Name: time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain
Uploaded: 2011-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por theNIH grantNS042626. Damos las gracias a Thorn Kurt y UCSF Nikon Imaging centro de asistencia con las imágenes.

1. Preparación de los embriones de pez cebra <ol><li> Dos días antes de la electroporación, creado jaulas de apareamiento de los peces de tipo salvaje con divisores para separar los machos de las hembras. </li><li> Un día antes de la electroporación, tire de los separadores en el apareamiento de las jaulas del día anterior. </li><li> Recoger los embriones e incubar 50 embriones fecundados en el medio de 30 ml que contienen embriones 0,003% feniltiourea (PTU) a 28,5 ° C. </li><li> En el día de la electroporaci?...

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	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414, 112-117 (2001).</li><li>G#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis.">The cell biology of neurogenesis.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).</li><li>Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+DNA,+RNA,+and+morpholinos+into+zebrafish+embryos.">Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos.</a> Methods. 39, 207-211 (2006).</li><li>Hendricks, M., Jesuthasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation-based+methods+for+in+vivo,+whole+mount+and+primary+culture+analysis+of+zebrafish+brain+development.">Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development.</a> Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).</li><li>Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+electroporation+in+zebrafish+embryos+and+larvae.">Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae.</a> Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).</li><li>Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+gene+transfer+into+adult+fish:+a+new+tool+to+study+fin+regeneration.">High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration.</a> Genesis. 32, 27-31 (2002).</li></ol>

En este vídeo, se demuestra un método para time-lapse en vivo de células progenitoras neurales a nivel clonal en el cerebro anterior pez cebra en desarrollo. Hemos probado y modificar los protocolos existentes electroporación 4-6 a genética y fluorescencia etiqueta individual células progenitoras neurales. Un árbol genealógico compuesto de células de la progenie clonal relación se puede establecer, ya que sólo unas pocas células se marcaron con un poco de tensión relativamente baja de la electrop...

time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain

Patrones precisos de la división, migración y diferenciación de las células progenitoras neuronales son cruciales para el desarrollo apropiado del cerebro y 1,2 función. Para entender el comportamiento de las células progenitoras neurales en el complejo en un entorno vivo, time-lapse de imágenes en vivo de las células progenitoras neuronales en un cerebro intacto es críticamente necesario. En este video, explotar las características únicas de embriones de pez cebra para visualizar el desarrollo de las células progenitoras neurales del cerebro anterior en vivo. Usamos la electroporación de genética y escasamente etiqueta individual células progenitoras neurales. En pocas palabras, construcciones de ADN que codifican para los marcadores fluorescentes se inyecta en el ventrículo del cerebro anterior de 22 horas después de la fecundación (HPF) embriones de pez cebra y pulsos eléctricos fueron entregados inmediatamente. Seis horas más tarde, los embriones de pez cebra electroporación fueron montadas con bajo punto de fusión de agarosa en placas de cultivo de fondo de cristal. Marcado con fluorescencia células progenitoras neurales fueron estudiados luego de 36 horas con intervalos fijos con un microscopio confocal con agua sumergiendo la lente objetivo. El presente método proporciona una forma para obtener información sobre el desarrollo en vivo de las células progenitoras neurales del cerebro anterior y se puede aplicar a otras partes del sistema nervioso central del embrión de pez cebra.

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Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

El vídeo de la actualidad muestra un método que aprovecha las ventajas de la combinación de electroporación y la microscopía confocal para realizar las imágenes en vivo en cada células progenitoras neurales en el cerebro anterior pez cebra en desarrollo.<em&gt; En vivo</em&gt; El análisis del desarrollo de las células progenitoras neurales del cerebro anterior a nivel clonal se puede lograr de esta manera.

Time-lapse de imágenes en vivo de la relación clonal con células progenitoras neurales en el cerebro anterior El desarrollo de pez cebra

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Células vivas imágenes de células de los órganos sensoriales Precursor en Intacto Drosophila Las pupas

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Investigación

Neurociencias

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

Imágenes de alta resolución en vivo del comportamiento de las células en el desarrollo de neuroepitelio

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

Time-lapse de imágenes de Migración neuroblasto en rodajas agudas del cerebro anterior ratón adulto

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Prosencéfalo electrofisiológico de grabación en larvas de pez cebra

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

Motor transección del nervio y Time-lapse de imágenes de Conductas de células gliales en el pez cebra en vivo

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal electroporación y time-lapse de Neuroblast Migración en rodajas de cerebro de ratón aguda

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

La evaluación de la progresión del ciclo celular de la madre neurales y células progenitoras en el cerebro en desarrollo del ratón después de estrés genotóxico

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Imágenes en vivo de la mitosis en el desarrollo de la corteza de embriones de ratón

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Derivación-Feeder libres de Células Progenitoras de la cresta neural Pluripotentes Células Madre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Clasificación celular del Neuronales madre y progenitoras Las células del adulto Ratón zona subventricular y Live-imágenes de sus Dinámica del Ciclo Celular

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...