Name: fish for pre-implantation genetic diagnosis
Uploaded: 2011-02-23T18:30:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

1. Parçalama ve biyopsi blastomer Nucleus Yayılma <ol><li> Yayılan hücreleri (% 0.2 Tween20 0,01 M HCl, pH 2.0) için hücre lizis tamponu 24 saat önceden hazırlanan ve -20 ° C&#39;de saklanan olmalıdır 20 ml steril bir şırınga ve şırınga filtresi kullanarak 30 ml steril evrensel konteyner içine 100 ml ve 20 ml filtre hazırlayın. 10-15 1.7 ml steril mikrosantrifüj tüpler içine 1 ml alikotları koyun, kapatın ve önce donmaya karşı tüpler etiket. Bu, yeni bir toplu iş tatmin edici olup olmadığını test edilmiş ve kullanılabilir kullanımı iki farklı gruplar halinde, yeni bir parti ve bir önceki toplu, olması tavsiye edilir. </li><li> Defrost biyopsi işlemi 30 dakika önce oda sıcaklığında lizis tamponu. Pratik amaçlar için çalışma sıcaklığı, oda sıcaklığı ve el sıcaklık arasında olacaktır. </li><li> Bir elmas kalem ve ön-etiket durumunda numarası, benzersiz slayt numarası ve biyopsi tarihinden ile slayt kullanarak bir amin kaplı slayt (örneğin Genetix) alt kısmında küçük bir daire (yaklaşık 5 mm çapında) Puan. Ayrı bir sayısal sırayla her blastomer slayt ve embriyo sayısı ile etiket kullanın. Slaytlar gibi 4H gibi sert bir kalemle etiketli ve herhangi bir grafit toz kaldırmak için bir lateks eldiven ile &quot;lekelenen&quot; olmalıdır. </li><li> Daire içinde küçük bir hacim lizis tamponu yerleştirin. </li><li> Biyopsi blastomer lizis tamponu içine aktarın. Hücre lyse başlayıncaya kadar gerekli daire içinde lizis tamponu eklerseniz; hücre tamamen lyse ve sitoplazma tampon kurumadan dağıtmak. </li><li> Daire içinde kalır ve kayıp olduğunu sağlamak için çekirdeğin dikkat edin; hücre çekirdeğinde veya çoklu çekirdeklerin yoksa, başka bir hücreye biyopsi. </li><li> Slayt oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li></ol> 2 Tek bir blastomer Nucleus Situ Hibridizasyon <ol><li> Steril distile su içinde yapılan etanol serisi (70, 90 ve% 100) hazırlayın. </li><li> Açın ve 75 için sıcak bloğu (örneğin Hybaid Omnislide veya Vysis Hybrite) ° C </li><li> Defrost probları, vorteks, santrifüj ve. Reaktifler tanık ve prob karışımı yapmadan önce doğru bir şekilde kontrol edilmelidir. Pipet 0.65 mL steril mikrosantrifüj tüp ve kullanımdan önce vorteks ve santrifüj prob karışımı telafi etmek için üretici tarafından belirtilen birimleri. Sondası karışımın toplam hacmi çekirdeği başına 2 mcL test ve bir güvenlik marjı izin için en yakın 10 mcL kadar yuvarlanır için yeterli olmalıdır. </li><li> Coplin kavanozlarda oda sıcaklığında 5 dakika. Kullanarak fosfat tamponlu salin (PBS) (0.14 M NaCl, 3 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 2 mM KH 2 PO 4 pH 7.0) Ön yıkama slaytlar </li><li> Slaytları iki kez steril distile su ile durulayın. </li><li> Etanol serisi (70, 90, ve% 100) ile oda sıcaklığı ve hava-kuru her biri 2 dakika için slaytlar dehydrate. Emin olun slaytlar tam dalmış ve eğer herhangi bir yüzeye grafit toz yüzer, temiz bir mendil ile ıslatın. </li><li> Bir faz kontrast mikroskop ile görselleştirme daire içinde çekirdeğin konumunu kaydedin. </li><li> Oda sıcaklığında ve kuru hava az 2 dakika süreyle% 100 etanol ile dehydrate. </li><li> 2 mcL prob karışımı uygulayın ve 9 x 9 mm lamel (18 x 18 mm no.1 lamel dörtte biri) ile kaplayın. </li><li> Kauçuk çimento (İnek Prova örneğin İnek Sakız) ile lamel kenarlarında Seal. </li><li> 75 sıcak bir blok slaytlar Codenature ° C, daha sonra 5 dakika ve 37 nemlendirilmiş bir odasında (16-20 saat) bir gecede slayt melezleşme ° C. Sentromer probları (cinsiyete bağlı durumlar için yani) tamamen oluşur Probe karışımları melezleşme 60 dakika sonra tatmin edici bir sonuç verecektir. </li><li> 71 ile yeterli coplin kavanoz ve ısı ° C olan bir su banyosu hazırlayın </li><li> 0.4x standart tuzlu sitrat (SSC) sıkı bir yıkama çözeltisi (pH 7.0 az 71 ° C, 0.06 M NaCl, 6 mM C 6 H 5 Na 3 O 7 .2 H 2 O) ve ısı su banyosu hazırlayın . </li><li> Coplin kavanoz başına sıkı yıkama 50 ml Uygulama ve sıcaklık 71 olup olmadığını kontrol edin ° C hemen temiz bir termometre kullanarak kullanmadan önce. </li><li> Her bir slayt kauçuk çimento dikkatlice çıkartın ve oda sıcaklığında% 4x SSC/0.05 Tween20 (pH 7.0) kullanarak lamel durulayın. </li><li> 71 0.4x SSC sıkı yıkama slaytlar yıkayın ° C, 5 dk. Coplin kavanoz başına fazla 6 slayt yıkayın. </li><li> 4x SSC/0.05% Tween20 slaytlar, oda sıcaklığında 2 dakika süreyle yıkayın. </li><li> Prob karışımı dolaylı etiketli prob (ler) varsa, aşırı sıvı kaydırağı boşaltma ve Parafilm bir 20 x 20 mm kare altında floresan konjuge antikor 20 mcL uygulayın. </li><li> 37 nemlendirilmiş bir odasında ° C&#39;de 15 dk. </li><li> Parafilm çıkartın ve oda sıcaklığında 2 dakika süreyle% 4x SSC/0.05 Tween20 kez yıkayın. </li><li> 2 dakika süreyle PBS bir iki kez yıkayınt oda sıcaklığında ve slaytlar drenaj. </li><li> Hayır, 22 x 22 mm DAPI / Vectashield (4 160 ng &#39;,6-diamidino-2-phenylindole dihidroklorür Vectashield montaj orta, Vector Laboratuvarlar 1 ml) 6 mcL uygulayın. 0 lamel ve lamel üzerinde slayt ters. </li><li> Leke ve şeffaf tırnak cilası ile lamel kenarlarında mühür. </li></ol> 3. Floresan Mikroskobu kullanılarak analiz uygun Kullanılan Problar için uygun filtreler ile donatılmıştır. <ol><li> Bir floresan mikroskop ve tahlil her florokrom için tek bant-geçiren filtreler kullanılarak doğrudan görselleştirme Puan sinyaller. Her çekirdeğinde iki analistler tarafından atılırsa olmalıdır. Genel bir kural iki yakın aralıklı sinyaller daha az bir etki alanı dışında (sinyal genişliği) tek bir sinyal puanlama yol; ancak, deneyime dayalı kararı büyüklük, yoğunluk, değişik sinyaller ve ayırma yorumlamak olunması gerekmektedir. </li><li> Görüntüleme yazılımı kullanın (örneğin, İsis, MetaSystems, Altlussheim, Almanya; CytoVision, Genetix) görsel tanı onay için çekirdek bir görüntü yakalamak için, bir laboratuvar kalite güvencesi planının bir parçası olarak görüntü arşivleme için. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: Metafaz ve interfaz çekirdekleri kültürlü periferik kan lenfositleri seçilen probları (subtelomere probları transloke segment ve sentromer probu (ler) merkezli sadece melezleşme kesmenoktaları için bilgilendirici, translokasyon kromozom için özel olduğunu onaylamak için muayene edilmelidir segment (ler)) ve interfaz çekirdekleri sinyalleri parlak ve ayrık olmalıdır. 100 interfaz çekirdeği her sonda her bir ortak işaretlerinin sayısı, puanlama testinin etkinliğini değerlendirmek için tavsiye edilir. Bu durumda 2 sinyal 95% -99% çekirdeğinin her sonda skorlandı. Şekil 1 kromozom 5 ve 9 kısa kolları arasında karşılıklı translokasyon için bir hazırlık metafaz ve interfaz çekirdeğinde gösterir. Embriyonun blastomer interfaz çekirdekleri sinyaller parlak ve ayrık olmak ve kullanılan renkler için ayrı bir bant geçiren filtreler kullanılarak attı. Şekil 2 blastomer kromozom 5 ve 9 için normal ya da dengeli bir kromozom normal sinyal tutarlı bir deseni (test edilen tüm lokuslar için 2 kopya) ve anormal bir sinyal deseni ile translokasyon dengesiz bir ürün ile tutarlı bir çekirdek ile çekirdeği gösterir kromozom 5 ve kromozom 9 transloke segment için trizomi (3 nüsha) transloke segment için monozomi (bir nüsha). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 A metafaz yayıldı ve kısa kromozom 5 silah ve 5p14.3 ve 9p24.1 kesme noktaları ile 9 arasında bir karşılıklı translokasyon taşıyıcısı kültürlü periferik kan lenfositleri hazırlanan bir interfaz çekirdeğinde: 46, XY, t (5 9) (p14.3; p24.1) ish t (5, 9) (5ptel48-9ptel30 +; 9ptel30, 5ptel48 + 9cen +). FISH probları hem transloke segmentleri için seçilmiştir (5p14.3 → 5pter, kırmızı Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed; 9p24.1 → 9pter, yeşil Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) ve kromozom 9 merkezli segment (9p24.1 → 9qter, mavi Abbott CEP 9 alfa uydu SpectrumAqua). <img src="/files/ftp_upload/2570/2570fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 gün-3 embriyolar interfaz blastomer çekirdekleri. Sinyaller her florokrom ve kompozit bir görüntü oluşturmak için birleşti için farklı bir filtre kullanılarak ele geçirdi. (A), normal ya da dengeli translokasyon kromozomlar için bir tamamlayıcı ile tutarlı her lokus, iki nüsha gösteren her sonda için iki sinyal. (B) Bir kırmızı sinyal, üç yeşil sinyalleri ve 5. kromozomun transloke segmentinde bir kopyasını, komşu ile tutarlı kromozom 9 transloke segmentinde üç nüsha ve iki nüsha kromozom 9, merkezli segmentinde gösteren iki mavi sinyal 9p24.1 → 9pter 5p14.3 → 5pter ve trizomi monozomi dengesiz bir ürün olarak ortaya çıkan translokasyonu -1 segregasyon.

<ol>
	<li>Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+translocations:+segregation+modes+and+strategies+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis.</a> Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+chromosome+rearrangements.">Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 194-201 (2009).</li><li>Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+sex+of+human+preimplantation+embryos+in+two+hours+using+an+improved+spreading+method+and+fluorescent+in+situ+hybridisation+using+directly+labelled+probes.">Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes.</a> Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+sex-linked+diseases+and+sex-selection+for+non-medical+reasons.">Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons.</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 230-235 (2009).</li><li>Munn&#233;, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+major+chromosome+aneuploidies+in+human+preimplantation+embryos.">Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos.</a> Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).</li><li>Mackie Ogilvie, C., Scriven, P. N., Harper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+for+infertility+(preimplantation+genetic+screening).">Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening).</a> Preimplantation Genetic Diagnosis. , 203-229 (2009).</li><li>Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+accuracy:+theoretical+models+for+preimplantation+genetic+testing+of+a+single+nucleus+using+the+fluorescence+in+situ+hybridization+technique.+Hum+Reprod.">Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod.</a> Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).</li><li>Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+preparation+of+preimplantation+embryo+interphase+nuclei+for+analysis+by+fluorescence+in-situ+hybridization.">Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).</li><li>Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+fixation+technique+for+fluorescence+in+situ+hybridization+for+preimplantation+genetic+diagnosis.">An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis.</a> Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).</li><li>Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+polymorphisms+of+1,+9,+16,+and+Y+in+4+major+ethnic+groups:+a+large+prenatal+study.">Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study.</a> Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).</li><li>Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISH+variants+with+D15Z1.">FISH variants with D15Z1.</a> J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).</li><li>Knight, S. J., Flint, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfect+endings:+a+review+of+subtelomeric+probes+and+their+use+in+clinical+diagnosis.">Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis.</a> J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).</li><li>Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESHRE+PGD+Consortium+(PGS)+ESHRE+PGD+Consortium+'Best+practice+guidelines+for+clinical+preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+and+preimplantation+genetic+screening+(PGS)'.">ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'.</a> Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).</li><li>Munn&#233;, S., Wells, D., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+requirements+for+preimplantation+genetic+diagnosis+to+improve+assisted+reproduction+outcomes.">Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes.</a> Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).</li><li>Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+after+preimplantation+confirmation+of+euploidy+by+comparative+genomic+hybridization.">Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization.</a> N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).</li><li>Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+comprehensive+chromosomal+screening+for+embryo+assessment:+microarrays+and+CGH.">Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH.</a> Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).</li><li>Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyomapping,+a+universal+method+for+genome+wide+analysis+of+genetic+disease+based+on+mapping+crossovers+between+parental+haplotypes.">Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes.</a> J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).</li></ol>

Tek bir embriyo hücresi (blastomer) in situ hibridizasyon (FISH) floresan uygulama, pratik ve sinyal paterni yorumlanması hem de özel zorluklar sunulur . Biyopsi hücre slayt, yerelleştirme aşağıdaki BALIK kolaylaştırmak için önceden tanımlanmış bir alan içinde yayılır; hücre sitoplazmasında dağınık olduğunu, parçalanmış olduğunu sağlanmasında çok dikkatli alınması gerekir, ve bu çekirdeğin Tanı bu tek hücre, sıkı puanlama ve yorumlama kurallar uygulanmalıdır sonuçlarına bağlı olarak, görünür ve bozulmamış. Ancak, deneyimli ellerde, BALIK pre-implantasyon genetik tanı (PGD) klinik uygulamada sağlam bir tekniktir. FISH ile PGT prensibi farklı fluorochromes veya hapten etiketli hedef-spesifik DNA probları özel lokusların kopya sayısı tespit etmek için kullanılan olabilir ve böylece Robertsonian kromozom düzenlerinde mayotik segregasyon (1) ile ilişkili kromozom dengesizliği, algılamak için translokasyonlar, karşılıklı translokasyonlar, inversiyon ve karmaşık düzenlenmeleri (2). BALIK da herhangi bir mutasyon-spesifik bir test (3, 4) olduğu, X-bağlantılı hastalığı olan ailelerde kadın embriyolar seçmek için kullanılabilir. Daha tartışmalı BALIK da yardımlı üreme (5, 6) etkinliğini denemek ve geliştirmek için sporadik kromozom anöploidi ekrana kullanılır olmuştur vardır; Ancak, FSIH kullanarak bu testi prediktif değer olarak kabul edilemeyecek kadar düşük olması için muhtemel olan çoğu kişinin elleri ve rutin klinik kullanımı (7) için tavsiye edilmez. Bu makale, klinik, tek hücreli tanı uygulanan FISH teknik yönlerini ve sınırlamalar üzerinde yoğunlaşmaktadır. Tek blastomer yayma ve düzeltme yöntemleri, metanol / asetik asit (5, 8), Tween / HCl (9) ve Tween / HCl ve metanol / asetik asit (10) bir kombinasyonu içerir. Çeşitlemeler fiksasyon sonra ve / veya pepsin ve paraformaldehid tedavisi yayılıyor önce hücre hipotonik tedavi içerir. Bu yöntem uygun laboratuar (14) için kontrol edilmelidir. Tween / HCl yöntemi bu makalede ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Tween / HCl yöntemi farklı laboratuvarlarda teknik olarak basit ve son derece tekrarlanabilir. Bu yöntem, kabul edilebilir bir tanısal doğruluk (7) ile cinsiyet tayini ve kromozom düzenlenmeleri FISH tanı için tek çekirdekleri hazırlamak için kullanılabilir. Probe karışımları, farklı üreticilerin, doğrudan etiketli ve dolaylı olarak etiketlenmiş probları, ve problar birleştirebilirsiniz. Hem üreme ortakları önceden test PGT için özel ve uygun olduğu gösterildiği takdirde kullanılabilir olsa da bilinen polimorfik kromozom bölgeleri için sondalar (11, 12), ya da bilinen diğer kromozom (13) ile anlamlı bir çapraz melezleşme kaçınılmalıdır . Ayrımcı problar için kullanılabilir fluorochromes / hapten ve stratejileri şunlardır: Texas Kırmızı (TR), floresein izotiyosiyanat (FITC) SpectrumGreen (Vysis), SpectrumOrange (Vysis), SpectrumAqua, TR-avidin ile tespit biotinlenmiş probları, FITC avidin, ya da Cy-5 streptavidin (bir FarRed filtre kullanılarak görüntülendi), sarı renkli bir sinyal üretmek için, bir melezleşme ikinci) TexasRed ve SpectrumGold filtre kullanarak SpectrumOrange sıralı yakalama tarafından oluşturulan yuvarlak ve üçüncü bir renk, kırmızı ve yeşil probları bir karışımı. , X ve Y kromozomları ve autosome bir sentromer bölgeler için özel üç probları, içeren bir prob seti, cinsiyet tayini (14) için tavsiye edilir; otozomal prob (2n, 47, trizomi X ayırt ploidi ve böylece kurmak için kullanılır XXX) ve triploidi (3n, 69, XXX) ve tetrazomi X (48, XXXX) ve tetraploidy (4n, 92, XXXX) arasında. Bu prob seti, çok düşük polimorfizm oranı olduğu gösterilmiştir ve bu nedenle tedavi öncesi çalışma üreme ortakları; tipik bir prob seti bu ayarı uygulanan alfa-uydu, X, Y ve 18 içeren Abbott AneuVysion karışımı (14) gerekli değildir. Herhangi bir özel düzenlenmesi için prob karışımı gerekir: İdeal olarak, kromozom dengesizlik ile düzenlenmesi beklenen tüm ürünleri tespit etmek için en azından yeterli probları içerir. Bu mümkün değilse, prob tanınabilir bir gebelik cansız undetected dengesiz ürünler değerlendirilecek ve çok düşük prevalansı (14) kabul edilebilir olması muhtemel olduğu karıştırır. Hem de üreme ortaklarından kültürlü lenfosit metafaz üzerinde test edilecek. En az on metafaz yayılır prob özgüllük, polimorfizmleri ve çapraz hibridizasyon probları olarak yeniden düzenlenmesi farklı kesimleri bekleniyor melezleşme sağlamak için incelenir ve kromozom taşıyıcı için, olmalıdır. Buna ek olarak, bu hazırlıkların en az 100 interfaz çekirdekleri sinyal özgüllük, parlaklık ve Bağımsızlık (14) değerlendirmek için atılır gerekir. Commercial PGS prob setleri mevcuttur (örneğin Abbott MultiVysion PB veya PGT), en sık anlayışının ürünleri anöploidi olarak bulundu kromozom hedefleme ve tek başına bir hedef kromozom prob oluşan. Genellikle çekirdeğin kromozom 13, 15, 16, 18, 21, 22, ve XY (14) için bir test sağlayan ek kromozomlar için ikinci bir hibridizasyon probları ile olabilir. Yayılması ve burada açıklanan FISH tekniği kullanarak bu testin prediktif değeri çoğu kişinin elinde kabul edilemeyecek kadar düşük olması muhtemeldir ve bu, rutin klinik kullanım (7, 15) için tavsiye edilmez. Gibi tek hücrelere uygulanan karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (CGH) gibi teknikler (2001. Wilton ve ark) her kromozom kopya sayısı için test edebilmek ve tek nükleotid polimorfizmleri (SNP) diziler ve kantitatif analiz (Wells ve ark. 2008) ya da &quot;karyomapping&quot; genotipleme (Handyside ve ark 2009) kromozom anöploidi tespit etmek için alternatif teknikler umut vericidir . Ancak, segmenti dengesizlik için çözünürlük sınırı ve doğruluğu belirsiz ve FISH tekniği küçük segmentleri içeren kromozom düzenlerinde tercih olmaya devam edecektir muhtemeldir.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Hydrochloric Acid, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>101254H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>443827W</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Chloride, 250g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>26764.232</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>102494C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10203 4B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Hydroxide Pellets, 500g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>28245.265</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween20, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>663684B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, 2.5L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>8.18760.2500</td>
<td>Duty Paid</td>
</tr>
<tr>
<td>Tri-Sodium Citrate, 5Kg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>27833.363</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cow Gum, 250mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cow Proofings Ltd.</td>
<td>No longer available</td>
<td>Old stocks can still be found in art shops</td>
</tr>
<tr>
<td>DAPI/Antifade ES, 0.125&mu;g/mL, 500ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cytocell</td>
<td>DES500L</td>
<td>150&mu;l vial rec&#x2019;d with each Cytocell TEL Probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Nail Varnish, 12mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boots</td>
<td>10088316001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amine-coated Slides, 25</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetix</td>
<td>K2615</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAPI, 0.1mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>D-9542</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, 10mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Texas-Red-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITC-avidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>A-2011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy-5 Streptavidin, 0.001mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>PA45001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-175-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-MCT-060-C-CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30ml Universal Containers, box of 400</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilin</td>
<td>128B</td>
<td>Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053</td>
</tr>
<tr>
<td>Hot Block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR VWR VWR</td>
<td>451-0107 451-3112 451-3111</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plugged Glass Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>PMK-300-052R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wild Heerbrugg</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissues, 100boxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal Culture Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic Melamine Trays</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>682-009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oven</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette Mouthpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>HAE3700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Filter, 0.2&mu;m pore size, 25mm diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FDM-340-010U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>818-0021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Block for Slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Hybaid</td>
<td>HBOSBB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Roll</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS SUPPLY CHAIN</td>
<td>MJT004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Schieferdecker Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9313</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>631-9331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Fine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2123</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps, Blunt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>232-2113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1000mL Beaker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>213-1642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Contrast Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>E200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibre-free Blotting Cards, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific (Raymond Lamb)</td>
<td>SDE1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>MIC3206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Syringe, box of 100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NHS Supply Chain</td>
<td>FWC045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pipette Tip, 10racks of 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thistle Scientific</td>
<td>AX-T-1000-C-L-R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>LEEC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Waterbath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant</td>
<td>W22</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol Thermometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various sources available</td>
</tr>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jenway</td>
<td>3305</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>662-1759</td>
<td>BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305</td>
</tr>
<tr>
<td>Heated Stirrer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bibby</td>
<td>HC502</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL Pasteur Pipettes, box of 500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
<td>PIP4202</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm, 50mm x 75m</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>291-1214</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fish for pre-implantation genetic diagnosis

Pre-implantasyon genetik tanı (PGD), doğum öncesi tanı için kurulmuş bir alternatif ve Yardımla üreme teknolojileri (ART) tarafından oluşturulan bir kohort pre-implantasyon embriyoların seçiminde içerir. Bu seçim, çünkü ailevi monogenik hastalığı (örneğin, kistik fibrozis), veya bir ortak bir kromozom taşır, çünkü (örneğin iki yönlü karşılıklı translokasyon) olabilir. PGT kromozom düzenlerinde, tekrarlayan düşükler, kısırlık durumunda önceki etkilenen çocuklar ve / veya çiftler için kullanılabilir. Oosit aşağıdaki over stimülasyonu semen (IVF), in vitro daldırma veya intrasitoplazmik enjeksiyonu (ICSI) bireysel bir spermatozoa tarafından döllenir aspire. Pre-implantasyon bölünme-dönem embriyoların genellikle 3. gün sonrası döllenme tek bir hücrenin kaldırılması suretiyle, biyopsi, biyopsi hücre, embriyonun genetik durum kurmak için test edilir. Floresan in situ hibridizasyon (FISH) sabit hedef spesifik DNA probları ile biyopsi hücrelerinin çekirdekleri X&#39;e bağlı bir hastalık olduğu kromozom düzenlerinde ile ilişkili kromozom dengesizliği tespit etmek ve aile içinde kadın embriyolar seçmek için tercih edilen bir tekniktir mutasyon-özel test. BALIK Yardımla üreme etkinliğini denemek ve geliştirmek amacıyla da spontan kromozom anöploidi (PGS veya PGD-AS olarak bilinen) için ekran embriyolar kullanılır olmuştur, ancak, yayma ve FISH tekniği kullanarak bu testin prediktif değeri burada açıklanan çoğu kişinin elinde kabul edilemeyecek kadar düşük olması muhtemeldir ve bu rutin klinik kullanım için tavsiye edilmez. Biz tek hücreli FISH, blastomer çekirdeklerinin yayılmasını teknikleri, in situ hibridizasyon ve klinik bir ortamda PGT uygulanan sinyal puanlama için uygun probların seçim açıklar.

Watch this Scientific Journal Video about FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis at JoVE.com

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Bu makale, tek hücreli FISH, blastomer çekirdeklerinin yayılmasını teknikleri, in situ hibridizasyon ve klinik bir ortamda pre-implantasyon genetik tanı (PGD) uygulanan sinyal puanlama için uygun probların seçim açıklamaktadır.

Pre-implantasyon Genetik Tanı için FISH

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

fish-for-pre-implantation-genetic-diagnosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Tıp

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

Reeves'in Muntjac Geyisinde Gebelik Tanısı için Transabdominal Ultrason

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

teşhisi<em&gt; Musculus Gastrocnemius</em&gt; Sızdırmazlık - Klinik Sınav Anahtar Faktörler

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

Hydra, kardiyovasküler analiz ve tanı klinisyenler yardım için bir bilgisayar tabanlı Platform

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

Uluslararası Uzman Konsensus ve Neonatal Pnömotoraks Ultrason Tanısı ve Ultrason Eşliğinde Torasentez Önerileri

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

İnsan Brucellar Spondilodistis Tanı ve Cerrahi Tedavisi

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

Koroner Vazomotor Bozuklukların İnvaziv Tanısı için Asetilkolin ve Adenozin Testi

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

Koroner mikrovasküler spazm tanısı için miyokardiyal laktat üretiminin ölçülmesi

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and specific IgE (sIgE) determination in the evaluation of IgE-mediated allergic reactions to food, insect venom, drugs, as well as some forms of chronic urticaria. However, the role of this technique in the diagnostic algorithms is highly variable and not well determined.
BAT is based on the determination of basophil response to allergen/drug cross-linking IgE activation through the measurement of activation markers (such as CD63, CD203c) by flow cytometry. This test can be a useful and complementary tool to avoid controlled challenge tests&#160;to confirm allergy diagnosis, especially in subjects experiencing severe life-threatening reactions. In general, the performance of BAT should be considered if i) the allergen/drug produces false positive results in ST; ii) there is no allergen/drug source to use for ST or sIgE determination; iii) there is discordance between patient history and ST or sIgE determination; iv) symptoms suggest that ST may result in systemic response; v) before considering a CCT to confirm the culprit allergen/drug. The main limitations of the test are related to non-optimal sensitivity, especially in drug allergy, the need to perform the test no longer than 24 h after sample extraction, and the lack of standardization between laboratories in terms of procedures, concentrations, and cell markers.

The basophil activation test is a complementary in vitro diagnostic test for the evaluation of IgE-mediated allergic reactions based on the detection of basophil activation in the presence of a specific stimulus through the measure of activation markers by flow cytometry.

Alerji Tanısı için Bazofil Aktivasyon Testi

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...