Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

1. Lysing ואת הפצת גרעין מ Blastomere ביופסיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמוגה Cell חיץ של תאים מתפשט (0.2% Tween20 ב 0.01 M HCl, pH 2.0) יש להכין 24 שעות מראש ומאוחסנים ב -20 ° C. הכן 100 מ&quot;ל ו 20 מ&quot;ל לסנן לתוך מיכל 30 מ&quot;ל אוניברסלי סטרילי באמצעות מזרק סטרילי 20 מ&quot;ל ולסנן מזרק. לוותר על 1 aliquots מ&quot;ל לתוך צינורות 10-15 1.7 מ&quot;ל microcentrifuge סטרילית, סגור את התווית צינורות לפני ההקפאה. מומלץ יש שתי קבוצות שונות לשימוש, האצווה חדשים האצווה הקודם, אשר נבדק יכול לשמש אם קבוצה חדשה אינה משביעת רצון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו את מאגר תמוגה בטמפרטורת החדר 30 דקות לפני ההליך ביופסיה. למטרות מעשיות את טמפרטורת העבודה יהיה בין בטמפרטורת החדר הטמפרטורה יד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון עיגול קטן (בקוטר של כ 5 מ&quot;מ) בחלק התחתון של שקופית אמין מצופה (למשל Genetix) באמצעות עט היהלומים מראש תווית את השקופית עם מספר התיק, מספר שקופיות ייחודית, ותאריך ביופסיה. השתמש שקופית נפרדת עבור כל blastomere לפי סדר מספרי, ועל תווית עם מספר העובר. שקופיות צריך להיות מסומן בעיפרון קשה כגון 4H, וגם &quot;מחק&quot; עם כפפת לטקס כדי להסיר כל אבק גרפיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום נפח קטן של חיץ תמוגה בתוך המעגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את blastomere ביופסיה לתוך המאגר תמוגה. אם יש צורך להוסיף למאגר תמוגה במעגל עד התא מתחיל lyse, התא צריך lyse לחלוטין הציטופלסמה לפזר לפני מתייבש חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הגרעין כדי לוודא שהוא נשאר בתוך המעגל הוא לא איבד, אם התא אין גרעין או יש גרעינים רבים, ביופסיה תא אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את השקופית אוויר יבש בטמפרטורת החדר. </li></ol> 2. בשנת הכלאה באתרו של גרעין יחיד Blastomere <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן סדרת אתנול (70, 90 ו - 100%) מורכב במים מזוקקים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל והגדר את גוש חם (למשל Hybaid Omnislide או Vysis Hybrite) ל 75 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו בדיקות, מערבולת, ו צנטריפוגות. ריאגנטים צריך להיות עדים ומאומת יהיה נכון לפני ממציאה את התערובת בדיקה. פיפטה כרכים כפי שצוינו על ידי היצרן כדי לפצות את התערובת בדיקה צינור 0.65 מ&quot;ל סטרילי microcentrifuge ו מערבולת צנטריפוגות לפני השימוש. הנפח הכולל של התערובת בדיקה צריך להיות מספיק כדי לאפשר 2 μL לכל גרעין להיבדק מעוגלות עד μL 10 הקרוב כדי לאפשר מרווח בטיחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום לשטוף את השקופיות בצנצנות coplin באמצעות פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) (pH 7.0: 0.14 M NaCl, KCl 3 מ&quot;מ, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 מ&quot;מ KH 2 PO 4) במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות פעמיים מים מזוקקים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים את השקופיות עם הסדרה אתנול (70, 90, ו - 100%) עבור כל 2 דקות בטמפרטורת החדר אוויר יבש. ודא שקופיות שקועים לחלוטין אם בכלל אבק גרפיט צף אל פני השטח, לספוג עם טישו נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקלט את המיקום של גרעין בתוך מעגל על ​​ידי הדמיה באמצעות מיקרוסקופ לעומת שלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים עם אתנול 100% עבור 2 דקות בטמפרטורת החדר אוויר יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 2 μL של תערובת בדיקה, ולכסות עם 9 x 9 מ&quot;מ coverslip (1 / 4 של 18 x 18 מ&quot;מ coverslip מס &#39;1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותם את הקצוות של coverslip עם גומי מלט (למשל מסטיק פרה, פרה הגהה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Codenature את השקופיות על גוש חם 75 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, ולאחר מכן להכליא את השקופיות לילה (16-20 שעות) בתא humidified על 37 ° C. תערובות בדיקה מורכב כולו בדיקות centromere (כלומר לסקס צמודות מקרים) ייתן תוצאה משביעת רצון לאחר 60 דקות של הכלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אמבט מים עם צנצנות coplin מספיק חום כדי 71 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן ציטראט 0.4x מלוחים סטנדרטי (SSC) פתרון לשטוף מחמירים (pH 7.0 בשעה 71 ° C, 0.06 M NaCl, 6 מ&quot;מ C 6 H 5 O 7 Na 3 0.2 H 2 O) חום המים באמבטיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר על 50 מ&quot;ל של לשטוף מחמירים לכל coplin צנצנת נדרש לבדוק כי הטמפרטורה היא 71 מעלות צלזיוס מיד לפני השימוש באמצעות מדחום נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בזהירות את המלט גומי משקופית כל לשטוף את coverslip באמצעות% 4x SSC/0.05 Tween20 (pH 7.0) בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות בכביסה 0.4x SSC מחמירים על 71 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. שטפי לא יותר מ 6 שקופיות צנצנת coplin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות Tween20 SSC/0.05% 4x בטמפרטורת החדר למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התערובת בדיקה כוללת בדיקה שכותרתו בעקיפין (ים), לנקז את השקופיות של נוזל עודף וליישם 20 μL של נוגדן מצומדות fluorescently תחת מרובע 20 מ&quot;מ x 20 של Parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בתא humidified על 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את Parafilm ולשטוף פעם Tween20 SSC/0.05% 4x בטמפרטורת החדר למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף פעמיים עבור 2 דקות ב PBSלא בטמפרטורת החדר ומסננים את השקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 6 μL של DAPI / Vectashield (160 ננוגרם של 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride ב 1 מ&quot;ל של מדיום Vectashield הרכבה, וקטור Laboratories) ל 22 מ&quot;מ x 22 לא. 0 coverslip ו להפוך את השקופית על coverslip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם וסוגרים את הקצוות של coverslip עם מסמר לכה ברורה. </li></ol> 3. ניתוח באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי מאובזר כראוי עם מסננים מתאימים עבור בדיקות משומשים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון אותות ידי להדמיה ישירה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, רווק הלהקה עוברים מסננים לכל fluorochrome ב assay. כל גרעין צריך להיות הבקיע שני האנליסטים. קו מנחה כללי צריך להוביל מניה של אות אחת שבה שני אותות צפופים הם פחות מאחוז אחד מושלם (האות רוחב) בנפרד, עם זאת, פסק הדין מבוסס על ניסיון צריך להיות למימוש לפרש את האותות משתנה, בעוצמה גודל ההפרדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנות הדמיה (למשל איזיס, MetaSystems, Altlussheim, גרמניה; CytoVision, Genetix) כדי ללכוד תמונה של גרעין לאישור האבחנה החזותית ועל התמונה בארכיון במסגרת תוכנית אבטחת האיכות במעבדה. </li></ol> 4. נציג תוצאות: Metaphase גרעינים שלבי הביניים של לימפוציטים בתרבית דם היקפיים צריכים להיבדק כדי לוודא שנבחרו בדיקות ספציפיות הכרומוזומים טרנסלוקציה, אינפורמטיבי עבור breakpoints (בדיקות subtelomere צריך להכליא רק את קטעי translocated ואת החללית centromere (ים) ממוקדת פלח (s)) ואת אותות גרעינים שלבי הביניים צריך להיות בהיר בדידים. ניקוד מספר אותות עבור כל בדיקה גרעינים 100 שלבי הביניים של כל אחד מבני הזוג, מומלץ להעריך את היעילות של assay. במקרה זה 2 אותות דורגו ב -95% -99% של גרעיני עבור כל בדיקה. איור 1 מציג metaphase ו גרעין שלבי הביניים מתוך כהכנה טרנסלוקציה הדדית בין זרועות קצרות של כרומוזומים 5 ו - 9. אותות גרעינים שלבי הביניים מתוך בלסטומרים העובר צריך להיות בהיר בדידה הבקיע באמצעות נפרדים לעבור הלהקה מסננים את הצבעים. איור 2 מראה גרעין blastomere עם דפוס אות רגיל (2 עותקים לכל לוקוסים נבדק) עולה בקנה אחד עם כרומוזום משלים רגיל או מאוזן על כרומוזום 5 ו -9, ו - גרעין עם דפוס אות חריג בקנה אחד עם מוצר מאוזן של טרנסלוקציה כי יש monosomy (עותק אחד) עבור מגזר translocated של כרומוזום 5 ו טריזומיה (3 עותקים) עבור מגזר translocated של כרומוזום 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1 התפשטות metaphase ו גרעין שלבי הביניים שהוכן בתרבית לימפוציטים דם היקפיים מן הספק של טרנסלוקציה הדדית בין זרועות קצרות של כרומוזומים 9 ו - 5 עם נקודות עצירה ב 5p14.3 ו 9p24.1:. 46, XY, t (5 : 9) (p14.3;. p24.1) איש לא (5, 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). בדיקות FISH נבחרו בשני מגזרים translocated (5p14.3 → 5pter, אדום Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, ירוק Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) והמגזר ממוקדת של כרומוזום 9 (9p24.1 → 9qter, כחול אבוט CEP 9 אלפא לווין SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. אותות גרעינים blastomere שלבי הביניים מיום-3 עוברי שנתפסו באמצעות מסנן שונה עבור כל fluorochrome ו התמזגו ויצרו תמונה מורכבת. (א) שני אותות בדיקה עבור כל המצביעים שני עותקים של מוקד אחד, אשר עולה בקנה אחד עם משלים רגיל או מאוזן של כרומוזומים טרנסלוקציה. (ב) אות אחת אדום, שלושה אותות ירוק שני אותות כחול המעיד על עותק אחד של המגזר translocated של כרומוזום 5, שלושה עותקים של המגזר translocated של כרומוזום 9 ושני עותקים של המגזר ממוקדת של כרומוזום 9, אשר עולה בקנה אחד עם סמוכים -1 הפרדה של טרנסלוקציה וכתוצאה מכך מוצר מאוזן עם monosomy עבור 5p14.3 → 5pter ו טריזומיה עבור 9p24.1 → 9pter.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

היישום של הקרינה הכלאה באתרו (FISH) לתא עובר יחיד (blastomere) מציב אתגרים מיוחדים הן המעשיים והן הפרשנות של תבנית האות. התא ביופסיה צריך להתפשט בתוך השטח שהוגדרו מראש על השקופית כדי להקל FISH לוקליזציה הבאה שלה; זהירות קיצוניים צריך לנקוט כדי להבטיח התא lysed, כי הציטופלסמה כבר התפזרו, וכי גרעין גלוי שלם;, וכפי האבחון תלוי בתוצאות מתא בודד זה, הבקיע מחמירים פרשנות ההנחיות צריך להיות מיושם. עם זאת, בידיים מנוסות, דגים היא טכניקה חזקה לאבחון גנטי טרום השרשה (PGD) בפרקטיקה הקלינית. העיקרון של PGD על ידי FISH היא יעד ספציפי DNA בדיקות שכותרתו עם fluorochromes או haptens שונים שניתן להשתמש בהם כדי לזהות את המספר עותק של לוקוסים ספציפי, ובכך לזהות חוסר איזון כרומוזום קשור הפרדה meiotic של rearrangements כרומוזום (1), כולל Robertsonian טרנסלוקציות, טרנסלוקציות הדדיות, תנוחות הפוכות, ו rearrangements מורכב (2). דגים יכולים לשמש גם כדי לבחור בעוברים נקבה במשפחות עם מחלה X-linked, אשר לא קיימת בדיקה מוטציה ספציפית (3, 4). עוד שנוי במחלוקת, דגים שימש גם למסך עבור aneuploidy כרומוזום סדיר על מנת לנסות לשפר את היעילות של הרבייה סייעה (5, 6), עם זאת, ערך מנבא של מבחן זה באמצעות FSIH צפוי להיות נמוך בלתי מתקבל על הדעת אצל רוב האנשים של ידיים זה לא מומלץ לשימוש קליני שגרתי (7). מאמר זה מתמקד בהיבטים הטכניים ואת המגבלות של FISH להחיל אבחנה תא בודד קליניים. שיטות להפצת ותיקון בלסטומרים יחיד כוללים מתנול / חומצה אצטית (5, 8), Tween / HCl (9), וכן שילוב של Tween / HCl, מתנול / חומצה אצטית (10). וריאציות כוללות טיפול hypotonic של תאים לפני הפצת ו / או עכלן וטיפול paraformaldehyde לאחר קיבוע. השיטה צריכה להיות מאומת כראוי עבור במעבדה (14). השיטה Tween / HCl מתואר בפירוט במאמר זה. השיטה Tween / HCl היא פשוטה מבחינה טכנית לשעתקו מאוד במעבדות שונות. בשיטה זו ניתן להשתמש כדי להכין גרעינים יחיד לאבחון FISH להגדרה סקס rearrangements כרומוזום עם דיוק האבחון המקובל (7). תערובות Probe ניתן לשלב שכותרתו ישירות שכותרתו בעקיפין בדיקות, ועל בדיקות של יצרנים שונים. בדיקות עבור אזורים ידוע כרומוזום צורות (11, 12), או אלה ידועים צולבות להכליא באופן משמעותי עם כרומוזומים אחרים (13) יש להימנע, אם כי ניתן להשתמש בו אם הוכח להיות ספציפיים מתאים PGD על ידי בדיקה מוקדמת על שני בני הזוג הרבייה . Fluorochromes זמין / haptens ואסטרטגיות בדיקות להפלות כוללים: טקסס אדום (TR), isothiocyanate והעמסת (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, בדיקות biotinylated מזוהה עם TR-avidin, FITC-avidin, או סי-5 streptavidin (דמיינו באמצעות מסנן FarRed), שילוב של בדיקות אדום וירוק כדי לייצר אות צהוב, סיבוב שני של הכלאה וצבע third שנוצר על ידי לכידת רציפים של SpectrumOrange באמצעות TexasRed ומסנן SpectrumGold). מערכת בדיקה המכיל שלושה בדיקות, ספציפית עבור האזורים centromere של הכרומוזומים X ו-Y ואחד autosome, מומלץ קביעת הזוויג (14), בדיקה אוטוזומלית משמש להקים ploidy ובכך להבדיל בין טריזומיה X (2n, 47 , XXX) ו triploidy (3N, 69, XXX), ובין tetrasomy X (48, XXXX) ו tetraploidy (4n, 92, XXXX). בדיקה טיפוסי להגדיר להחיל הגדרה זו תמהיל AneuVysion אבוט המכיל אלפא לווין X, Y, ו - 18 וקבוצה זו בדיקה הוכח פולימורפיזם יש שיעור נמוך מאוד, ולכן טיפול טרום לעבוד למעלה השותפים הרבייה לא נדרש (14). תמהיל בדיקה עבור סידור מסוים צריך: באופן אידיאלי לכלול בדיקות לפחות מספיק כדי לזהות את כל המוצרים הצפויה של ארגון מחדש עם חוסר האיזון כרומוזום. אם זה לא אפשרי, בדיקה מתערבב בו את המוצרים מאוזן מבלי שיבחינו כבר העריכו להיות בלתי קיימא הריון מוכרות יש סבירות נמוכה מאוד שכיחות עשוי להיות מקובל (14). להיבדק על metaphases לימפוציטים בתרבית משני השותפים הרבייה. לפחות עשרה מתפשט metaphase יש לבחון על סגוליות הבדיקה, פולימורפיזמים ו צולבות הכלאה, ועבור המוביל התארגנות כרומוזום, על מנת להבטיח כי בדיקות להכליא כצפוי על פלחים שונים של התארגנות. בנוסף, לפחות 100 גרעינים שלבי הביניים של ההכנות האלה צריך להיות הבקיע להעריך סגוליות האות, בהירות, ו discreteness (14). קוםrcial PGS ערכות בדיקה זמינים (למשל אבוט MultiVysion PB או PGT), מיקוד הכרומוזומים נמצא לרוב להיות aneuploid במוצרים ההתעברות, ו הכולל בדיקה אחת לכל כרומוזום ממוקדות. בדרך כלל הגרעין עשוי להיות הכלאה שנייה עם בדיקות נוספות עבור כרומוזומים מתן assay עבור 13 כרומוזומים, 15, 16, 18, 21, 22, ו - XY (14). ערך החיזוי של הבדיקה באמצעות הפצת הטכניקה FISH המתואר כאן צפוי להיות נמוך בלתי מתקבל על הדעת בידיים של רוב האנשים וזה לא מומלץ לשימוש קליני שגרתי (7, 15). טכניקות כגון הכלאה גנומית השוואתי (CGH) להחיל תאים בודדים מסוגלים לבדוק את מספר עותק של כל כרומוזום (ווילטון et al. 2001), ושימוש פולימורפיזמים נוקלאוטיד יחיד (SNP) מערכים ניתוח כמותי (וולס ואח&#39; . 2008) או genotyping &quot;karyomapping&quot; (Handyside et al. 2009) מבטיחות טכניקות חלופיות כדי לזהות aneuploidy כרומוזום. עם זאת, מגבלת הרזולוציה והדיוק של חוסר איזון קטע להישאר ברור וסביר להניח כי דגים תמשיך להיות הטכניקה של בחירה עבור rearrangements כרומוזום מקטעים קטנים מעורבים.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

טרום השרשה אבחון גנטי (PGD) מהווה חלופה הוקמה לאבחון טרום לידתי, והיא כרוכה בחירת ההשתלה טרום עוברים מקבוצה שנוצר על ידי טכנולוגיה רבייה סייעה (ART). בחירה זו עשויה להידרש בגלל המחלה monogenic משפחתית (סיסטיק פיברוזיס למשל), או כי אחד מבני הזוג נושא התארגנות כרומוזום (למשל טרנסלוקציה דו סטרי הדדי). PGD ​​זמין לזוגות שעברו ילדים מושפעים הקודם, ו / או במקרה של rearrangements כרומוזום, הפלות חוזרות או חוסר פוריות. גירוי השחלות ביציות aspirated הבאים מופרית על ידי טבילה ב בזרע במבחנה (IVF) או על ידי הזרקת תא זרע intracytoplasmic של הפרט (ICSI). טרום השרשה מחשוף בשלב עוברי הם ביופסיה, בדרך כלל על ידי הסרת תא בודד ביום 3 לאחר ההפריה, והתא ביופסיה נבדק כדי לקבוע את מצב גנטי של העובר. הקרינה הכלאה באתרו (FISH) על הגרעינים קבוע של תאים ביופסיה עם יעד ספציפי בדיקות ה-DNA היא הטכניקה של בחירה כדי לזהות חוסר איזון כרומוזום קשור rearrangements כרומוזום, וכדי לבחור עוברי נקבה במשפחות עם מחלה X-linked שבהם לא קיימת אין מוטציה ספציפית הבדיקה. FISH שימש גם כדי עוברים מסך aneuploidy כרומוזום ספונטנית (הידוע גם בשם PGS או PGD-AS) על מנת לנסות לשפר את היעילות של הרבייה סייעה, עם זאת, ערך מנבא של מבחן זה באמצעות הפצת הטכניקה FISH המתואר כאן צפוי להיות נמוך בלתי מתקבל על הדעת בידיו של רוב האנשים, והוא אינו מומלץ לשימוש קליני שגרתי. אנו מתארים את הבחירה של בדיקות מתאים FISH מתא בודד, טכניקות הפצת עבור גרעינים blastomere, וב הכלאה באתרו ניקוד האות, להחיל PGD בסביבה קלינית.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

מאמר זה מתאר את הבחירה של בדיקות מתאים FISH מתא בודד, טכניקות הפצת עבור גרעינים blastomere, וב הכלאה באתרו ניקוד האות, להחיל אבחון גנטי טרום השרשה (PGD) בסביבה קלינית.

FISH לאבחון גנטי טרום השרשה

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Gene Transfer לאי ספיקת לב איסכמי במודל פרה

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

אולטרסאונד Transabdominal לאבחון הריון באייל Muntjac של ריבס

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

אבחון<em&gt; Musculus הגסטרוקנמיוס</em&gt; אטים - גורמי מפתח עבור הבדיקה הקלינית

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

הידרה, פלטפורמה מבוססת מחשב לסיוע קלינאים ניתוח לב וכלי דם, אבחון

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

הסכמה בינלאומית מומחה והמלצות לאבחון ואולטרסאונד של בעלי חזה אוויר ואולטרא סאונד-נוזלי נוהל מודרך

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

אבחון וטיפול כירורגי של דלקת ברוסלאר Spondylodiscitis אנושי

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

בדיקת אצטילכולין ואחריו אדנוזין לאבחון פולשני של הפרעות וזומוטוריות כליליות

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

מדידת ייצור לקטט שריר הלב לאבחון עווית כלי דם כלילית

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

בדיקת הפעלת בזופיל לאבחון אלרגיה

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...