Name: rnai interference by dsrna injection into drosophila embryos
Uploaded: 2011-04-11T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare Stefano per Crews dysfusion cDNA, anticorpi Dys e w le mosche 1118.

1. Raccolta degli embrioni <ol><li> Impostare gabbie a 25 ° C con 2-4 giorni di età w 1118 piastre succo flies.Grape vengono cambiati ogni ora durante il giorno per sincronizzare la raccolta delle uova in 1-2 giorni prima del periodo di raccolta </li><li> Raccogliere embrioni per 1 ora a 25 ° C </li><li> Tagliare un pezzo rettangolare di agar succo d&#39;uva, tagliate leggermente al centro con una lama di rasoio, lasciare una riga nel agar </li><li> Utilizzare una sonda di metallo per il trasferimento de...

<ol>
	<li>St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+pattern+and+polarity+in+the+Drosophila+embryo.">The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo.</a> Cell. 68, 201-219 (1992).</li><li>Venken, K. J., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+technologies+for+gene+manipulation+in+Drosophila+melanogaster.">Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster.</a> Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).</li><li>Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+dsRNA-mediated+genetic+interference+to+demonstrate+that+frizzled+and+frizzled+2+act+in+the+wingless+pathway.">Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway.</a> Cell. 95, 1017-1026 (1998).</li><li>Misquitta, L., Paterson, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+gene+function+in+Drosophila+by+RNA+interference+(RNA-i):+a+role+for+nautilus+in+embryonic+somatic+muscle+formation.">Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).</li><li>Horowitz, A., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branching+morphogenesis.">Branching morphogenesis.</a> Circ. Res. 103, 784-795 (2008).</li><li>Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis:+molecular+mechanisms+of+tubulogenesis.">Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis.</a> Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).</li><li>Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branching+morphogenesis+of+the+Drosophila+tracheal+system.">Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).</li><li>Jiang, L., Crews, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfusion+transcriptional+control+of+Drosophila+tracheal+migration,+adhesion,+and+fusion.">Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion.</a> Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).</li><li>Jiang, L., Crews, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+dysfusion+basic+helix-loop-helix+(bHLH)-PAS+gene+controls+tracheal+fusion+and+levels+of+the+trachealess+bHLH-PAS+protein.">The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein.</a> Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).</li></ol>

L&#39;attuale metodo di iniezione di dsRNA consente qui una analisi molto sensibile e rapida della funzione del gene nello sviluppo di Drosophila tracheale. Questo metodo può potenzialmente essere applicato per analizzare la funzione del gene per altri tessuti e lo sviluppo degli organi.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Halocarbon oil 700</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>H8898</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Picospritzer III picopump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Parker Precision Fluidics</td>
<td>051-0500-900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro-pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>21170M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microloaders</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>930001007</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

rnai interference by dsrna injection into drosophila embryos

Screening genetico è uno dei metodi più potenti disponibili per ottenere intuizioni complesso processo biologico 1. Nel corso degli anni molti miglioramenti e strumenti per la manipolazione genetica si sono resi disponibili in Drosophila 2. Subito dopo la scoperta iniziale Frie e Mello 3 che doppio filamento di RNA possono essere utilizzate per knockdown l&#39;attività di singoli geni in Caenorhabditis elegans, è stato mostrato interferenza dell&#39;RNA (RNAi) per fornire un potente approccio inverso genetico di analizzare le funzioni del gene nello sviluppo di Drosophila organo 4, 5. Molti organi, compreso il polmone, rene, fegato e sistema vascolare, sono composti da tubolari ramificate reti di trasporto che i fluidi vitali o gas 6, 7. L&#39;analisi della formazione di Drosophila tracheale fornisce un ottimo sistema modello per studiare la morfogenesi degli altri organi tubolari 8. The Berkeley Drosophila Genome Project ha rivelato centinaia di geni che si esprimono nel sistema tracheale. Per studiare i meccanismi molecolari e cellulari della formazione del tubo, la sfida è comprendere il ruolo di questi geni nello sviluppo tracheale. Qui, abbiamo descritto un metodo dettagliato di dsRNA iniezione in embrione di Drosophila espressione genica knockdown individuali. Siamo riusciti abbattuto endogeno dysfusion (dis) espressione genica mediante iniezione dsRNA. Disfunzione è un bHLH-PAS proteina espressa nelle cellule fusione tracheali, ed è necessario per la fusione ramo tracheale 9, 10. disfunzione RNAi completamente eliminato espressione disfunzioni e ha portato in difetto di fusione tracheale. Questo metodo relativamente semplice fornisce uno strumento per identificare i geni requried per tissure e lo sviluppo degli organi in Drosophila.

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RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNA interference è stato dimostrato molto efficace per analizzare la funzione del gene in<em&gt; Drosophila</emSviluppo&gt; tracheale. Un protocollo dettagliato utilizzato da Jiang laboratorio di iniettare dsRNA in embrioni di volare a knockdown espressione genica è illustrato. Questa tecnica ha il potenziale per lo screening dei geni necessari per lo sviluppo di tessuti e organi in<em&gt; Drosophila</em&gt;.

L&#39;interferenza di RNAi per iniezione in dsRNA Drosophila Embrioni

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Iniezione di dsRNA in femmine di A. aegypti Zanzare

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

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