Name: rnai interference by dsrna injection into drosophila embryos
Uploaded: 2011-04-11T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos at JoVE.com

Os autores gostariam de agradecer a Stephen Crews para dysfusion anticorpos, cDNA Dys e w voa 1118.

1. De colheita de embriões <ol><li> Configurar gaiolas a 25 ° C usando 2-4 dias de idade w placas de suco de 1118 flies.Grape são trocados a cada hora durante o dia para sincronizar a coleta de ovos ao longo de 1-2 período de dias antes da coleta </li><li> Coletar embriões para 1h a 25 ° C </li><li> Corte um pedaço retangular de ágar suco de uva, corte levemente no meio com uma lâmina de barbear, deixe uma linha no agar </li><li> Use uma sonda de metal para transferência de embriões a partir de c...

<ol>
	<li>St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+pattern+and+polarity+in+the+Drosophila+embryo.">The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo.</a> Cell. 68, 201-219 (1992).</li><li>Venken, K. J., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+technologies+for+gene+manipulation+in+Drosophila+melanogaster.">Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster.</a> Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).</li><li>Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+dsRNA-mediated+genetic+interference+to+demonstrate+that+frizzled+and+frizzled+2+act+in+the+wingless+pathway.">Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway.</a> Cell. 95, 1017-1026 (1998).</li><li>Misquitta, L., Paterson, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+gene+function+in+Drosophila+by+RNA+interference+(RNA-i):+a+role+for+nautilus+in+embryonic+somatic+muscle+formation.">Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).</li><li>Horowitz, A., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branching+morphogenesis.">Branching morphogenesis.</a> Circ. Res. 103, 784-795 (2008).</li><li>Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis:+molecular+mechanisms+of+tubulogenesis.">Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis.</a> Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).</li><li>Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branching+morphogenesis+of+the+Drosophila+tracheal+system.">Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).</li><li>Jiang, L., Crews, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfusion+transcriptional+control+of+Drosophila+tracheal+migration,+adhesion,+and+fusion.">Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion.</a> Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).</li><li>Jiang, L., Crews, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+dysfusion+basic+helix-loop-helix+(bHLH)-PAS+gene+controls+tracheal+fusion+and+levels+of+the+trachealess+bHLH-PAS+protein.">The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein.</a> Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).</li></ol>

O dsRNA presentes método de injeção aqui permite uma análise muito sensível e rápido da função do gene em Drosophila desenvolvimento traqueal. Este método pode potencialmente ser aplicada para analisar a função do gene para outros tecidos e desenvolvimento do órgão.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Halocarbon oil 700</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>H8898</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Picospritzer III picopump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Parker Precision Fluidics</td>
<td>051-0500-900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro-pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>21170M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microloaders</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>930001007</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

rnai interference by dsrna injection into drosophila embryos

Screening genético é um dos métodos mais poderosos disponíveis para a obtenção de insights sobre processo biológico complexo 1. Ao longo dos anos muitas melhorias e ferramentas para a manipulação genética tornaram-se disponíveis em Drosophila 2. Logo após a descoberta inicial por Frie e Mello 3, que RNA de filamento duplo pode ser usado para knockdown a atividade de genes individuais em Caenorhabditis elegans, interferência de RNA (RNAi) foi mostrado para fornecer uma abordagem inversa genética poderosa para analisar funções de genes na Drosophila desenvolvimento dos órgãos 4, 5. Muitos órgãos, incluindo pulmões, rins, fígado e sistema vascular, são compostas de redes tubulares ramificados que os fluidos vitais de transporte ou gases 6, 7. A análise da formação de Drosophila traqueal fornece um sistema de excelente modelo para estudar a morfogênese de outros órgãos tubulares 8. O Berkeley Drosophila projeto genoma revelou centenas de genes que são expressos no sistema traqueal. Para estudar o mecanismo molecular e celular de formação do tubo, o desafio é compreender o papel destes genes no desenvolvimento traqueal. Aqui, descrevemos um método detalhado de dsRNA injeção em Drosophila embrião para knockdown expressão de genes individuais. Com sucesso derrubado endógena dysfusion expressão gênica (dis) por injeção dsRNA. Disfunção é uma proteína bHLH-PAS expressa em células de fusão de traquéia, e é necessária para a fusão ramo traqueal 9, 10. dis-RNAi completamente eliminada expressão disfunção e resultou em defeito de fusão traqueal. Este método relativamente simples fornece uma ferramenta para identificar genes requried para tissure e desenvolvimento de órgãos em Drosophila.

Watch this Scientific Journal Video about RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos at JoVE.com

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

Interferência de RNA tem se mostrado muito eficaz para analisar a função do gene em<em&gt; Drosophila</em&gt; Desenvolvimento traqueal. Um protocolo detalhado usada por Jiang laboratório para injetar dsRNA em embriões de voar para a expressão do gene knockdown é ilustrado. Esta técnica tem o potencial de genes de triagem necessária para o desenvolvimento de tecidos e órgãos em<em&gt; Drosophila</em&gt;.

RNAi Interferência por injeção dsRNA em Drosophila Os embriões

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Injeção de dsRNA em Mosquitos Feminino A. aegypti

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Biologia

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Preparação de culturas de neurônios a partir de embriões Midgastrula Stage Drosophila

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos E15

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Dissecação ao vivo de Drosophila Embriões: Métodos ágeis para Screening Coleções Mutant pela coloração de anticorpos

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In vivo Centrifugação de Embriões Drosophila

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

Entrega bacteriana de RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Injeção intraperitoneal em Zebrafish Adulto

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Imagem vertical de Drosophila Os embriões

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Culturas de células primárias de Drosophila Os embriões Gástrula

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...