Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
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1. Lysing और एक biopsied Blastomere से एक न्यूक्लियस फैल <ol><li> Lysis बफर सेल प्रसार कोशिकाओं (0.01 एम एचसीएल में 0.2 Tween20%, पीएच 2.0) के लिए अग्रिम में 24 घंटे तैयार रहना चाहिए और -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत एक 30 एमएल बाँझ सार्वभौमिक एक बाँझ 20 एमएल सिरिंज और सिरिंज फिल्टर का उपयोग कर कंटेनर में 100 एमएल और फिल्टर 20 एमएल तैयार करें. 10-15 1.7 एमएल बाँझ microcentrifuge ट्यूबों में 1 एमएल aliquots बांटना बंद करें, और ठंड के पहले ट्यूबों लेबल. यह दो अलग बैचों है का उपयोग करें, नए बैच और पिछले बैच है, जो परीक्षण किया गया है और किया जा सकता है अगर नए बैच असंतोषजनक है की सिफारिश की है. </li><li> डीफ्रोस्ट बायोप्सी प्रक्रिया से पहले 30 मिनट के कमरे के तापमान पर lysis बफर. व्यावहारिक प्रयोजनों के लिए काम कर रहे तापमान कमरे के तापमान और हाथ तापमान के बीच किया जाएगा. </li><li> कुल एक amine लेपित स्लाइड एक हीरे की कलम और पूर्व लेबल मामले नंबर, अद्वितीय स्लाइड संख्या और बायोप्सी की तारीख के साथ स्लाइड का उपयोग (जैसे Genetix) के underside पर एक छोटा वृत्त (लगभग 5 मिमी व्यास). संख्यात्मक क्रम में प्रत्येक blastomere के लिए एक अलग स्लाइड, और भ्रूण की संख्या के साथ लेबल का उपयोग करें. स्लाइड्स 4H जैसे एक हार्ड पेंसिल के साथ लेबल किया जाना चाहिए, और किसी भी ग्रेफाइट धूल हटाने के लिए एक लाटेकस दस्ताने के साथ &quot;blotted&quot;. </li><li> Lysis बफर के सर्कल के भीतर एक छोटी मात्रा रखें. </li><li> Lysis बफर में biopsied blastomere स्थानांतरण. यदि सर्कल के भीतर आवश्यक lysis बफर जोड़ने जब तक सेल lyse करने के लिए शुरू होता है, सेल पूरी तरह से lyse और cytoplasm बफर dries पहले फैलाने चाहिए. </li><li> नाभिक का निरीक्षण करने के लिए सुनिश्चित करें कि यह वृत्त के भीतर रहता है और खो नहीं है, अगर एक सेल नाभिक नहीं है या क्या करता है कई नाभिक है, एक और सेल बायोप्सी. </li><li> कमरे के तापमान पर हवा शुष्क स्लाइड छोड़ो. </li></ol> 2. एकल Blastomere न्यूक्लियस के स्वस्थानी संकरण में <ol><li> एक इथेनॉल (70, 90 और 100%) श्रृंखला बाँझ आसुत जल में बनाया तैयार है. </li><li> पर मुड़ें और 75 के गर्म ब्लॉक (जैसे Hybaid Omnislide या Vysis Hybrite) सेट ° सी. </li><li> डीफ्रोस्ट जांच, भंवर, अपकेंद्रित्र और. अभिकर्मकों और देखा जांच मिश्रण करने से पहले सही सत्यापित किया जाना चाहिए. पिपेट मात्रा 0.65 एमएल बाँझ microcentrifuge ट्यूब और भंवर और उपयोग करने से पहले अपकेंद्रित्र में जांच मिश्रण बनाने के लिए निर्माता द्वारा निर्दिष्ट के रूप में. जांच मिश्रण की कुल मात्रा नाभिक प्रति 2 μL परीक्षण किया जा करने के लिए और निकटतम 10 के लिए एक सुरक्षा मार्जिन की अनुमति μL गोल की अनुमति के लिए पर्याप्त होना चाहिए. </li><li> कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए. Coplin फॉस्फेट-buffered (पीबीएस) खारा (0.14 एम NaCl, 3 मिमी KCl, 10 मिमी ना 2 4 HPO, 2 मिमी के.एच. 2 4 पीओ पीएच 7.0) का उपयोग कर जार में स्लाइड्स पूर्व धोने </li><li> बाँझ आसुत पानी में स्लाइड्स दो बार कुल्ला. </li><li> कमरे के तापमान और हवा शुष्क 2 मिनट प्रत्येक के लिए इथेनॉल श्रृंखला (70, 90, और 100%) के साथ स्लाइड्स निर्जलीकरण. सुनिश्चित करें स्लाइड्स और पूरी तरह से डूब रहे हैं अगर किसी भी ग्रेफाइट धूल सतह के लिए मंगाई है, एक साफ ऊतक के साथ सोख लेना. </li><li> सर्कल के भीतर एक चरण विपरीत माइक्रोस्कोप के साथ visualizing द्वारा नाभिक की स्थिति रिकार्ड. </li><li> कमरे के तापमान और हवा शुष्क 2 मिनट के लिए 100% इथेनॉल के साथ निर्जलीकरण. </li><li> जांच मिश्रण के 2 μL लागू करें, और एक 9 x 9 मिमी coverslip (एक 18 x 18 मिमी नंबर 1 coverslip का एक चौथाई) के साथ कवर. </li><li> रबर सीमेंट (, गाय अशुद्धि जाँच जैसे गाय गम) के साथ coverslip के किनारों को सील. </li><li> एक गर्म ब्लॉक पर 75 स्लाइड्स Codenature ° 5 मिनट के लिए सी, और तब स्लाइड्स रातोंरात संकरण (16-20 घंटे) 37 पर एक humidified कक्ष में डिग्री सेल्सियस जांच घोला जा सकता है कि centromere जांच (यानी सेक्स से जुड़े मामलों के लिए) की पूरी तरह से मिलकर बनता है संकरण के 60 मिनट बाद एक संतोषजनक परिणाम दे देंगे. </li><li> पर्याप्त coplin जार और 71 के लिए गर्मी डिग्री सेल्सियस के साथ एक पानी स्नान तैयार </li><li> एक 0.4x मानक खारा (एसएससी) साइट्रेट कड़े धोने (71 पीएच 7.0 ° सी, 0.06 एम NaCl, 6 मिमी सी 5 6 एच ना 3 7 हे 0.2 2 एच ओ) समाधान और पानी के स्नान में गर्मी तैयार . </li><li> Coplin जार के प्रति कड़े धोने की आवश्यकता के 50 एमएल बांटना और जाँच करें कि तापमान 71 ° सी तुरंत एक साफ थर्मामीटर का उपयोग कर का उपयोग करने के लिए पहले. </li><li> ध्यान से प्रत्येक स्लाइड से रबर सीमेंट हटाने और कमरे के तापमान पर 4x SSC/0.05 Tween20% (पीएच 7.0) का उपयोग कर coverslip बंद कुल्ला. </li><li> 0.4x एसएससी कड़े धोने में स्लाइड्स 71 ° 5 मिनट के लिए सी धो. कोई coplin जार 6 प्रतिशत से अधिक स्लाइड्स धो लें. </li><li> 2 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर धो 4x SSC/0.05% Tween20 में स्लाइड्स. </li><li> अगर जांच मिश्रण परोक्ष रूप से लेबल (ओं) को जांच में शामिल है, अतिरिक्त तरल के स्लाइड्स नाली और एक 20 x 20 मिमी Parafilm के वर्ग के तहत fluorescently संयुग्मित एंटीबॉडी के 20 μL लागू. </li><li> 37 पर एक humidified कक्ष में सेते ° C 15 मिनट के लिए. </li><li> Parafilm निकालें और 4x SSC/0.05% Tween20 में एक बार कमरे के तापमान पर 2 मिनट के लिए धो. </li><li> पीबीएस में 2 मिनट के लिए दो बार धोटी कमरे के तापमान और स्लाइड्स नाली. </li><li> एक 22 x 22 मिमी नहीं DAPI / Vectashield (4 के 160 एनजी &#39;Vectashield बढ़ते मध्यम, वेक्टर प्रयोगशालाओं के 1 एमएल में ,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride) के 6 μL लागू करें. 0 coverslip और coverslip अधिक स्लाइड पलटना. </li><li> ब्लाट और स्पष्ट नेल वार्निश के साथ coverslip के किनारों को सील. </li></ol> 3. खेतों में प्रयुक्त किए गए जांच के लिए उपयुक्त फिल्टर के साथ एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग विश्लेषण उपयुक्त लैस. <ol><li> प्रत्यक्ष दृश्य द्वारा कुल संकेतों प्रतिदीप्ति खुर्दबीन और परख में एकल बैंड पास प्रत्येक fluorochrome के लिए फिल्टर का उपयोग कर. प्रत्येक नाभिक दो विश्लेषकों द्वारा रन होना चाहिए. एक सामान्य दिशानिर्देश एक एकल संकेत है जहां दो निकट दूरी पर संकेतों को कम से कम एक (संकेत चौड़ाई) के अलावा डोमेन के स्कोरिंग करने के लिए नेतृत्व चाहिए, तथापि, अनुभव पर आधारित निर्णय आकार तीव्रता बदलती के संकेत, और जुदाई की व्याख्या करने के लिए प्रयोग किया जाना चाहिए. </li><li> इमेजिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करें (जैसे Isis, MetaSystems, Altlussheim, जर्मनी, CytoVision, Genetix) दृश्य निदान की पुष्टि के लिए नाभिक की एक छवि पर कब्जा, और एक प्रयोगशाला गुणवत्ता आश्वासन योजना के भाग के रूप में छवि संग्रह के लिए. </li></ol> 4. प्रतिनिधि परिणाम: मेटाफ़ेज़ और सुसंस्कृत परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों से interphase नाभिक पुष्टि करें कि चयनित जांच स्थानान्तरण गुणसूत्रों के लिए विशिष्ट है, breakpoints (subtelomere जांच केवल केंद्रित translocated क्षेत्रों और centromere जांच () के लिए संकरण चाहिए के लिए जानकारीपूर्ण हैं करने के लिए जांच की जानी चाहिए खंड (ओं)) और interphase नाभिक में संकेतों उज्ज्वल और असतत होना चाहिए. प्रत्येक साझेदार से हर जांच के लिए संकेतों की संख्या 100 interphase नाभिक में स्कोरिंग परख की दक्षता का आकलन करने की सिफारिश की है. इस मामले में 2 संकेतों के 95% हर जांच के लिए नाभिक के -99% में रन बनाए थे. चित्रा 1 मेटाफ़ेज़ और गुणसूत्रों 5 और 9 की कमी हथियार के बीच एक पारस्परिक स्थानान्तरण के लिए एक तैयारी से interphase नाभिक से पता चलता है. भ्रूण blastomeres से interphase नाभिक में सिग्नल उज्ज्वल और असतत और प्रयुक्त रंग के लिए अलग बैंड पास फिल्टर का उपयोग रन चाहिए. चित्रा 2 एक सामान्य संकेत पैटर्न (सभी परीक्षण loci के लिए दो प्रतियां) गुणसूत्र 5 और 9 के लिए एक सामान्य या संतुलित गुणसूत्र पूरक के साथ संगत है, और एक असामान्य स्थानान्तरण की एक असंतुलित उत्पाद के साथ संगत संकेत पैटर्न के साथ एक नाभिक के साथ एक blastomere नाभिक से पता चलता है कि खंड के लिए 5 गुणसूत्र और ट्राईसोमी 9 गुणसूत्र के translocated खंड के लिए (3 प्रतियां) के translocated monosomy (एक प्रतिलिपि) है. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="चित्रा 1" /> चित्रा 1 एक मेटाफ़ेज़ प्रसार और एक interphase सुसंस्कृत 5 गुणसूत्रों के छोटे हथियार और 5p14.3 और 9p24.1 पर breakpoints के साथ 9 के बीच एक पारस्परिक स्थानान्तरण के एक वाहक से परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों से तैयार नाभिक: 46, XY, टी ( 5 9) (p14.3;. p24.1) ish (5 टी, 9) (5ptel48 - 9ptel30; 9ptel30, 5ptel48 + 9cen +). मछली जांच दोनों translocated क्षेत्रों के लिए चयन किया गया था (5p14.3 → 5pter, लाल Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, हरी Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) और केंद्रित 9 गुणसूत्र के खंड (9p24.1 → 9qter, नीले Abbott सीईपी 9 अल्फा उपग्रह SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="चित्रा 2" /> Interphase blastomere नाभिक में चित्रा 2 दिन 3 भ्रूण से सिग्नल प्रत्येक fluorochrome और एक समग्र छवि के रूप में विलय के लिए एक अलग फिल्टर का उपयोग कर कब्जा कर लिया. (ए) प्रत्येक की दो प्रतियां प्रत्येक ठिकाना है, जो स्थानान्तरण गुणसूत्रों के लिए एक सामान्य या संतुलित पूरक के साथ संगत है का संकेत जांच के लिए दो संकेतों. (बी) एक लाल सिग्नल, तीन हरी संकेतों और दो नीले संकेतों 5 गुणसूत्र के translocated खंड के एक प्रतिलिपि, 9 गुणसूत्र के translocated खंड के तीन प्रतियां और 9 गुणसूत्र केंद्रित खंड की दो प्रतियां जो आसन्न के साथ संगत है का संकेत 5p14.3 → 5pter और ट्राईसोमी के लिए एक monosomy साथ एक असंतुलित 9p24.1 → 9pter के लिए उत्पाद में जिसके परिणामस्वरूप स्थानान्तरण के -1 अलगाव.

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ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

एक एकल भ्रूण सेल (blastomere) स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति के आवेदन दोनों चलन में और संकेत पैटर्न की व्याख्या में विशेष चुनौतियां प्रस्तुत करता है . biopsied सेल करने के लिए स्लाइड पर एक पूर्व - परिभाषित क्षेत्र के भीतर फैल क्रम में अपनी स्थानीयकरण निम्नलिखित मछली की सुविधा की जरूरत है, चरम देखभाल के लिए सुनिश्चित करना है कि सेल lysed है कि cytoplasm छितरी किया गया है में रखा जाना चाहिए, और है कि नाभिक दिखाई और बरकरार है, और के रूप में निदान के इस एकल कक्ष, कड़े स्कोरिंग और व्याख्या दिशानिर्देशों लागू किया जाना चाहिए से परिणामों पर निर्भर करता है. हालांकि, अनुभवी हाथों में, मछली नैदानिक ​​व्यवहार में एक आनुवंशिक पूर्व आरोपण निदान (PGD) के लिए मजबूत तकनीक है. मछली द्वारा पीजीडी के सिद्धांत है कि लक्ष्य विशिष्ट डीएनए अलग fluorochromes या haptens लेबल के साथ जांच के लिए विशिष्ट loci के प्रतिलिपि संख्या का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और जिससे गुणसूत्र गुणसूत्र rearrangements के meiotic अलगाव (1) के साथ जुड़े असंतुलन Robertsonian सहित, का पता लगाने के लिए translocations, पारस्परिक translocations, inversions, और जटिल rearrangements (2). मछली भी एक्स जुड़े रोग के साथ परिवारों में महिला भ्रूण का चयन करें, जिसके लिए वहाँ कोई परीक्षण उत्परिवर्तन विशिष्ट (3, 4) के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. ज्यादा विवादास्पद, मछली भी छिटपुट गुणसूत्र aneuploidy के लिए स्क्रीन के लिए इस्तेमाल किया गया है क्रम में करने के लिए कोशिश करते हैं और सहायता प्रजनन (5, 6) की दक्षता में सुधार, लेकिन, इस परीक्षण का उपयोग कर FSIH का भविष्य कहनेवाला मूल्य में unacceptably कम हो जाने की संभावना है सबसे अधिक लोगों के हाथ और नियमित नैदानिक ​​प्रयोग (7) के लिए अनुशंसित नहीं है. इस अनुच्छेद के तकनीकी पहलुओं और मछली नैदानिक ​​निदान एकल कक्ष के लिए लागू की सीमाओं पर ध्यान केंद्रित है. प्रसार और एकल blastomeres फिक्सिंग के तरीके / मेथनॉल एसिटिक एसिड (5, 8), बीच / एचसीएल (9), और बीच / एचसीएल और मेथनॉल / एसिटिक एसिड (10) का एक संयोजन शामिल हैं. विविधतायें कोशिकाओं के hypotonic उपचार के निर्धारण के बाद और / या पेप्सिन और paraformaldehyde उपचार के प्रसार करने के लिए पहले से शामिल हैं. विधि उचित प्रयोगशाला (14) के लिए मान्य किया जाना चाहिए. विधि / बीच एचसीएल में विस्तार से इस अनुच्छेद में वर्णित है. विधि / बीच एचसीएल तकनीकी रूप से सरल और विभिन्न प्रयोगशालाओं में अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है. इस विधि स्वीकार्य निदान सटीकता (7) के साथ सेक्स और दृढ़ संकल्प गुणसूत्र rearrangements की मछली निदान के लिए एकल नाभिक तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. जांच घोला जा सकता है सीधे लेबल और परोक्ष रूप से लेबल विभिन्न निर्माताओं से जांच, और जांच गठबंधन कर सकते हैं. ज्ञात बहुरूपी गुणसूत्र क्षेत्रों के लिए जांच (11, 12), या उन अन्य गुणसूत्रों (13) के साथ काफी पार संकरण ज्ञात, बचा जाना चाहिए, हालांकि अगर पीजीडी के लिए दोनों प्रजनन भागीदारों पर पहले परीक्षण द्वारा विशिष्ट और उपयुक्त होना दिखाया इस्तेमाल किया जा सकता है . भेदभाव जांच के लिए उपलब्ध / fluorochromes haptens और रणनीतियों को निम्नलिखित शामिल हैं: टेक्सास रेड (टी.आर.), fluorescein आइसोथियोसाइनेट (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, biotinylated टी.आर. avidin के साथ पता लगाया जांच, FITC avidin, या Cy-streptavidin 5 (एक FarRed फिल्टर का उपयोग करते हुए कल्पना), लाल और हरे रंग की जांच की एक मिश्रण करने के लिए एक पीला संकेत संकरण के एक दूसरे दौर है और एक तिहाई SpectrumOrange TexasRed और SpectrumGold फिल्टर) का उपयोग कर के अनुक्रमिक कैप्चरिंग के द्वारा बनाई गई रंग का उत्पादन. जांच तीन जांच, एक्स और वाई क्रोमोसोम और एक autosome centromere क्षेत्रों के लिए विशिष्ट युक्त सेट, लिंग निर्धारण (14) के लिए सिफारिश की है, autosomal पीछे जांच ploidy और इस तरह स्थापित करने के लिए ट्राईसोमी एक्स के बीच अंतर करने के लिए प्रयोग किया जाता है (2n, 47 ) XXX और triploidy (3N, 69, XXX), और tetrasomy (48, XXXX) एक्स और tetraploidy (4N, 92, XXXX) के बीच. इस जांच को सेट करने के लिए एक बहुत ही कम बहुरूपता दर का प्रदर्शन किया गया है, और इसलिए पूर्व उपचार प्रजनन भागीदारों के काम, एक ठेठ जांच इस सेटिंग में लागू किया जाता है Abbott AneuVysion मिश्रण युक्त अल्फा उपग्रह एक्स, वाई, और 18 सेट आवश्यकता नहीं (14). किसी भी विशिष्ट पुनर्व्यवस्था के लिए जांच मिश्रण होना चाहिए: आदर्श रूप में कम से कम गुणसूत्र असंतुलन के साथ पुनर्व्यवस्था के सभी उम्मीद उत्पादों का पता लगाने के लिए पर्याप्त जांच होते हैं. यदि यह संभव नहीं है, जांच घोला जा सकता है जहां असंसूचित असंतुलित उत्पादों के लिए एक पहचानने गर्भावस्था में अलाभकारी हो गया आकलन किया है और बहुत कम प्रसार स्वीकार्य हो (14) संभावना है. प्रजनन दोनों भागीदारों से सुसंस्कृत लिम्फोसाइट metaphases पर परीक्षण किया गया. कम से कम दस मेटाफ़ेज़ फैलता जांच विशिष्टता, बहुरूपताओं और पार संकरण के लिए जांच की जानी चाहिए, और गुणसूत्र पुनर्व्यवस्था वाहक के लिए, यह सुनिश्चित करना है कि जांच के रूप में पुनर्व्यवस्था के विभिन्न क्षेत्रों के लिए उम्मीद संकरण. इसके अलावा, इन तैयारियों से कम से कम 100 interphase नाभिक के संकेत विशिष्टता, चमक, और पृथक्ता (14) का आकलन रन होना चाहिए. Commercial PGS जांच सेट उपलब्ध हैं (जैसे Abbott MultiVysion पीबी या PGT), सबसे अधिक बार गर्भाधान के उत्पादों में aneuploid हो पाया गुणसूत्रों लक्ष्यीकरण, और लक्षित गुणसूत्र प्रति एक जांच शामिल है. आमतौर पर नाभिक अतिरिक्त क्रोमोसोम 13, 15, 16, 18, 21, 22, और XY (14) के लिए एक परख प्रदान गुणसूत्रों के लिए जांच के साथ एक दूसरे संकरण हो सकता है. इस प्रसार और मछली तकनीक यहाँ वर्णित का उपयोग कर परीक्षण का भविष्य कहनेवाला मूल्य के लिए सबसे अधिक लोगों के हाथों में unacceptably कम होने की संभावना है और यह नियमित नैदानिक ​​उपयोग (7, 15) के लिए अनुशंसित नहीं है. जैसे तुलनात्मक जीनोमिक संकरण (CGH) एकल कक्षों पर लागू तकनीकों हर गुणसूत्र की नकल संख्या के लिए परीक्षण करने में सक्षम (Wilton एट अल 2001.) हैं, और एकल nucleotide बहुरूपताओं (SNP) का उपयोग arrays और मात्रात्मक विश्लेषण (वेल्स एट अल 2008) या &quot;karyomapping&quot; जीनोटाइपिंग (Handyside एट अल 2009) वैकल्पिक तकनीकों का वादा कर रहे हैं गुणसूत्र aneuploidy का पता लगाने. हालांकि, संकल्प और खंड असंतुलन के लिए सीमा सटीकता अनिश्चित बनी रहती है और यह है कि मछली के लिए छोटे क्षेत्रों को शामिल गुणसूत्र rearrangements के लिए पसंद की तकनीक लिए जारी रहेगा संभावना है.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

पूर्व आरोपण आनुवंशिक निदान (PGD) एक की स्थापना की प्रसव पूर्व निदान के लिए वैकल्पिक है, और सहायता प्रजनन प्रौद्योगिकी (एआरटी) द्वारा उत्पन्न काउहोट से पूर्व आरोपण भ्रूण का चयन शामिल है. यह चयन पारिवारिक monogenic रोग (जैसे सिस्टिक फाइब्रोसिस) की वजह से आवश्यक हो सकता है, या क्योंकि एक साथी एक गुणसूत्र पुनर्व्यवस्था (जैसे एक पारस्परिक स्थानान्तरण दो तरह) किया जाता है. पीजीडी जोड़े जो पिछले प्रभावित बच्चों पड़ा है, और / या गुणसूत्र rearrangements, आवर्तक गर्भपात, या बांझपन के मामले में के लिए उपलब्ध है. Oocytes से aspirated निम्न डिम्बग्रंथि उत्तेजना वीर्य में इन विट्रो विसर्जन (आईवीएफ) में या एक व्यक्ति के शुक्राणु (आईसीएसआई) के intracytoplasmic इंजेक्शन द्वारा निषेचित कर रहे हैं. पूर्व आरोपण दरार मंच भ्रूण, आमतौर पर 3 दिन बाद निषेचन पर एक एकल कोशिका को हटाने के द्वारा biopsied हैं, और biopsied सेल भ्रूण के आनुवंशिक स्थिति स्थापित करने के लिए परीक्षण किया है. लक्ष्य विशिष्ट डीएनए जांच के साथ biopsied से कोशिकाओं की अचल नाभिक पर स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति पसंद की तकनीक गुणसूत्र गुणसूत्र rearrangements के साथ जुड़े असंतुलन का पता लगाने के लिए, और एक्स से जुड़े रोग है जिसके लिए वहाँ के साथ परिवारों में महिला भ्रूण का चयन कोई उत्परिवर्तन विशेष परीक्षा. मछली भी सहज गुणसूत्र aneuploidy (भी PGS या पीजीडी - रूप के रूप में जाना जाता है) के लिए स्क्रीन भ्रूण इस्तेमाल किया गया है क्रम में के लिए प्रयास करें और सहायता प्रजनन की क्षमता में सुधार, लेकिन, इस परीक्षण की पेशीनगोई मूल्य प्रसार और मछली तकनीक का उपयोग यहाँ वर्णित ज्यादातर लोगों के हाथों में unacceptably कम होने की संभावना है और यह नियमित नैदानिक ​​इस्तेमाल के लिए अनुशंसित नहीं है. हम एकल कोशिका मछली, blastomere नाभिक के लिए तकनीक के प्रसार, और स्वस्थानी संकरण में और संकेत स्कोरिंग, एक नैदानिक ​​सेटिंग में पीजीडी के लिए लागू के लिए उपयुक्त जांच के चयन का वर्णन .

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FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

यह आलेख एकल कोशिका मछली, blastomere नाभिक के लिए तकनीक के प्रसार, और स्वस्थानी संकरण में और संकेत स्कोरिंग, एक नैदानिक ​​सेटिंग में पूर्व आरोपण आनुवंशिक निदान (PGD) के लिए लागू के लिए उपयुक्त जांच के चयन का वर्णन करता है.

पूर्व आरोपण जेनेटिक निदान के लिए मछली

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Ischemic हृदय में विफलता के लिए एक preclinical मॉडल में जीन स्थानांतरण

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

रीव्स ' मुंटजाक हिरण में गर्भावस्था निदान के लिए ट्रांसाडोमिनल अल्ट्रासाउंड

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

का निदान<em&gt; मस्कुलस Gastrocnemius</em&gt; जकड़न - नैदानिक ​​परीक्षा के लिए महत्वपूर्ण कारक

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

चूहों में त्वरित एथेरोस्क्लेरोसिस का समावेश: "वायर-इंजरी" मॉडल

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

हाइड्रा, एक कंप्यूटर-हृदय विश्लेषण और निदान में चिकित्सकों सहायता के लिए मंच आधारित

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

नवजात न्यूमोथोरैक्स अल्ट्रासाउंड निदान और अल्ट्रासाउंड निर्देशित थोरासेंटेसिस प्रक्रिया के लिए अंतर्राष्ट्रीय विशेषज्ञ आम सहमति और सिफारिशें

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

मानव ब्रूसेलर स्पॉन्डिलोडिस्काइटिस का निदान और शल्य चिकित्सा उपचार

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

कोरोनरी वासोमोटर विकारों के इनवेसिव निदान के लिए एडेनोसिन के बाद एसिटाइलकोलाइन का परीक्षण

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

कोरोनरी माइक्रोवास्कुलर ऐंठन के निदान के लिए मायोकार्डियल लैक्टेट उत्पादन का मापन

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

एलर्जी निदान के लिए बेसोफिल सक्रियण परीक्षण

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...