Name: time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain
Uploaded: 2011-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von theNIH grantNS042626 unterstützt. Wir danken Kurt Thorn und UCSF Nikon Imaging Center für die Unterstützung bei Bildgebung.

1. Vorbereitung des Zebrafisch-Embryos <ol><li> Zwei Tage vor der Elektroporation eingerichtet Paarung Käfigen von Wildtyp-Fisch mit Trennwänden zu trennen Männchen von Weibchen. </li><li> Einen Tag vor der Elektroporation, ziehen Sie den Teilern in Paarung Käfigen vom Vortag. </li><li> Sammeln Embryonen und inkubieren 50 befruchteten Embryonen in 30 ml embryonalen Medium mit 0,003% Phenylthioharnstoff (PTU) bei 28,5 ° C. </li><li> Am Tag der Elektroporation, dechorionate die Embryonen von Hand mit feinen Pinzett...

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	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414, 112-117 (2001).</li><li>G#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis.">The cell biology of neurogenesis.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).</li><li>Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+DNA,+RNA,+and+morpholinos+into+zebrafish+embryos.">Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos.</a> Methods. 39, 207-211 (2006).</li><li>Hendricks, M., Jesuthasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation-based+methods+for+in+vivo,+whole+mount+and+primary+culture+analysis+of+zebrafish+brain+development.">Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development.</a> Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).</li><li>Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+electroporation+in+zebrafish+embryos+and+larvae.">Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae.</a> Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).</li><li>Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+gene+transfer+into+adult+fish:+a+new+tool+to+study+fin+regeneration.">High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration.</a> Genesis. 32, 27-31 (2002).</li></ol>

In diesem Video zeigen wir eine Methode zur Zeitraffer-Live-Darstellung von neuralen Vorläuferzellen in einem klonalen Ebene in den Entwicklungsländern Zebrafisch Vorderhirn. Wir testeten und modifiziert das bestehende Elektroporation Protokolle 4-6, um genetisch und Fluoreszenz-Label einzelnen neuronalen Vorläuferzellen. Eine Linie Baum klonal verbundenen Nachkommen Zellen zusammengesetzt ist etabliert, da nur wenige Zellen waren spärlich mit einer relativ geringen Spannung von Elektroporation gekennzeic...

time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain

Präzise Muster der Teilung, Migration und Differenzierung neuronaler Vorläuferzellen sind entscheidend für die richtige Entwicklung des Gehirns und die Funktion 1,2. Um zu verstehen, das Verhalten des neuronalen Vorläuferzellen in der komplexen in vivo-Umgebung ist Zeitraffer-Live-Darstellung von neuralen Vorläuferzellen in einem intakten Gehirn kritisch erforderlich. In diesem Video, nutzen wir die einzigartigen Eigenschaften von Zebrafisch-Embryonen zur Entwicklung des Vorderhirns neuralen Vorläuferzellen in vivo sichtbar zu machen. Wir verwenden Elektroporation, genetisch und dünn Label einzelnen neuronalen Vorläuferzellen. Kurz gesagt, Konstrukte kodierenden DNA Fluoreszenzmarker wurden in das Vorderhirn Ventrikel von 22 Stunden nach der Befruchtung (HPF) Zebrafischembryonen und elektrische Impulse wurden sofort injiziert. Sechs Stunden später wurden die Elektroporation Zebrafischembryonen mit niedrigem Schmelzpunkt Agarose in Glasboden Kulturschalen montiert. Fluoreszenzmarkierten neuralen Vorläuferzellen wurden dann für 36 Stunden mit festen Abständen unter einem konfokalen Mikroskop mit Wasser getaucht Objektiv abgebildet. Das vorliegende Verfahren bietet eine Möglichkeit, Einblicke in die in vivo Entwicklung von Vorderhirn neuralen Vorläuferzellen zu gewinnen und kann auch auf andere Teile des zentralen Nervensystems des Zebrafisch-Embryos angewendet werden.

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Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Die vorliegende Video zeigt eine Methode, die nutzt die Kombination von Elektroporation und konfokale Mikroskopie, um Live-Aufnahmen zu den einzelnen neuronalen Vorläuferzellen im sich entwickelnden Zebrafisch Vorderhirn führen.<em&gt; In-vivo-</em&gt; Analyse der Entwicklung des Vorderhirns neuralen Vorläuferzellen in einem klonalen Ebene kann auf diese Weise erreicht werden.

Zeitraffer-Live-Imaging von klonal verbundenen neuronalen Vorläuferzellen in der Entwicklung von Zebrafisch Vorderhirnneuronen

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Forschung

Neurowissenschaften

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

Hochauflösende Live-Bildgebung von Zell-Verhalten in der Entwicklung von Neuroepithel

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

Zeitraffer-Imaging von Neuroblast Migration in Acute Scheiben von der adulten Maus Vorderhirnneuronen

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Vorderhirn Elektrophysiologische Aufzeichnung im Larven Zebrafisch

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

Motor Nervendurchtrennung und Zeitraffer-Imaging von Gliazellen Verhalten im Live Zebrafisch

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In-vivo-Elektroporation und Postnatale Zeitraffer-Imaging Neuroblast von Migration in Maus Akute Hirnschnitten

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

Beurteilung der Zellzyklus-Progression of Neural Stem-und Vorläuferzellen im sich entwickelnden Gehirn Maus nach genotoxischen Stress

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Live-Imaging der Mitose in der Entwicklung von embryonalen Maus-Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder freie Ableitung von Neural Crest Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Zellsortierung von Neural Stamm- und Vorläuferzellen aus dem erwachsenen Maus Subventrikularzone und Live-Bildgebung ihrer Zellzyklus Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...