Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

1. Lysing och sprider en kärna från en biopsier Blastomere <ol><li> Cell lyseringsbuffert för spridning av celler (0,2% Tween20 i 0,01 M HCl, pH 2,0) bör utarbetas 24 timmar i förväg och förvaras vid -20 ° C. Bereda 100 ml och filtrera 20 ml i en 30 ml steril universella behållare med en steril 20 ml spruta och filtrera spruta. Tillsätt 1 ml-portioner i 10-15 1,7 ml sterila mikrocentrifugrör, nära och etikett rören före frysning. Det rekommenderas att ha två olika partier är att använda den nya parti och det tidigare partiet, som har testats och kan användas om det nya partiet är otillfredsställande. </li><li> Frosta av lyseringsbuffert i rumstemperatur 30 minuter före biopsi förfarande. Av praktiska skäl arbetstemperaturen kommer att vara mellan rumstemperatur och hand temperatur. </li><li> Betyg en liten cirkel (ca 5 mm diameter) på undersidan av en amin-belagd slide (t.ex. Genetix) med en diamant penna och pre-märka bilden med ärendenummer, unika bildnummer, och biopsi datum. Använd en separat bild för varje blastomere i nummerordning och etikett med embryot nummer. Diabilder bör märkas med en hård penna som 4H, och &quot;utplånas&quot; med en latex handske för att ta bort grafit damm. </li><li> Placera en liten mängd lyseringsbuffert inom cirkeln. </li><li> Överför biopsier blastomere i lyseringsbuffert. Om det behövs lägger lyseringsbuffert inom cirkeln tills cellen börjar lysera, cellen ska Lyse helt och cytoplasman skingra innan bufferten torkar. </li><li> Observera kärnan för att säkerställa att det förblir inom cirkeln och är inte förlorad, om cellen inte har någon kärna eller har flera kärnor, biopsi annan cell. </li><li> Lämna bilden för att lufttorka i rumstemperatur. </li></ol> 2. In Situ Hybridisering av ett gemensamt Blastomere Nucleus <ol><li> Förbered en etanol-serien (70, 90 och 100%) består i sterilt destillerat vatten. </li><li> Slå på och ställ in den heta blocket (t.ex. Hybaid Omnislide eller Vysis Hybrite) till 75 ° C. </li><li> Defrost sonder, virvel, och centrifugera. Reagensen ska bevittnas och verifieras vara korrekt innan upp sonden blandningen. Pipettera volymer som anges av tillverkaren för att ge sonden blandningen i en 0,65 ml sterilt mikrocentrifugrör och vortexa och centrifugera före användning. Den totala volymen av probe Blandningen ska vara tillräcklig för att tillåta 2 mikroliter per kärna som ska testas och avrundas uppåt till närmaste 10 mikroliter för att möjliggöra en säkerhetsmarginal. </li><li> Förtvätt bilderna i Coplin burkar med fosfatbuffrad saltlösning (PBS) (pH 7,0: 0,14 M NaCl, 3 mm KCl, 10 mm Na 2 4 HPO, 2 mm KH 2 PO 4) under 5 minuter vid rumstemperatur. </li><li> Skölj objektglasen två gånger i sterilt destillerat vatten. </li><li> Torka objektglasen med etanol-serien (70, 90 och 100%) i 2 min vardera vid rumstemperatur och lufttorka. Se till att bilderna är helt nedsänkt och om någon grafit damm flyter upp till ytan, sug upp med en ren vävnad. </li><li> Rekord ställning kärnan inom cirkeln genom att visualisera med ett faskontrastmikroskop. </li><li> Torka med 100% etanol i 2 minuter i rumstemperatur och lufttorka. </li><li> Applicera 2 mikroliter av sond blandningen och täck med en 9 x 9 mm täckglas (en fjärdedel av en 18 x 18 mm no.1 täckglas). </li><li> Täta kanterna på täckglas med gummi cement (t.ex. Cow tandköttet, Cow Proofing). </li><li> Codenature glasen på en varm kvarter vid 75 ° C i 5 min, och sedan hybridisera bilderna över natten (16-20 h) i en fuktig kammare vid 37 ° C. Probe mixar som uteslutande består av centromer sonder (dvs för könsbunden fall) kommer att ge ett tillfredsställande resultat efter 60 minuter av hybridisering. </li><li> Förbered ett vattenbad med tillräcklig Coplin burkar och värm till 71 ° C. </li><li> Förbered en 0.4x standard saltlösning citrat (SSC) stränga tvättlösning (pH 7,0 vid 71 ° C, 0,06 M NaCl, 6 mm C 6 H 5 Na 3 O 7 .2 H 2 O) och värme i vattenbad. </li><li> Tillsätt 50 ml av stränga tvätta krävs per Coplin burken och kontrollera att temperaturen är 71 ° C omedelbart före användning med en ren termometer. </li><li> Ta försiktigt bort klister från varje bild och skölj bort täckglas med 4x SSC/0.05% Tween20 (pH 7,0) vid rumstemperatur. </li><li> Tvätta bilderna i 0.4x SSC stränga tvätt vid 71 ° C i 5 min. Tvätta inte mer än sex bilder per Coplin burk. </li><li> Tvätta bilderna i 4x SSC/0.05% Tween20 i rumstemperatur i 2 min. </li><li> Om sonden blandningen innehåller indirekt märkt sond (s), dränera diabilder av överflödig vätska och tillämpa 20 mikroliter av fluorescerande antikropp i en 20 x 20 mm torget i Parafilm. </li><li> Inkubera i en fuktig kammare vid 37 ° C i 15 min. </li><li> Ta bort Parafilm och tvätta en gång i 4x SSC/0.05% Tween20 i rumstemperatur i 2 min. </li><li> Tvätta två gånger i 2 minuter i PBS ent rumstemperatur och dränera bilder. </li><li> Applicera 6 ìl DAPI / Vectashield (160 ng 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole dihydroklorid i 1 ml Vectashield monteringsmedium, Vector Laboratories) till en 22 x 22 mm nr. 0 täckglas och invertera glida över täckglas. </li><li> Blot och försegla kanterna på täckglas med tydliga nagellack. </li></ol> 3. Analys med en fluorescensmikroskop Utrustad Lämpligt med lämpliga filter för den använda prober. <ol><li> Betyg signaler genom direkt visualisering med hjälp av en fluorescensmikroskop och ensamstående bandpassfilter för varje fluorokrom i analysen. Varje kärna ska bedömas av två analytiker. En allmän riktlinje bör leda till poängsättning av en enda signal där två tätt placerade signaler är mindre än en domän (signal-bredd) isär, men behöver dom baserade på erfarenhet skall utnyttjas för att tolka signaler av varierande storlek, intensitet och separation. </li><li> Använd mjukvara för bildhantering (t.ex. Isis, MetaSystems, Altlussheim, Tyskland, CytoVision, Genetix) för att fånga en bild av en grundplåt för bekräftelse av den visuella diagnos, och för bildarkivering som en del av ett laboratorium för kvalitetssäkring plan. </li></ol> 4. Representativa resultat: Metafas och interfasen kärnor från odlade perifera lymfocyter i blod bör undersökas för att bekräfta att de valda sonder är specifika för translokation kromosomerna, informativ för brytpunkter (den subtelomere sonder ska hybridisera endast flyttad segment och centromer sond (s) till centrerad segment (s)) och de signaler i interfas kärnor ska vara ljusa och diskreta. Poängsättning antalet signaler för varje givare i 100 interfas kärnor från varje deltagande rekommenderas att bedöma effektiviteten i analysen. I det här fallet 2 signaler har gjort mål i 95% -99% av kärnorna för varje givare. Figur 1 visar en metafas och interfasen kärnan från en förberedelse för en ömsesidig translokation mellan korta armar av kromosomer 5 och 9. Signaler i interfas kärnor från embryo blastomerer bör vara ljusa och diskreta och värderade med hjälp av olika filter bandpass för de färger som används. Figur 2 visar en blastomere kärna med en normal signalmönster (2 exemplar för alla testade loci) förenlig med en normal eller balanserad kromosom komplement till kromosom 5 och 9, och en kärna med en avvikande signal mönster som överensstämmer med en obalanserad produkt av translokation som har monosomi (en kopia) för flyttad segment av kromosom 5 och trisomi (3 kopior) för flyttad segment av kromosom 9. <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Figur 1" /> Figur 1 En metafas spridning och en interfasen kärna som framställts av odlade perifera lymfocyter i blod från en bärare av en ömsesidig translokation mellan korta armar av kromosomer 5 och 9 med brytpunkter vid 5p14.3 och 9p24.1:. 46, XY, t (5 , 9) (p14.3;. p24.1) ish t (5; 9) (5ptel48-, 9ptel30 +; 9ptel30-, 5ptel48 +, 9cen +). FISK sonder valdes ut för både flyttad segmenten (5p14.3 → 5pter, röd Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, grön Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) och centrerad segment av kromosom 9 (9p24.1 → 9qter, blå Abbott CEP 9 alfa satellit SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Figur 2" /> Figur 2. Signaler i interfas blastomere kärnor från dag-3 embryon som tagits med en annan filter för varje fluorokrom och slås samman till en sammansatt bild. (A) Två signaler för varje givare visar två kopior av varje locus, vilket är förenligt med en normal eller balanserat komplement för translokation kromosomerna. (B) En röd signal, tre gröna signaler och två blå signaler om ett exemplar av flyttad segment av kromosom 5, tre kopior av flyttad segment av kromosom 9 och två kopior av centrerad segment av kromosom 9, vilket stämmer överens med angränsande -1 segregation av translokationen resulterar i en obalanserad med monosomi för 5p14.3 → 5pter och trisomi för 9p24.1 → 9pter.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

Tillämpningen av fluorescens in situ hybridisering (FISH) till en enda embryo cell (blastomere) presenterar speciella utmaningar både i praktiska och i tolkningen av signalen mönster. Den biopsier cellen måste spridas inom en på förhand definierat område i bilden, för att underlätta dess lokalisering följande fiskarter; extrem försiktighet måste vidtas för att säkerställa att cellen är lyserade, att cytoplasman har skingrats, och att kärnan är synlig och intakt, och som diagnosen beror på resultaten från denna enda cell, stränga poängsättning och tolkning riktlinjer bör tillämpas. Men i erfarna händer, är FISH en robust teknik för preimplantatorisk genetisk diagnostik (PGD) i klinisk praxis. Principen om PGD av fisk är att mål-specifika DNA-prober märkta med olika fluorokromer eller haptener kan användas för att detektera kopian antal specifika loci, och på så sätt att upptäcka kromosom obalans i samband med meiotiska segregering av kromosom omdisponeringar (1), inklusive Robertsonian translokationer, ömsesidiga translokationer, inversioner och komplexa omflyttningar (2). Fisk kan också användas för att välja kvinnliga embryon i familjer med X-bunden sjukdom för vilken det inte finns någon mutation-specifika tester (3, 4). Mer kontroversiellt är FISH också använts för att screena för sporadiska kromosom aneuploidi för att försöka förbättra effektiviteten i assisterad befruktning (5, 6), men det är det prediktiva värdet av detta test med hjälp av FSIH sannolikt oacceptabelt låg i de flesta människors händer och det rekommenderas inte för rutinmässig klinisk användning (7). Denna artikel koncentrerar sig på tekniska aspekter och de begränsningar som FISH tillämpas på klinisk encelliga diagnos. Metoder för spridning och fastställande enda blastomerer innehålla metanol / ättiksyra (5, 8), Tween / HCl (9), och en kombination av Tween / HCl och metanol / ättiksyra (10). Variationer inkluderar hypoton behandling av cellerna innan de sprider sig och / eller pepsin och paraformaldehyd behandling efter fixering. Metoden bör vara lämpligt valideras för laboratoriet (14). Interpoleringen / HCl-metoden beskrivs i detalj i denna artikel. Interpoleringen / HCl-metoden är tekniskt enkel och mycket reproducerbar i olika laboratorier. Denna metod kan användas för att förbereda enstaka kärnor för FISH diagnostik av könsbestämning och omorganiseringar kromosom med acceptabla diagnostiska noggrannheten (7). Probe mixar kan kombinera direkt märkta och indirekt märkta prober, och sonder från olika tillverkare. Sonder för kända polymorfa kromosomområden (11, 12), eller de kända för att över hybridisera signifikant med andra kromosomer (13) bör undvikas, men kan användas om visat sig vara specifik och lämplig för PGD av tidigare tester på både reproduktiv partner . Finns fluorokromer / haptener och strategier för att diskriminera sonder innehålla följande: Texas Red (TR), fluorescein (FITC), SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, biotinylerad sonder upptäckas med TR-avidin, FITC-avidin, eller Cy-5 streptavidin (visualiseras med en FarRed filter), en blandning av rött och grönt sonder för att producera en gul signal, en andra omgång av hybridisering och en tredje färg som skapats av sekventiell fånga SpectrumOrange med hjälp av en TexasRed och en SpectrumGold filter). En sond som innehåller tre prober, specifikt för centromer regioner i X-och Y-kromosomer och en autosome, rekommenderas för könsbestämning (14), den autosomal sonden används för att upprätta ploidi och därmed att skilja mellan trisomi X (2n, 47 , XXX) och triploidy 3n (, 69, XXX) och mellan tetrasomy X 48 (, XXXX) och tetraploidy 4N (, 92, XXXX). En typisk sond som tillämpas i denna inställning är Abbott AneuVysion blandning som innehåller alfa-satellit-X, Y och 18, denna givare som har visat sig ha en mycket låg polymorfism takt, och därför förbehandling upparbetning av reproduktiv partner krävs inte (14). Sonden blandning för någon speciell ombildning bör helst innehålla sonder åtminstone tillräckligt för att upptäcka alla förväntade produkter av ombildning med kromosom obalans. Om detta inte är möjligt, blandar sond där oupptäckt obalanserade produkter har bedömts vara icke livskraftiga i en igenkännbar graviditet och har sannolikt mycket låg förekomst kan vara acceptabelt (14). Testas på odlade lymfocyter metafaser från båda reproduktiva partner. Minst tio metafas sprider bör undersökas för givare specificitet, polymorfismer och cross-hybridisering, och för kromosom ombildning bärare, för att säkerställa att sonder hybridisera som väntat till olika segment av ombildning. Dessutom bör minst 100 interfas kärnor från dessa förberedelser görs för att bedöma signal specificitet, ljusstyrka och discreteness (14). Commercial PGS sond uppsättningar finns tillgängliga (t.ex. Abbott MultiVysion PB eller PGT), med inriktning på kromosomerna som oftast visar sig vara aneuploid i produkter av befruktningen, och som består av en ensam sond per kromosom riktade. Typiskt kärnan kan ha en andra hybridisering med sonder för extra kromosomer ger en assay för kromosomerna 13, 15, 16, 18, 21, 22, och XY (14). Det prediktiva värdet för denna test med att sprida och FISH teknik som beskrivs här är sannolikt att oacceptabelt låga i de flesta människors händer och det rekommenderas inte för rutinmässig klinisk användning (7, 15). Tekniker såsom jämförande genomik hybridisering (CGH) tillämpas på enstaka celler kan testa för det antal kopior av varje kromosom (Wilton et al. 2001), och användning av single nucleotide polymorphisms (SNP) arrayer och kvantitativ analys (Wells et al . 2008) eller &quot;karyomapping&quot; genotypning (Handyside et al. 2009) är lovande alternativa tekniker för att upptäcka kromosom aneuploidi. Men upplösningen gränsen och noggrannhet för segmentet obalans fortfarande osäkra och det är troligt att fisk kommer att fortsätta vara den teknik val för kromosom omdisponeringar omfattar små segment.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Preimplantatorisk genetisk diagnostik (PGD) är ett etablerat alternativ till fosterdiagnostik, och innebär att välja pre-implantation embryon från en kohort som genereras av assisterad befruktning teknik (ART). Detta urval kan krävas på grund av familjär monogena sjukdomar (t.ex. cystisk fibros), eller för att en partner bär på en kromosom ombildning (t ex en två-vägs ömsesidiga translokation). PGD ​​är tillgänglig för par som tidigare har påverkat barnen, och / eller i händelse av kromosom omdisponeringar, upprepade missfall eller infertilitet. Oocyter aspirerat efter ovulationsstimulering befruktas av in vitro-nedsänkning i sperma (IVF) eller intracytoplasmatisk injektion av en enskild spermie (ICSI). Preimplantatorisk klyvning steg embryon biopsier, vanligen genom att ta bort en enda cell på dag 3 efter befruktning, och biopsier cellen testas för att fastställa den genetiska statusen av embryot. Fluorescens in situ hybridisering (FISH) på den fasta kärnan av biopsier celler med mål-specifika DNA-prober är den teknik val för att upptäcka kromosom obalans i samband med kromosom omorganiseringar, och att välja kvinnliga embryon i familjer med X-bunden sjukdom som det inte finns ingen mutation-specifika test. FISK har också använts för att screena embryon för spontana kromosom aneuploidi (även känd som PGS och PGD-AS) i syfte att försöka förbättra effektiviteten i assisterad befruktning, men beskrev det prediktiva värdet för denna test med att sprida och FISH tekniken här sannolikt är oacceptabelt låg i de flesta människors händer och det rekommenderas inte för rutinmässig klinisk användning. Vi beskriver valet av lämpliga givare för encelliga FISK, sprida tekniker för blastomere kärnor, och in situ hybridisering och signal poäng, gäller för PGD i en klinisk miljö.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Denna artikel beskriver valet av lämpliga givare för encelliga FISK, sprida tekniker för blastomere kärnor, och in situ hybridisering och signal poäng, gäller för preimplantatorisk genetisk diagnostik (PGD) i en klinisk miljö.

Fisk för preimplantatorisk genetisk diagnos

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Genöverföring för ischemisk hjärtsvikt I en preklinisk modell

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Transabdominal ultraljud för graviditetsdiagnos i Reeves Muntjac Hjort

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

diagnos av<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Täthet - nyckelfaktorer för den kliniska undersökningen

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Induktion av accelererad åderförkalkning hos möss: "Wire-skada" Modell

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, en dator-baserad plattform för medhjälp kliniker i hjärt-analys och diagnos

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Internationell expert konsensus och rekommendationer för neonatal pneumothorax ultraljuddiagnos och ultraljud-guidad thoracentes förfarande

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

Diagnos och kirurgisk behandling av human brucellar spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Testa acetylkolin följt av adenosin för invasiv diagnos av koronar vasomotoriska störningar

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Mätning av myokardlaktatproduktion för diagnos av koronar mikrovaskulär spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Basofilaktiveringstest för allergidiagnos

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...