Name: time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain
Uploaded: 2011-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par theNIH grantNS042626. Nous remercions Thorn Kurt et UCSF Nikon Imaging Centre d&#39;aide à l&#39;imagerie.

1. Préparation des embryons de poissons zèbres <ol><li> Deux jours avant l&#39;électroporation, mis en place des cages d&#39;accouplement des poissons de type sauvage en utilisant des diviseurs d&#39;hommes séparés des femelles. </li><li> Un jour avant l&#39;électroporation, tirez les diviseurs de l&#39;accouplement des cages de la journée précédente. </li><li> Recueillir des embryons et incuber 50 embryons fécondés in 30 ml de milieu contenant embryonnaire phénylthiourée 0,003% (PTU) à 28,5 ° C. </li><...

<ol>
	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414, 112-117 (2001).</li><li>G#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis.">The cell biology of neurogenesis.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).</li><li>Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+DNA,+RNA,+and+morpholinos+into+zebrafish+embryos.">Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos.</a> Methods. 39, 207-211 (2006).</li><li>Hendricks, M., Jesuthasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation-based+methods+for+in+vivo,+whole+mount+and+primary+culture+analysis+of+zebrafish+brain+development.">Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development.</a> Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).</li><li>Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+electroporation+in+zebrafish+embryos+and+larvae.">Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae.</a> Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).</li><li>Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+gene+transfer+into+adult+fish:+a+new+tool+to+study+fin+regeneration.">High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration.</a> Genesis. 32, 27-31 (2002).</li></ol>

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour imagerie time-lapse en direct de cellules progénitrices neurales au niveau clonal dans le prosencéphale poisson zèbre en développement. Nous avons testé et modifié les protocoles existants électroporation 4-6 pour génétiquement et par fluorescence étiquette individuelle des cellules progénitrices neurales. Un arbre lignée composée de cellules par clonage progéniture connexes peuvent être mis en place depuis seulement quelques cellules ont é...

time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain

Schémas précis de la division, la migration et la différenciation des cellules progénitrices neurales sont cruciales pour le développement du cerveau et 1,2 fonction. Pour comprendre le comportement des cellules progénitrices neurales dans le complexe dans un environnement in vivo, imagerie time-lapse en direct de cellules progénitrices neurales dans un cerveau intact est absolument nécessaire. Dans cette vidéo, nous exploitons les caractéristiques uniques des embryons de poisson zèbre pour visualiser le développement des cellules progénitrices neurales du cerveau antérieur in vivo. Nous utilisons d&#39;électroporation génétiquement et peu d&#39;étiquettes individuelles cellules progénitrices neurales. En bref, des constructions d&#39;ADN codant pour des marqueurs fluorescents ont été injectées dans le ventricule du cerveau antérieur de 22 heures après fécondation (HPF) et les embryons de poissons zèbres impulsions électriques ont été livrés immédiatement. Six heures plus tard, les embryons de poissons zèbres électroporées ont été montés avec bas point de fusion de verre dans des plats d&#39;agarose culture sur le fond. Marqués par fluorescence des cellules progénitrices neurales ont ensuite été imagés pour les 36 heures avec des intervalles fixes sous un microscope confocal à l&#39;aide d&#39;eau plongeant objectif. La méthode actuelle fournit un moyen d&#39;avoir un aperçu dans le développement in vivo des cellules progénitrices neurales du cerveau antérieur et peut être appliquée à d&#39;autres parties du système nerveux central de l&#39;embryon de poisson zèbre.

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Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

La vidéo montre le présent une méthode qui prend avantage de la combinaison de l&#39;électroporation et la microscopie confocale pour l&#39;imagerie en direct sur chaque cellules progénitrices neurales dans le cerveau antérieur poisson zèbre en développement.<em&gt; In vivo</em&gt; L&#39;analyse du développement des cellules progénitrices neurales du cerveau antérieur à un niveau clonal peut être réalisé de cette façon.

Imagerie time-lapse en direct de relation clonale cellules progénitrices neurales dans le cerveau antérieur développement Zebrafish

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Imagerie des cellules vivantes des cellules sensorielles de précurseurs d&#39;organes en Intact Drosophile Les chrysalides

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Recherche

Neurosciences

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

Imagerie à haute résolution en direct du comportement des cellules dans le développement neuro-épithélium

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

Imagerie time-lapse de la migration des neuroblastes en tranches aiguës du cerveau antérieur souris adultes

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Prosencéphale enregistrement électrophysiologique des larves dans le poisson-zèbre

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

Moteur section du nerf et imagerie time-lapse de comportements de cellules gliales chez le poisson zèbre en direct

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo postnatale électroporation et imagerie time-lapse de neuroblaste migrations dans Souris aiguë tranches du cerveau

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

Évaluation de la progression du cycle cellulaire des cellules souches neurales et progénitrices dans le développement du cerveau de souris après un stress génotoxique

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Imagerie en direct de la mitose dans les développement Cortex souris embryonnaires

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

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Dérivation sans chargeur-de cellules progénitrices de la crête neurale souches pluripotentes humaines cellules

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Tri cellulaire des neurones cellules souches et progénitrices de la souris adulte-ventriculaire Zone et Live-imagerie de la dynamique de leur cycle cellulaire

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...