Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

1. Lyseren en verspreiden van een kern van een biopsie blastomeer <ol><li> Cellysis buffer voor de verspreiding van cellen (0,2% Tween20 in 0,01 M HCl, pH 2,0) moeten worden voorbereid 24 uur van tevoren en opgeslagen bij -20 ° C. Bereiding van 100 ml en filter 20 ml in een 30 ml steriele universele container met behulp van een steriele 20 ml spuit en spuit filter. Verdeel 1 ml monsters in 10 tot 15 1,7 ml steriele microcentrifuge buizen, sluiten en het etiket de buizen voor het invriezen. Het wordt aanbevolen om twee verschillende partijen is het gebruik, de nieuwe partij en de vorige partij, die is getest en kan worden gebruikt als de nieuwe partij is onbevredigend zijn. </li><li> Ontdooi de lysis buffer op kamertemperatuur 30 minuten voor de biopsie procedure. Voor praktische doeleinden de werktemperatuur zal worden tussen kamertemperatuur en de hand temperatuur. </li><li> Scoren een kleine cirkel (ca. 5 mm diameter) aan de onderzijde van een amine-gecoate slide (bijv. Genetix) met behulp van een diamant pen en pre-label van de dia met het zaaknummer, unieke dianummer, en biopsie datum. Gebruik een aparte glijbaan voor elke blastomeer in numerieke volgorde, en label met de embryo-nummer. Dia&#39;s moeten worden geëtiketteerd met een hard potlood, zoals 4H, en &quot;uitgedelgd&quot; met een latex handschoen aan een grafiet stof te verwijderen. </li><li> Plaats een klein volume van lysis buffer binnen de cirkel. </li><li> Breng de biopsie blastomeer in de lysis buffer. Indien nodig lysis buffer toe te voegen in de cirkel totdat de cel begint te lyseren om, moet in de cel volledig lyseren en het cytoplasma verspreiden voordat de buffer droogt. </li><li> Let op de kern te zorgen dat het blijft binnen de cirkel en is niet verloren, als de cel niet beschikt over een kern of meerdere kernen, biopsie een andere cel. </li><li> Laat de schuif aan de lucht drogen bij kamertemperatuur. </li></ol> 2. In Situ Hybridisatie van een Single blastomeer Nucleus <ol><li> Bereid een ethanol-serie (70, 90 en 100%) uit in steriel gedistilleerd water. </li><li> Schakel en zet de hete blok (bv. Hybaid Omnislide of Vysis Hybrite) tot 75 ° C. </li><li> Ontdooi probes, vortex, en centrifuge. De reagentia moeten worden gezien en gecontroleerd om juist te zijn voordat de sonde mengsel. Pipette volumes zoals gespecificeerd door de fabrikant om de sonde mengsel in een 0,65 ml steriel microcentrifugebuis en vortex en centrifugeer voor gebruik. Het totale volume van de sonde mengsel moet voldoende zijn om 2 pl per kern worden getest en afgerond op de dichtstbijzijnde 10 pi tot een veiligheidsmarge mogelijk te maken. </li><li> Voorwas de dia&#39;s in Coplin potten met behulp van fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,0: 0,14 M NaCl, 3 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4) gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Twee keer Spoel de dia&#39;s in steriel gedistilleerd water. </li><li> Uitdrogen van de dia&#39;s met de ethanol-serie (70, 90, en 100%) voor 2 min elk op kamertemperatuur en lucht drogen. Zorg ervoor dat dia&#39;s worden volledig ondergedompeld en eventuele grafiet stof drijft naar de oppervlakte, opzuigen met een schone tissue. </li><li> Noteer de positie van de kern binnen de cirkel door te visualiseren met een fase contrast microscoop. </li><li> Uitdrogen met 100% ethanol gedurende 2 minuten op kamertemperatuur en lucht drogen. </li><li> Breng 2 pi van de probe mengsel en dek af met een 9 x 9 mm dekglaasje (een kwart van een 18 x 18 mm dekglaasje no.1). </li><li> Sluit de randen van het dekglaasje met rubber cement (bijv. Cow Gum, Koe Proofing). </li><li> Codenature de dia&#39;s op een hete blok bij 75 ° C gedurende 5 min, en vervolgens hybridiseren de dia&#39;s &#39;s nachts (16-20 uur) in een vochtige kamer bij 37 ° C. Sonde mixen die volledig bestaan ​​uit centromeer sondes (dwz voor sex-linked gevallen) geven een bevredigend resultaat na 60 minuten van hybridisatie. </li><li> Bereid een waterbad met voldoende Coplin potten en warmte tot 71 ° C. </li><li> Bereid een 0.4x standaard zoutoplossing citraat (SSC) stringente wassen oplossing (pH 7,0 bij 71 ° C, 0,06 M NaCl, 6 mM C 6 H 5 O 7 Na 3 .2 H 2 O) en warmte in het waterbad. </li><li> Doseer 50 ml stringente wassen per Coplin pot nodig is en controleer of de temperatuur is 71 ° C onmiddellijk voorafgaand aan het gebruik met een schone thermometer. </li><li> Verwijder voorzichtig het rubber cement van elke dia-en afspoelen van de dekglaasje met 4x SSC/0.05% Tween20 (pH 7,0) bij kamertemperatuur. </li><li> Was de dia&#39;s in de 0.4x SSC stringente wassen op 71 ° C gedurende 5 minuten. Was niet meer dan 6 dia&#39;s per Coplin pot. </li><li> Was de dia&#39;s in 4x SSC/0.05% Tween20 bij kamertemperatuur gedurende 2 minuten. </li><li> Als de probe mix bevat indirect gelabelde probe (s), afvoer van de dia&#39;s van overtollige vloeistof en toe te passen 20 pi van fluorescent geconjugeerd antilichaam onder een 20 x 20 mm vierkant van Parafilm. </li><li> Incubeer in een vochtige kamer bij 37 ° C gedurende 15 minuten. </li><li> Verwijder de Parafilm en was een keer in 4x SSC/0.05% Tween20 bij kamertemperatuur gedurende 2 minuten. </li><li> Was twee keer gedurende 2 minuten in PBS eent kamertemperatuur en afvoer van de dia&#39;s. </li><li> Van toepassing zijn 6 pl van DAPI / Vectashield (160 ng van 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride in 1 ml Vectashield montage medium, Vector Laboratories) om een ​​22 x 22 mm geen. 0 dekglaasje en keer de glijbaan op het dekglaasje. </li><li> Blot en afdichting van de randen van het dekglaasje met duidelijke nagellak. </li></ol> 3. Analyse met behulp van een fluorescentiemicroscoop Geschikt uitgerust met geschikte filters voor de gebruikte Probes. <ol><li> Score signalen door directe visualisatie met behulp van een fluorescentie microscoop en een band-pass filters voor elke fluorochroom in de test. Elke kern moet worden gescoord door twee analisten. Een algemene richtlijn moet leiden tot scoren van een enkel signaal waar twee dicht bij elkaar gelegen signalen zijn minder dan een domein (signaal-breedte) uit elkaar, maar, oordeel gebaseerd op de ervaring moet worden uitgeoefend om signalen van variërende grootte, intensiteit, en scheiding interpreteren. </li><li> Gebruik imaging software (bijv. Isis, MetaSystems, Altlussheim, Duitsland; CytoVision, Genetix) om een ​​beeld van de kern voor de bevestiging van de visuele diagnose vast te leggen, en voor het imago van archivering als onderdeel van een laboratorium kwaliteitsborging plan. </li></ol> 4. Representatieve resultaten: Metafase en interfase kernen van gekweekte lymfocyten van perifeer bloed moet worden onderzocht om te bevestigen dat de geselecteerde probes specifiek zijn voor de translocatie chromosomen, informatief voor de breekpunten (de subtelomere sondes alleen hybridiseren met de translocatie segmenten en het centromeer probe (s) om de centraal segment (s)) en de signalen in interfase kernen moeten helder en discreet. Scoren is het aantal signalen voor elke probe in 100 interfase kernen van elke partner wordt aanbevolen om de efficiëntie van de test te beoordelen. In dit geval 2 signalen werden gescoord in 95% -99% van de kernen voor elke probe. Figuur 1 toont een metafase en interfase kern van een voorbereiding voor een wederzijdse translocatie tussen de korte armen van chromosomen 5 en 9. Signalen in de interfase kernen van embryo blastomeren moeten helder en discreet en scoorde met behulp van aparte band pass filters voor de gebruikte kleuren. Figuur 2 toont een blastomeer kern met een normaal signaal patroon (2 exemplaren voor alle geteste loci) in overeenstemming is met een normale of gebalanceerde chromosoom aanvulling op chromosoom 5 en 9, en een kern met een afwijkend signaal patroon in overeenstemming met een onevenwichtige product van de translocatie dat is monosomie (een exemplaar) voor de translocatie segment van chromosoom 5 en trisomie (3 exemplaren) voor de translocatie segment van chromosoom 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1 Een metafase te spreiden en een interfase kern bereid uit gekweekte perifere bloed lymfocyten uit een drager van een reciproke translocatie tussen de korte armen van chromosomen 5 en 9 met breakpoints op 5p14.3 en 9p24.1:. 46, XY, t (5 ; 9) (p14.3;. p24.1) ish t (5, 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). FISH probes werden geselecteerd voor zowel de translocatie segmenten (5p14.3 → 5pter, rode Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, groene Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) en het centraal deel van chromosoom 9 (9p24.1 → 9qter, blauwe Abbott CEP 9 alpha satelliet SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Figuur 2" /> Figuur 2. Signalen in interfase blastomeer kernen van dag 3 embryo&#39;s vastgelegd met een andere filter voor elke fluorochroom en samengevoegd tot een samengesteld beeld te vormen. (A) Twee signalen voor elke probe geeft twee kopieën van elk locus, die in overeenstemming is met een normale of uitgebalanceerde aanvulling op de translocatie chromosomen. (B) Een rood sein, drie groene signalen en twee blauwe signalen van een exemplaar van de translocatie segment van chromosoom 5, drie exemplaren van de translocatie segment van chromosoom 9 en twee exemplaren van de centrische segment van chromosoom 9, die consistent is met de aangrenzende -1 segregatie van de translocatie wat resulteert in een onevenwichtige product met monosomie voor 5p14.3 → 5pter en trisomie voor 9p24.1 → 9pter.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

De toepassing van fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) tot een enkele embryo cel (blastomeer) presenteert speciale uitdagingen, zowel in praktische en in de vertolking van het signaal patroon. De gebiopteerd cel dienen te worden gemaakt binnen een vooraf bepaald gebied op de dia om zijn lokalisatie volgende vissen te vergemakkelijken; uiterste zorg moet worden genomen om ervoor te zorgen dat de cel is gelyseerd, dat het cytoplasma is verspreid, en dat de kern is zichtbaar en intact, en, als de diagnose is afhankelijk van de resultaten van deze enkele cel, strenge scoring en interpretatie richtlijnen moeten worden toegepast. Echter, in ervaren handen, FISH is een robuuste techniek voor pre-implantatie genetische diagnose (PGD) in de klinische praktijk. Het principe van PGD door FISH is die zich richten op specifieke DNA-probes gelabeld met verschillende fluorochromen of haptenen kan worden gebruikt om het aantal kopieën van specifieke loci detecteren, en daarmee op te sporen chromosoom onbalans in verband met de meiose scheiding van chromosoom herschikkingen (1), inclusief Robertsoniaanse translocaties, wederzijdse translocaties, inversies, en complexe herschikkingen (2). FISH kan ook worden gebruikt om de vrouwelijke embryo&#39;s in gezinnen te selecteren met de X-gebonden aandoening, waarvoor er geen mutatie-specifieke test (3, 4). Meer controversieel is FISH ook gebruikt om te screenen op sporadische chromosoom aneuploidie om te proberen en het verbeteren van de efficiëntie van geassisteerde reproductie (5, 6), maar de voorspellende waarde van deze test gebruik van FSIH waarschijnlijk onaanvaardbaar laag in de meeste mensen handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik (7). Dit artikel concentreert zich op de technische aspecten en de beperkingen van de FISH toegepast op klinische eencellige diagnose. Methoden van verspreiding en de vaststelling single blastomeren omvatten methanol / azijnzuur (5, 8), Tween / HCl (9), en een combinatie van Tween / HCl en methanol / azijnzuur (10). Variaties zijn hypotone behandeling van cellen voorafgaand aan de verspreiding en / of pepsine en paraformaldehyde behandeling na fixatie. De methode moet op passende wijze worden gevalideerd voor het laboratorium (14). De Tween / HCl methode wordt in detail beschreven in dit artikel. De Tween / HCl methode is technisch eenvoudig en zeer reproduceerbaar in verschillende laboratoria. Deze methode kan gebruikt worden om enkele kernen voor te bereiden op de FISH diagnose van geslachtsbepaling en chromosoom herschikkingen met aanvaardbare diagnostische nauwkeurigheid (7). Probe mixen kunt combineren direct gelabeld en indirect gelabelde probes, en probes van verschillende fabrikanten. Probes voor bekende polymorfe chromosoom regio&#39;s (11, 12), of die waarvan bekend is dat cross-hybridiseren met andere chromosomen (13) moet worden vermeden, maar kan worden gebruikt als aangetoond dat specifieke en geschikt te zijn voor PGD vooraf testen op zowel de reproductieve partners . Beschikbaar fluorochromen / haptenen en strategieën voor de veeleisende probes omvatten het volgende: Texas Red (TR), fluoresceïne isothiocyanaat (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, gebiotinyleerd sondes gedetecteerd met TR-avidine, FITC-avidine, of Cy-5 streptavidine (gevisualiseerd met behulp van een FarRed filter), een mix van rood en groen sondes naar een geel signaal, een tweede ronde van hybridisatie en een derde kleur gemaakt door opeenvolgende vastleggen van SpectrumOrange met behulp van een TexasRed en een SpectrumGold filter) te produceren. Een sonde set met drie probes, specifiek voor de centromeer regio&#39;s van de X-en Y-chromosomen en een autosoom, wordt aanbevolen voor geslachtsbepaling (14); de autosomaal sonde wordt gebruikt voor het ploïdie en daarmee vast te stellen onderscheid te maken tussen trisomie X (2n, 47 , XXX) en triploïdie (3n, 69, XXX), en tussen tetrasomy X (48, XXXX) en tetraploidy (4n, 92, XXXX). Een typische probe set toegepast bij deze instelling is de Abbott AneuVysion mix die alfa-satelliet X, Y, en 18, dit probe set is aangetoond een zeer laag tarief polymorfisme hebben, en dus voorbehandeling work-up van de reproductieve partners is niet vereist (14). De probe mix voor een specifieke omlegging moet: het ideale geval bevatten probes ten minste voldoende zijn om alle verwachte producten van de omlegging met chromosoom onbalans op te sporen. Indien dit niet mogelijk is, sonde mixen waar het onopgemerkt onevenwichtige producten zijn beoordeeld aan niet-levensvatbaar zijn in een herkenbare zwangerschap en hebben waarschijnlijk een zeer lage prevalentie aanvaardbaar kan zijn (14). Worden getest op gekweekte lymfocyten metafasen van beide reproductieve partners. Minstens tien metafase verspreidt moet worden onderzocht voor de sonde specificiteit, polymorfismen en cross-hybridisatie, en, voor de omlegging chromosoom drager, om ervoor te zorgen dat de sondes zoals verwacht op de verschillende segmenten van de herschikking hybridiseren. Daarnaast moet ten minste 100 interfase kernen van deze voorbereidingen worden gescoord om aan te geven specificiteit, de helderheid en discretie (14) te beoordelen. Commercial PGS probe sets zijn beschikbaar (bijv. Abbott MultiVysion PB of PGT), gericht op de chromosomen meest voorkomende te zijn aneuploïde in producten van de bevruchting, bestaande uit een sonde per chromosoom gericht. Typisch de kern kan een tweede hybridisatie met probes voor extra chromosomen die een test voor chromosomen 13, 15, 16, 18, 21, 22 en XY (14). De voorspellende waarde van deze test met de verspreiding en FISH techniek hier beschreven is het waarschijnlijk onaanvaardbaar laag zijn in de meeste mensen de handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik (7, 15). Technieken zoals vergelijkende genomische hybridisatie (CGH) toegepast op enkele cellen zijn in staat om te testen voor het aantal kopieën van elk chromosoom (Wilton et al.. 2001), en het gebruik van single nucleotide polymorfismen (SNP) arrays en kwantitatieve analyse (Wells et al. . 2008) of &quot;karyomapping&quot; genotypering (Handyside et al.. 2009) zijn veelbelovende alternatieve technieken op chromosoom aneuploidie te detecteren. Echter, de resolutie te beperken en nauwkeurigheid voor het segment onbalans blijft onzeker en het is waarschijnlijk dat FISH zal blijven om de techniek van de keuze voor chromosoom herschikkingen met kleine segmenten.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Pre-implantatie genetische diagnostiek (PGD) is een gevestigde alternatief voor prenatale diagnose, en het gaat om het selecteren van pre-implantatie embryo&#39;s van een cohort gegenereerd door geassisteerde reproductie technologie (ART). Deze selectie kan nodig zijn omdat de familiale monogene ziekte (bijvoorbeeld cystic fibrosis), of omdat een partner draagt ​​een chromosoom herschikking (bijvoorbeeld een twee-weg wederzijdse translocatie). PGD ​​is beschikbaar voor koppels die hebben gehad vorige getroffen kinderen, en / of in het geval van chromosoom herschikkingen, terugkerende miskramen of onvruchtbaarheid. Eicellen geaspireerd na ovariële stimulatie worden bevrucht door in vitro onderdompeling in sperma (IVF) of intracytoplasmatische injectie van door een individuele zaadcel (ICSI). Pre-implantatie decollete-stadium embryo&#39;s worden gebiopteerd, meestal door het verwijderen van een enkele cel op dag 3 na de bevruchting, en de biopsie cel is getest op de genetische status van het embryo vast te stellen. Fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) op het vaste kernen van biopsie cellen met target-specifieke DNA-probes is de techniek bij uitstek om chromosoom onbalans geassocieerd met chromosoom herschikkingen te sporen, en aan vrouwelijke embryo&#39;s in gezinnen te selecteren met de X-gebonden aandoening waarvoor geen mutatie-specifieke test. FISH is ook gebruikt om te screenen van embryo&#39;s voor spontane chromosoom aneuploïdie (ook bekend als PGS of PGD-AS) om te proberen en het verbeteren van de efficiëntie van de geassisteerde voortplanting, maar de voorspellende waarde van deze test met de verspreiding en FISH techniek hier beschreven waarschijnlijk onaanvaardbaar laag zijn in de meeste mensen de handen en het wordt niet aanbevolen voor routine klinisch gebruik. We beschrijven de selectie van geschikte probes voor single-cell FISH, het verspreiden van technieken voor blastomeer kernen, en in situ hybridisatie en signaal scoren, toegepast op PGD in een klinische setting.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Dit artikel beschrijft de selectie van geschikte probes voor single-cell FISH, het verspreiden van technieken voor blastomeer kernen, en in situ hybridisatie en signaal scoren, toegepast op de pre-implantatie genetische diagnose (PGD) in een klinische setting.

FISH voor Pre-implantatie genetische diagnostiek

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Gene Transfer voor ischemisch hartfalen in een preklinisch model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Transabdominale echografie voor zwangerschapsdiagnose bij Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

diagnose van<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Dichtheid - Belangrijke factoren voor het klinisch onderzoek

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Inductie van versnelde atherosclerose bij muizen: het "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, een Computer-Based Platform voor medeplichtigheid van clinici in cardiovasculaire analyse en diagnose

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Internationale expert consensus en aanbevelingen voor neonatale Pneumothorax Echografie Diagnose en echografie-geleide Thoracentese Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

Diagnose en chirurgische behandeling van menselijke Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Testen van acetylcholine gevolgd door adenosine voor invasieve diagnose van coronaire vasomotorische stoornissen

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Meting van myocardiale lactaatproductie voor diagnose van coronaire microvasculaire spasmen

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Basofiele activeringstest voor allergiediagnose

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...