एच. के लिए प्लेटें Preincubate </li><li> ऊष्मायन के बाद, ACE2/293T कोशिकाओं को सीरा - pseudovirus मिश्रण के 100 μL जोड़ने के लिए, और 37 पर कोशिकाओं के विकास के लिए जारी ° 5% सीओ 2 में सी. ताजा DMEM 24 घंटे बाद जोड़ें. </li><li> पूरी तरह से प्लेटों से संस्कृति supernatants 72 घंटे बाद संक्रमण को दूर. 1X luciferase सेल संस्कृति lysis अभिकर्मक (60 μL / अच्छी तरह से) जोड़ें, और 1-2 घंटे के लिए लगातार प्लेटों के कमरे के तापमान पर मिलाते साथ lysis सेल को बढ़ावा देने. </li><li> स्थानांतरण luminometer प्लेटें में सेल lysates (50 μL / अच्छी तरह से) (96 अच्छी तरह प्लेटें Microfluor). Luciferase परख प्रणाली में शामिल luciferase सब्सट्रेट (50 μL अच्छी तरह /) जोड़ें, और अल्ट्रा 384 luminometer में रिश्तेदार luciferase गतिविधि का पता लगाने. </li><li> 50% निष्क्रिय करने एंटीबॉडी (50 NT) टिटर 6 के रूप में सार्स pseudovirus निराकरण टिटर और वर्तमान की गणना. </li></ol></li></ol>

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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+of+CHO-K1-S+using+serum-free+medium+in+suspension:+a+rapid+mammalian+protein+expression+system.">Transient transfection of CHO-K1-S using serum-free medium in suspension: a rapid mammalian protein expression system.</a> Protein Expr. Purif. 40, 237-243 (2005).</li><li>Du, L., Zhao, G., Li, L., He, Y., Zhou, Y., Zheng, B. J., Jiang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenicity+and+immunogenicity+of+SARS-CoV+S+protein+receptor-binding+domain+stably+expressed+in+CHO+cells.">Antigenicity and immunogenicity of SARS-CoV S protein receptor-binding domain stably expressed in CHO cells.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 384, 486-490 (2009).</li><li>Du, L., Zhao, G., Chan, C. 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ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

सेल घनत्व के एक महत्वपूर्ण कैल्शियम फास्फेट आधारित अभिकर्मक की प्रभावकारिता को प्रभावित कारक है. हमारे अनुभव में, कम से कम 70% कक्षों की confluency सबसे अच्छा परिणाम लाता है. इस प्रकार, क्रम में अभिकर्मक दक्षता में सुधार करने के लिए, यह सिफारिश की है कि सेल घनत्व confluency के 50-70% के आसपास में रखा जाना. कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक विधि आम तौर पर अन्य अभिकर्मक तरीकों, जैसे लिपिड 16 अभिकर्मक के साथ तुलना में कम कुशल हो सोचा है. हालांकि, इस प्रोटोकॉल में, हम एक संशोधित कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक तरीका है जिससे लगातार और धीमी गति से एक भंवर में अभिकर्मक समाधान के मिश्रण उचित आकार और आकार के साथ एक वेग के गठन सुनिश्चित करता है का इस्तेमाल किया है, इस प्रकार अभिकर्मक दक्षता में सुधार.

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S7653</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Na2HPO4*7H2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S2429</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H3375</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl2*2H2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C5080</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12430</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HI FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>OPTI-MEM I Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>31985</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protease inhibitor cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>11836170001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ni-NTA Superflow</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>30450</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sigma adjuvant system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6322</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luciferase assay system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>E1501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luciferase cell culture lysis reagent (5X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Promega</td>
<td>E1531</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amicon Ultra - 15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC901024</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microfluor 96-well plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>7905</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra 384 luminometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tecan Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

protocol for recombinant rbd-based sars vaccines: protein preparation, animal vaccination and neutralization detection

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide variety of pathogens 1-3. Since the mammalian cell system is capable of post-translational modification, thus forming properly folded and glycosylated proteins, recombinant proteins expressed in mammalian cells have shown the greatest potential to maintain high antigenicity and immunogenicity 4-6.
Although no new cases of SARS have been reported since 2004, future outbreaks are a constant threat; therefore, the development of vaccines against SARS-CoV is a prudent preventive step and should be carried out. The RBD of SARS-CoV S protein plays important roles in receptor binding and induction of specific neutralizing antibodies against virus infection 7-9. Therefore, in this protocol, we describe novel methods for developing a RBD-based subunit vaccine against SARS. Briefly, the recombinant RBD protein (rRBD) was expressed in culture supernatant of mammalian 293T cells to obtain a correctly folded protein with proper conformation and high immunogenicity 6. The transfection of the recombinant plasmid encoding RBD to the cells was then performed using a calcium phosphate transfection method 6,10 with some modifications. Compared with the lipid transfection method 11,12, this modified calcium phosphate transfection method is cheaper, easier to handle, and has the potential to reach high efficacy once a transfection complex with suitable size and shape is formed 13,14. Finally, a SARS pseudovirus neutralization assay was introduced in the protocol and used to detect the neutralizing activity of sera of mice vaccinated with rRBD protein. This assay is relatively safe, does not involve an infectious SARS-CoV, and can be performed without the requirement of a biosafety-3 laboratory 15.
The protocol described here can also be used to design and study recombinant subunit vaccines against other viruses with class I fusion proteins, for example, HIV, respiratory syncytial virus (RSV), Ebola virus, influenza virus, as well as Nipah and Handra viruses. In addition, the methods for generating a pseudovirus and subsequently establishing a pseudovirus neutralization assay can be applied to all these viruses.

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Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

इस प्रोटोकॉल सार्स के खिलाफ रीकॉम्बीनैंट रिसेप्टर - बाध्यकारी डोमेन (आरबीडी) आधारित सबयूनिट टीके के अध्ययन के लिए एक सामान्य प्रक्रिया का वर्णन करता है. यह अभिकर्मक और आरबीडी 293T कोशिकाओं में प्रोटीन, आरबीडी और माउस सीरा के निराकरण की गतिविधि की स्थापना की एक सार्स pseudovirus निराकरण परख का उपयोग का पता लगाने के साथ चूहों के टीकाकरण की अभिव्यक्ति के लिए तरीके शामिल हैं.

पुनः संयोजक आरबीडी आधारित सार्स के टीके के लिए प्रोटोकॉल: प्रोटीन तैयार करना, पशु टीकाकरण और निराकरण जांच

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

चिपकने वाला टेप आधारित नमूनाकरण और प्रतिदीप्ति का संयोजन बगल में</emरैपिड पता लगाने के लिए> संकरण साल्मोनेला ताजा उपज पर

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Nanoparticle के टीकाकरण के बाद के विश्लेषण से प्रतिजन विशेष CD8 + टी सेल प्रतिक्रिया के लिए पूरे पशु इमेजिंग और प्रवाह cytometric तकनीकों

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Chimeric माउस मॉडल में संयोजक फ्लू के टीके की intranasal प्रशासन mucosal प्रतिरक्षण अध्ययन करने के लिए

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

नेनो पीसीआर द्वारा पशु नमूनों में श्वसन रोगज़नक़ों के उच्च throughput जांच

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Vivo में एक टीकाकरण मॉडल का उपयोग कर प्रतिजन-विशिष्ट टी-सेल Cytolytic फ़ंक्शन का पता लगाने के लिए परख

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing

सृजन रिकॉमबिनेंट एवियन Herpesvirus वैक्टर with CRISPR/Cas9 जीन संपादन

Herpesvirus of turkeys (HVT) is an ideal viral vector for the generation of recombinant vaccines against a number of avian diseases, such as avian ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

साल्मोनेला एसपीपी की स्क्रीनिंग के लिए एक उच्च प्रवाह मंच./शिगेला एसपीपी.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose Herpestes Auropunctatus Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

छोटे भारतीय मंगोलों में आयोफेनोक्क्सिक एसिड एनालॉग का विश्लेषण (हर्पेस्ट्स ऑरोपंचेक्टस) सेरा को ओरल रेबीज टीकाकरण जैविक मार्कर के रूप में उपयोग के लिए

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

एक मल्टीप्लेक्स, मल्टीप्लेक्स ड्यूल रिपोर्टर आईजीजी और आईजीएम सार्स-सीओवी-2 बेअसर परख एक मल्टीप्लेक्स मनका आधारित प्रवाह विश्लेषण प्रणाली के लिए

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

सार्स-कोव-2 रिसेप्टर-बाइंडिंग डोमेन एंटीबॉडी का पता लगाना एक HiBiT-आधारित बायोरिपोर्टर का उपयोग करके

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...