Name: organotypic hippocampal slice cultures
Uploaded: 2011-02-03T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Hippocampal Slice Cultures at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door NINDS - NIH R01NS060756

1. Voor het starten van de voorbereiding van de hippocampus Slices. <ol><li> Bereid het weefsel slicer door het plaatsen van een stuk van Teflon plaat en montage van een nieuw blad. </li><li> Veeg de weefselkweek (TC) kap met 70% ethanol en stel het ontleden microscoop binnen. Steriliseer de motorkap, microscoop, weefsel snijmachine en alle instrumenten voor het ontleden van 15 minuten met UV-licht. </li><li> Bereid zes goed TC platen. Voeg 750 ul slice cultuur media (SCM) per goed en plaats celcultuur inserts in elk ...

<ol>
	<li>Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+memory:+an+evaluation+of+the+hypothesis.">Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis.</a> Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).</li><li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. I. n. t. r. o. d. u. c. t. i. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+potentiation+and+structure+of+the+issue.">Long-term potentiation and structure of the issue.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 358, 607-611 (2003).</li><li>Shepherd, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The synaptic organization of the brain. , (2004).</li><li>Malinow, R., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+enhancement+shown+by+whole-cell+recordings+of+long-term+potentiation+in+hippocampal+slices.">Presynaptic enhancement shown by whole-cell recordings of long-term potentiation in hippocampal slices.</a> Nature. 346, 177-180 (1990).</li><li>Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+green+fluorescent+protein+(GFP)+into+hippocampal+neurons+through+viral+infection.">Introduction of green fluorescent protein (GFP) into hippocampal neurons through viral infection.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2010).</li><li>Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subunit-specific+rules+governing+AMPA+receptor+trafficking+to+synapses+in+hippocampal+pyramidal+neurons.">Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons.</a> Cell. 105, 331-343 (2001).</li><li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture.">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Esteban, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKA+phosphorylation+of+AMPA+receptor+subunits+controls+synaptic+trafficking+underlying+plasticity.">PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls synaptic trafficking underlying plasticity.</a> Nat Neurosci. 6, 136-143 (2003).</li><li>Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+in+living+brain+slices.">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18, 231-239 (1999).</li><li>Barria, A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subunit-specific+NMDA+receptor+trafficking+to+synapses.">Subunit-specific NMDA receptor trafficking to synapses.</a> Neuron. 35, 345-353 (2002).</li><li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue.">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li><li>Simoni, A. D. e., Griesinger, C. B., Edwards, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices:+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity.">Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550, 135-147 (2003).</li></ol>

Deze methode is gebaseerd op de methode eerst beschreven door Stoppini et al.. Elf en biedt een snelle manier om de cultuur hippocampale slices. Het belangrijkste aspect van dit protocol is het handhaven van plakjes steriel, daarom is het van cruciaal belang voor geschikte steriele technieken te gebruiken en goed te desinfecteren en steriliseren van al het materiaal in contact met het weefsel. Verschillende serums bronnen kunnen invloed hebben op de kwaliteit van de schij...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cell culture inserts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>PICM03050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6 well plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>353046</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Slicer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting</td>
<td>51425/51415</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZX7-ILLD2-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Hippocampus dissecting tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>10099-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Large utility scissors. Perfection</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>37500-00/37000-00 Right/ Left handed</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Iris Spatula</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>10093-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight spatula</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>10094-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rounded spoon micro spatula</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>57949-039</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting single cutting edge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Science</td>
<td>72946</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting tweezers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dummont</td>
<td>#2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small dissecting scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>F.S.T</td>
<td>14060-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MEM Eagle medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>50-019 PB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Horse serum heat inactivated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>26050-88</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CaCl2 (1 M)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C3881</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO4 (1 M)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M2773</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I0516</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ascorbic Acid, solution (25%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A4544</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G5767</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaHCO3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S6014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hepes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H7523</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sucrose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S5016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol Red Solution 0.5% in DPBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P0290</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P3911</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgCl2 (1 M)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M9272</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

organotypic hippocampal slice cultures

De hippocampus, een onderdeel van het limbisch systeem, speelt een belangrijke rol in het lange termijn geheugen en ruimtelijke navigatie 1. Hippocampale neuronen kunt de kracht van hun verbindingen na korte periodes van sterke activering. Dit fenomeen, bekend als de lange termijn potentiatie (LTP) kan duren voor uren of dagen en is uitgegroeid tot de beste kandidaat mechanisme voor leren en geheugen 2. Daarnaast is het goed gedefinieerde anatomie en de connectiviteit van de hippocampus drie maakten het tot een klassiek model systeem om synaptische transmissie en synaptische plasticiteit 4 te bestuderen. Als ons begrip van de fysiologie van de hippocampus synapsen groeide en moleculaire spelers werd geïdentificeerd, een behoefte om synaptische proteïnen te manipuleren werd noodzakelijk. Organotypische hippocampus culturen bieden de mogelijkheid voor een eenvoudige genetische manipulatie en precies farmacologische interventie, maar behouden synaptische organisatie die is van cruciaal belang voor het begrijpen van synaps functioneren in een meer naturalistische context dan routine cultuur gedissocieerd neuronen methoden. Hier presenteren wij een methode voor te bereiden en cultuur hippocampale slices die gemakkelijk kunnen worden aangepast aan andere hersengebieden. Deze methode maakt een eenvoudige toegang tot de plakjes voor genetische manipulatie met behulp van verschillende methoden zoals virale infectie 5,6 of biolistics 7. Daarnaast kunnen plakken eenvoudig worden teruggewonnen voor biochemische assays 8, of overgedragen aan microscopen voor beeldvorming 9 of elektrofysiologische experimenten 10.

Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Hippocampal Slice Cultures at JoVE.com

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

We beschrijven een methode om organotypische hippocampale slices die gemakkelijk kan worden aangepast aan andere hersengebieden te bereiden. Brain plakjes worden gelegd op poreuze membranen en cultuur media is toegestaan ​​om een ​​interface te vormen. Deze methode behoudt de bruto-architectuur van de hippocampus voor maximaal 2 weken in cultuur.

Organotypische hippocampus Slice culturen

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

De organotypische hippocampus Slice Cultuur Model is voor de behandeling Neuronale Letsel

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypische Cerebellaire culturen: apoptotische uitdagingen en Detectie

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypische Slice culturen van embryonale ventrale middenhersenen: Een systeem om Dopaminerge Neuronale Development Study In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

De Analyse van de Purkinje cel dendritische morfologie in organotypische slice culturen

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Post-inbedding immunogold Etikettering van Synaptic eiwitten in de hippocampus slice culturen

Immunoelectron microscopy is a powerful tool to study biological molecules at the subcellular level. Antibodies coupled to electron-dense markers such as ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypische Slice culturen om te studeren Oligodendrocyte Dynamics en Myelination

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

Gepaarde Whole Cell Opnamen in Organotypische hippocampus Slices

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

The Analysis of Neurovascular Remodeling in Entorhino-hippocampal Organotypic Slice Cultures

De Analyse van Neurovascular Verbouwing in Entorhino-hippocampus Organotypische Slice Culturen

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic Hippocampal Slice culturen als een Model voor de studie neuroprotectie en invasiviteit van tumorcellen

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation en Organotypic Slice culturen van muis embryonale hersenen voor Live-Imaging van GABAergic interneuronen migreren

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...