Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

1. Лизирующий и распространение Nucleus от биопсию Бластомер <ol><li> Сотовые лизис буфера для распространения клетки (0,2% Tween20 в 0,01 М HCl, рН 2,0) должны быть готовы за 24 часа и хранится при температуре -20 ° C. Подготовка 100 мл и фильтруют 20 мл в 30 мл стерильного универсальный контейнер, используя стерильный шприц 20 мл и шприц фильтр. Внесите 1 мл аликвоты в 10-15 1,7 мл стерильные пробирки микроцентрифужных, близкие и этикетки труб до замораживания. Рекомендуется иметь два различных партий, это использовать, новая партия и предыдущей партии, которая была протестирована и может использоваться, если новая партия является неудовлетворительным. </li><li> Размораживание лизис буфера при комнатной температуре за 30 минут до процедуры биопсии. Для практических целей рабочая температура будет от комнатной температуры до температуры стороны. </li><li> Оценка небольшой круг (около 5 мм в диаметре) на нижней стороне амин покрытием слайд (например Genetix) с помощью пера алмазов и предварительно этикетке слайд с номер дела, уникальный номер слайда, дата и биопсии. Используйте отдельный слайд для каждой бластомеров в порядке, и этикетка с эмбрионом номер. Слайды должны быть маркированы с твердым карандашом, такие как 4H, и &quot;уничтожены&quot; с латексной перчатки для удаления графитовой пыли. </li><li> Место небольшой объем буфера лизис внутри круга. </li><li> Передача биопсии бластомеров в лизис буфера. При необходимости добавить лизис буфера внутри круга, пока клетка начинает лизировать; ячейка должна лизировать полностью и цитоплазмы разгона до буфера высохнет. </li><li> Обратите внимание на ядре, чтобы он остается в пределах круга и не теряется, если ячейка не имеет ядро ​​или несколько ядер, биопсия другой ячейке. </li><li> Оставьте слайд высохнуть на воздухе при комнатной температуре. </li></ol> 2. В гибридизация Единого Бластомер Nucleus <ol><li> Подготовка этанола серии (70, 90 и 100%) составил в стерильной дистиллированной воде. </li><li> Включить и настроить горячие блока (например, Hybaid Omnislide или Vysis Hybrite) до 75 ° C. </li><li> Размораживание зонды, вихрь, и центрифуга. Реагенты должны быть свидетелем и достоверно, что он правильный, прежде чем принять зонд смесью. Внесите объемы, указанные производителем, чтобы составить зонд смеси в 0,65 мл стерильную пробирку микроцентрифужных и вихря и центрифуги перед использованием. Общий объем зонд смесь должна быть достаточной для 2 мкл на ядре должны быть проверены и округленной до ближайших 10 мкл, чтобы запас прочности. </li><li> Предварительная стирка слайды в банках Коплин использованием фосфатно-солевом буфере (PBS) (рН 7,0: 0,14 М NaCl, 3 мМ KCl, 10 мМ Na 2 HPO 4, 2 мМ KH 2 PO 4) в течение 5 мин при комнатной температуре. </li><li> Промыть слайдов дважды в стерильной дистиллированной воде. </li><li> Дегидрировать слайды с этанолом серии (70, 90 и 100%) в течение 2 минут каждый при комнатной температуре и воздушно-сухой. Обеспечить слайды полностью погружен, и если какой-либо графитовой пыли всплывает на поверхность, впитывают с чистой ткани. </li><li> Запись положение ядра в пределах круга с визуализации с помощью микроскопа фазового контраста. </li><li> Дегидрировать со 100% этилового спирта в течение 2 мин при комнатной температуре и воздушно-сухой. </li><li> Нанести 2 мкл зонд смесью, и покрытие с 9 х 9 мм покровное (одна четверть 18 х 18 мм № 1 покровное). </li><li> Печать края покровного стекла с резиновой цемента (например, корова Gum; Корова проверки правописания). </li><li> Codenature скользит по горячей блок при 75 ° С в течение 5 мин, а затем гибридизуются слайды ночь (16-20 ч) во влажной камере при температуре 37 ° C. Зонд смесей, которые состоят исключительно из центромеры зондов (например, для пола связанные случаи) даст удовлетворительного результата через 60 мин гибридизации. </li><li> Подготовка водяной бане с достаточной банки Коплин и тепла до 71 ° C. </li><li> Подготовка 0.4x стандартный солевой цитрата (SSC) строгие промывочного раствора (рН 7,0 при 71 ° C, 0,06 М NaCl, 6 мм C 6 H 5 Na 3 O 7 · 2H 2 O) и тепла в водяную баню. </li><li> Внесите 50 мл строгие мыть в Коплин банку требуется, и убедитесь, что температура 71 ° С непосредственно перед использованием, используя чистую термометр. </li><li> Осторожно снимите резиновый клей от каждого слайда и смыть покровное использованием 4x SSC/0.05% Tween20 (рН 7,0) при комнатной температуре. </li><li> Вымойте слайдов в 0.4x SSC строгие стирка при 71 ° С в течение 5 мин. Вымойте не более 6 слайдов на банку Коплин. </li><li> Вымойте слайдов в 4x SSC/0.05% Tween20 при комнатной температуре в течение 2 мин. </li><li> Если зонд смесь содержит косвенно меченым зондом (ы), процедить слайды лишнюю жидкость и применить 20 мкл флуоресцентно конъюгированных антител под 20 х 20 мм, квадрат парафильмом. </li><li> Инкубировать во влажной камере при температуре 37 ° С в течение 15 мин. </li><li> Удалить парафильмом и мыть один раз в 4-кратный SSC/0.05% Tween20 при комнатной температуре в течение 2 мин. </li><li> Мыть два раза в течение 2 мин в PBSт комнатной температуры и слейте слайдов. </li><li> Применить 6 мкл DAPI / Vectashield (160 нг 4 &#39;,6-diamidino-2-фенилиндола дигидрохлорид в 1 мл Vectashield монтажа среды, Vector Laboratories) до 22 х 22 мм нет. 0 покровное и инвертировать скользить по покровным. </li><li> Пятно и печатью края покровного стекла с прозрачным лаком ногтей. </li></ol> 3. Анализ использования флуоресцентного микроскопа соответствующее оборудование с соответствующими фильтрами для датчиков используется. <ol><li> Оценка сигналов прямой визуализации с помощью флуоресцентного микроскопа и одиночные полосовых фильтров для каждого флуорохромом в анализе. Каждое ядро ​​должно быть засчитан по двум аналитикам. Общее руководство должно привести к озвучивание одного сигнала, когда два близко расположенных сигналов меньше, чем на один домен (сигнал ширины) друг от друга, но суждение, основанное на опыте необходимо быть внимательным, чтобы интерпретировать сигналы различной величины, интенсивности и разделения. </li><li> Используйте для обработки изображений (например, Исида, метасистемы, Altlussheim, Германия; CytoVision, Genetix), чтобы захватить образ ядра для подтверждения визуальной диагностики, а также для архивации изображений в качестве части плана обеспечения качества лабораторных исследований. </li></ol> 4. Представитель Результаты: Метафазных и интерфазных ядрах из культивируемых лимфоцитов периферической крови должны быть изучены, чтобы убедиться, что выбранный зонды, специфичные для транслокации хромосом, информативными для точек останова (subtelomere зонды должны скрещиваться только перемещаться сегментов и центромеры зонд (ы) для ориентированных сегмента (ов)) и сигналов в интерфазных ядрах должна быть яркой и дискретной. Скоринг количество сигналов для каждого датчика в 100 интерфазных ядрах от каждого партнера рекомендуется оценить эффективность анализа. В этом случае 2 сигналы были забиты в 95% -99% ядер для каждого зонда. На рисунке 1 показана метафазы и межфазных ядра от подготовки к взаимной транслокации между коротких плечах хромосомы 5 и 9. Сигналы в интерфазных ядрах бластомеров эмбриона из должна быть яркой и дискретных и забил с использованием отдельных полосового фильтра для используемых цветов. На рисунке 2 показан бластомеров ядра с нормальной картины сигнала (2 экземпляра для всех локусов испытания) в соответствии с нормальной или сбалансированной хромосомы дополнением для хромосомы 5 и 9, и ядром с ненормальным шаблон сигнала в соответствии с несбалансированным продукт транслокации , которая моносомия (один экземпляр) для транслокации сегмента хромосомы 5 и трисомии (3 копии) для транслокации сегмента хромосомы 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> Рисунок 1 распространению метафазы и межфазных ядра подготовленные из культивируемых лимфоцитов периферической крови от носителя взаимные транслокации между коротких плечах хромосомы 5 и 9 с точки останова на 5p14.3 и 9p24.1. 46, XY, т (5 ; 9) (p14.3;. p24.1) иш т (5; 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). FISH зондов были выбраны для обоих транслоцируется сегментов (5p14.3 → 5pter, красный Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, зеленый Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) и ориентированный сегмент хромосомы 9 (9p24.1 → 9qter, синий Abbott КЭП 9 альфа-спутник SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2. Сигналы в ядрах бластомеров межфазной день ото-3 эмбрионов получены с помощью различных фильтров для каждого флуорохромом и объединены в составное изображение. (А) Два сигнала для каждого датчика указывает две копии каждого локуса, что согласуется с нормальной или сбалансированной дополнением для транслокации хромосом. (B) Один красный сигнал, три зеленых сигналов и два синих сигналов, указывающих на одну копию транслоцируется сегмента хромосомы 5, в трех экземплярах транслоцируется сегмента хромосомы 9 и две копии ориентированный сегмент хромосомы 9, что согласуется со смежными -1 сегрегации транслокации в результате несбалансированного продукта с моносомия для 5p14.3 → 5pter и трисомии для 9p24.1 → 9pter.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Применение флуоресценции в гибридизация (FISH) в одной клетке эмбриона (бластомеров) представляет особых проблем, как в практической, а в интерпретации сигнала узор. Биопсию ячейки необходимо распространять в пределах заранее определенной зоны на слайде с тем чтобы облегчить ее локализации следующим рыбы; особой осторожностью следует принимать в том, чтобы ячейка лизированными, что цитоплазма была рассеяна, и, что ядро видна и нетронутыми, и, как диагноза зависит от результатов этой единственной клетки, строгие по подсчету и интерпретации руководящие принципы должны быть применены. Тем не менее, в опытных руках, FISH это мощная техника для предимплантационной генетической диагностики (ПГД) в клинической практике. Принцип ПГД рыбой в том, что мишень-специфической ДНК проб, соединенных с различными флуорохромами или гаптенов могут быть использованы для обнаружения копию ряд конкретных локусов, и таким образом обнаружить хромосому дисбаланс связан с мейоза сегрегация хромосомных перестроек (1), в том числе робертсоновских транслокации, реципрокных транслокаций, инверсий, и сложные перестановки (2). Рыба также может быть использован для выбора эмбрионов женского пола в семьях с Х-сцепленным заболеванием, для которого нет мутации конкретного теста (3, 4). Более спорно, FISH была также использована для выявления спорадических анеуплоидии хромосомы для того, чтобы попытаться улучшить эффективность искусственного оплодотворения (5, 6), однако прогностическая ценность этого теста с использованием FSIH, вероятно, будет неприемлемо низкой в ​​большинстве людей руки и не рекомендуется для рутинного клинического использования (7). Эта статья посвящена техническим аспектам и ограничения FISH применяется для клинических одноклеточных диагноз. Методы распространения и закрепления одного бластомеров включают метанол / уксусная кислота (5, 8), твин / HCl (9), и сочетание Tween / HCl и метанол / уксусная кислота (10). Изменения включают гипотоническая обработка клеток до распространения и / или пепсина и параформальдегида лечение после фиксации. Метод должен быть надлежащим образом проверены для лаборатории (14). Твин / HCl метод подробно описан в этой статье. Твин / HCl метод технически прост и в высшей степени воспроизводимы в разных лабораториях. Этот метод может быть использован для получения одного ядра для FISH диагностики определения пола и хромосомных перестроек с приемлемой диагностической точности (7). Зонд смеси можно комбинировать прямо и косвенно помечены меченых зондов и зондов от разных производителей. Зонды для известных полиморфных участков хромосом (11, 12), или те, известный перекрестной гибридизации значительно с другими хромосомами (13) следует избегать, хотя может использоваться, если доказано, что конкретные и подходит для ПГД по предварительному тестированию как на репродуктивное партнеров . Доступные флуорохромами / гаптенов и стратегии для различения зонды включают следующее: Texas Red (TR), флуоресцеин изотиоцианат (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, биотинилированного зонда обнаружены с TR-авидин, FITC-авидин, или Су-5 стрептавидином (визуализируется использованием FarRed фильтр), сочетание красного и зеленого зонды для производства желтого сигнала, второй раунд гибридизации и третий цвет создана путем последовательного захвата SpectrumOrange использованием TexasRed и SpectrumGold фильтр). Зонд множество, содержащее три зонды, специфичные для центромеры регионов X и Y хромосомы и аутосомы один, рекомендуется для определения пола (14), аутосомно-зонд используется для установления плоидности и тем самым провести различие между трисомии Х (2n, 47 , XXX) и триплоидии (3n, 69, XXX), а также между tetrasomy X (48, ХХХХ) и tetraploidy (4л, 92, ХХХХ). Типичный набор зонд применяется в этой ситуации является сочетание Abbott AneuVysion содержащих альфа-спутник X, Y, и 18; этот зонд набор был продемонстрирован имеют очень низкий уровень полиморфизма, и поэтому предварительная очистка рабочих из репродуктивного партнеров не требуется (14). Зонд смесь для какой-либо конкретной перестройки должно: в идеале содержать зонды по крайней мере достаточно, чтобы обнаружить все ожидаемые продукты перестановки с хромосомными дисбаланс. Если это невозможно, зонд смесей, где незамеченными несбалансированной продукты были оценены как нежизнеспособное в узнаваемых беременности и, вероятно, имеют очень низкую распространенность может быть приемлемым (14). Быть проверено на культуре лимфоцитов метафаз с обеих репродуктивного партнеров. По крайней мере, десять метафазных должны быть проверены на предмет зонд специфичность, полиморфизмов и кросс-гибридизации, а для перевозчика перестройка хромосомы, чтобы гарантировать, что зонды гибридизации, как ожидается, различные сегменты перестановки. Кроме того, по меньшей мере 100 интерфазных ядрах из этих препаратов должен быть засчитан, оценить специфику сигнала, яркость и дискретности (14). Commercial зонд PGS наборы доступны (например, Abbott MultiVysion РВ или ПГТ), ориентированных на хромосомах чаще оказываются в анеуплоидных продуктов зачатия, и в составе одного зонда на хромосому целенаправленными. Обычно ядро ​​может иметь второй гибридизации с зондами для дополнительной хромосомы обеспечение для анализа хромосом 13, 15, 16, 18, 21, 22 и XY (14). Прогностическая ценность этого теста с использованием распространения и FISH методике, описанной здесь, вероятно, будет неприемлемо низкой в ​​руки большинства людей, и она не рекомендуется для рутинного клинического использования (7, 15). Такие методы, как сравнительный гибридизации генома (CGH) применительно к одной клетки способны, чтобы проверить на число копий каждой хромосомы (Wilton и соавт. 2001), и использование одиночных нуклеотидных полиморфизмов (SNP) массивы и количественный анализ (Уэллс и др. . 2008) или &quot;karyomapping&quot; генотипирования (Хэндисайда и соавт. 2009) являются перспективными альтернативных методов для обнаружения анеуплоидии хромосомы. Тем не менее, предел разрешающей способности и точности для сегмента дисбаланса остаются неопределенными, и вполне вероятно, что рыба будет оставаться методом выбора для хромосомных перестроек с участием небольших сегментов.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Доимплантационной генетическая диагностика (ПГД) является признанным альтернатива дородовой диагностики и включает в себя выбор предымплантационного эмбрионов из когорты порожденных помощью технологии воспроизводства (АРТ). Этот выбор может потребоваться из-за семейной болезни моногенных (например, кистозный фиброз), или потому, что один из партнеров осуществляет хромосомных перестроек (например, двусторонние взаимные транслокации). ПГД доступна для пар, которые уже раньше пострадавших детей, и / или в случае хромосомных перестроек, повторные выкидыши или бесплодие. Ооциты атмосферный после стимуляции яичников оплодотворяются в пробирке погружение в сперме (ЭКО) или интрацитоплазматической инъекция сперматозоида отдельные (ИКСИ). Доимплантационной расщепления стадии эмбрионы биопсии, как правило, путем удаления одной клетки на 3 день после оплодотворения, и биопсию ячейка испытания для установления генетического статуса эмбриона. Флуоресцентный в гибридизация (FISH) на фиксированную ядер биопсию клетки с мишень-специфической ДНК-зондов является методом выбора для выявления хромосом дисбаланс связан с хромосомными перестройками, а также выбрать женских эмбрионов в семьях с Х-сцепленным заболеванием, для которого существует никакая мутация конкретного теста. FISH была также использована для скрининга эмбрионов для спонтанной анеуплоидии хромосомы (также известный как PGS или PGD-AS), с тем чтобы попытаться улучшить эффективность искусственного оплодотворения, однако прогностическая ценность этого теста с использованием распространения и FISH методике, описанной здесь скорее всего, будет неприемлемо низкой в ​​руках большинства людей и не рекомендуется для рутинного клинического использования. Мы опишем выбор подходящих зондов для одноклеточных FISH, распространение методов бластомеров ядер, и в гибридизация и сигнал скоринга, применительно к ПГД в клинических условиях.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

В этой статье описывается выбор подходящих зондов для одноклеточных FISH, распространение методов бластомеров ядер, и в гибридизация и сигнал скоринга, применительно к предимплантационной генетической диагностики (ПГД) в клинических условиях.

FISH для подготовки к имплантации генетическая диагностика

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Перенос генов для ишемической сердечной недостаточности в доклинических моделей

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Трансабдоминальное УЗИ для диагностики беременности в Ривз 'Мунтжак олень

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

Диагностика<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Герметичность - Основные факторы для клинического обследования

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Индукция ускоренного атеросклероза у мышей: модель "Wire-Injury"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Гидра, компьютер-платформа для помогая врачам в сердечно-сосудистой системы анализа и диагностики

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Международный экспертный консенсус и рекомендации по диагностике узификации пневмоторакса и ультразвуковой терапии торацентеза

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

Диагностика и хирургическое лечение человека Брюселлар Спондилодисцит

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Тестирование ацетилхолина с последующим использованием аденозина для инвазивной диагностики коронарных вазомоторных расстройств

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Измерение продукции лактата в миокарде для диагностики микроваскулярного спазма коронарных артерий

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Тест активации базофилов для диагностики аллергии

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...