Name: time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain
Uploaded: 2011-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

이 작품은 theNIH grantNS042626에 의해 지원되었다. 우리는 커트 손 및 이미징과 함께 도움을 UCSF 니콘 이미징 센터를 주셔서 감사합니다.

1. Zebrafish 태아의 준비 <ol><li> 이틀 electroporation 전에, 여성에서 남성으로 별도의 디바이더를 사용하여 야생 유형 물고기의 교배 새장을 설정합니다. </li><li> electroporation 전 어느 날, 전날의 새장을 짝짓기에 디바이더를 가져옵니다. </li><li> 배아를 수집하고 28.5에서 0.003 %의 phenylthiourea (PTU)를 포함하는 30 ML 배아 중간 ° C. 50 수정된 배아를 품어 </li><li> electroporation의 날, dechorionate 수동으로 배아는 2...

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	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414, 112-117 (2001).</li><li>G#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis.">The cell biology of neurogenesis.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).</li><li>Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+DNA,+RNA,+and+morpholinos+into+zebrafish+embryos.">Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos.</a> Methods. 39, 207-211 (2006).</li><li>Hendricks, M., Jesuthasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation-based+methods+for+in+vivo,+whole+mount+and+primary+culture+analysis+of+zebrafish+brain+development.">Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development.</a> Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).</li><li>Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+electroporation+in+zebrafish+embryos+and+larvae.">Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae.</a> Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).</li><li>Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+gene+transfer+into+adult+fish:+a+new+tool+to+study+fin+regeneration.">High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration.</a> Genesis. 32, 27-31 (2002).</li></ol>

이 비디오에서는, 우리는 개발 zebrafish의 forebrain에서 clonal 수준에서 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상에 대한 방법을 보여줍니다. 우리는 유전자와 찬란 라벨 개별 신경 전구 세포에 테스트 기존의 electroporation 프로토콜에게 4-6을 수정했습니다. 단 몇 세포가 띄엄띄엄 electroporation의 상대적인 낮은 전압으로 표시 이후 clonally 관련 자손 세포로 구성된 혈통의 나무가 설정할 수 있습?...

time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain

분할, 마이 그 레이션 및 신경 전구 세포의 분화의 정확한 패턴을 적절한 두뇌 개발과 기능 1,2에 중요한 있습니다. 생체내 환경에서 복잡한에서 신경 전구 세포의 동작을 이해하기 위해서는 두뇌에 손상 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상이 매우 필요합니다. 이 비디오에서는, 우리는 생체내에 forebrain 신경 전구 세포의 발전을 시각화하는 zebrafish 배아의 고유한 기능을 이용. 우리는 유전자 및 띄엄띄엄 라벨 개별 신경 전구 세포에 electroporation을 사용합니다. 간단히, DNA가 형광 표식에 대한 코딩 구조 22 시간 게시물 수정 (HPF) zebrafish 배아의 전기 펄스가 즉시 배달되었고,의 forebrain의 뇌실로 주입했다. 여섯 시간 후, electroporated zebrafish의 배아는 유리 바닥 문화 요리 낮은 용융 점 아가로 오스와 함께 장착했다. 찬란 표시 신경 전구 세포는 다음 물 수영 객관적인 렌즈를 사용하여 공촛점 현미경 고정 간격 36시간 위해 몇 군데 있었다. 현재의 방법은 forebrain 신경 전구 세포의 생체내 개발에 대한 통찰력을 얻을 수있는 방법을 제공하고 zebrafish 배아의 중추 신경 시스템의 다른 부분에 적용할 수 있습니다.

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Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

현재 비디오는 개발 zebrafish의 forebrain에서 개별 신경 전구 세포에 대한 라이브 영상을 수행할 수 electroporation과 공촛점 현미경의 조합을 활용하는 방법을 보여줍니다.<em&gt; 생체내에서</emclonal 수준 forebrain 신경 전구 세포의 개발&gt; 분석이 방법으로 얻을 수 있습니다.

개발 Zebrafish Forebrain에 Clonally 관련 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

손상의 감각 오르간 전구체 세포 라이브 셀 이미징 Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

연구

신경과학

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

개발 Neuroepithelium의 세포 문제의 고해상도 라이브 영상

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

성인 마우스 Forebrain의 급성 슬라이스에 Neuroblast 마이그레이션의 시간 경과 영상

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

모터 신경 절개와 라이브 제브라 피쉬의 아교 세포 행동의 시간 경과 영상

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

마우스 급성 뇌 조각의 Neuroblast 마이그레이션의 생체 내 출생 일렉트로 및 시간 경과 영상

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

유전자 독성 스트레스 후 신경 줄기 및 마우스 두뇌 개발의 전구 세포의 사정 세포주기의 진행 상황

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

개발 마우스 배아의 피질 유사 분열의 라이브 영상

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

인간 다 능성에서 신경 능선 세포의 전구 세포의 공급이없는 유도는 줄기 세포

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

셀 성인 마우스 뇌실 영역에서 신경 줄기 및 전구 세포의 정렬과 세포주기 역학의 라이브 이미징

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...