Name: time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain
Uploaded: 2011-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

Detta arbete stöddes av theNIH grantNS042626. Vi tackar Kurt Thorn och UCSF Nikon Imaging centrum för hjälp med bildbehandling.

1. Beredning av Zebrafish embryon <ol><li> Två dagar innan elektroporation, inrätta parning burar av vild typ fiskar med avdelare för att skilja hanar från honor. </li><li> En dag innan elektroporation, dra avdelare i parningen burar från föregående dag. </li><li> Samla embryon och inkubera 50 befruktade embryon i 30 ml embryonala medium som innehåller 0,003% phenylthiourea (PTU) vid 28,5 ° C. </li><li> På dagen av elektroporation, dechorionate embryona manuellt med fin pincett (Inox 5, Dumont Electronic, Sc...

<ol>
	<li>Temple, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+neural+stem+cells.">The development of neural stem cells.</a> Nature. 414, 112-117 (2001).</li><li>G#246;tz, M., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+neurogenesis.">The cell biology of neurogenesis.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 777-788 (2005).</li><li>Cerda, G. A., Thomas, J. E., Allende, M. L., Karlstrom, R. O., Palma, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+DNA,+RNA,+and+morpholinos+into+zebrafish+embryos.">Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos.</a> Methods. 39, 207-211 (2006).</li><li>Hendricks, M., Jesuthasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation-based+methods+for+in+vivo,+whole+mount+and+primary+culture+analysis+of+zebrafish+brain+development.">Electroporation-based methods for in vivo, whole mount and primary culture analysis of zebrafish brain development.</a> Neural. Dev. 2, 6-6 (2007).</li><li>Tawk, M., Bianco, I. H., Clarke, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+electroporation+in+zebrafish+embryos+and+larvae.">Focal electroporation in zebrafish embryos and larvae.</a> Methods Mol. Biol. 546, 145-151 (2009).</li><li>Tawk, M., Tuil, D., Torrente, Y., Vriz, S., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+gene+transfer+into+adult+fish:+a+new+tool+to+study+fin+regeneration.">High-efficiency gene transfer into adult fish: a new tool to study fin regeneration.</a> Genesis. 32, 27-31 (2002).</li></ol>

I denna video visar vi en metod för tidsförlopp leva avbildning av neurala stamceller till en klonal nivå i utvecklingsländerna zebrafisk framhjärnan. Vi testade och ändrade den befintliga elektroporation protokollen 4-6 till genetiskt och fluorescerande etikett enskilda neurala stamceller. En härstamning träd består av kloner relaterade avkomma celler kan fastställas eftersom endast ett fåtal celler var glest märkt med en relativt låg spänning på elektroporation. Förutom EGFP kan neurala stam...

time-lapse live imaging of clonally related neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain

Exakt mönster av splittring, migration och differentiering av neurala stamceller är avgörande för korrekt hjärnans utveckling och funktion 1,2. För att förstå beteendet hos neurala stamceller i komplex in vivo miljö är tidsförlopp leva avbildning av neurala stamceller i en intakt hjärna kritiskt krävs. I denna video, utnyttja vi de unika egenskaperna hos zebrafisk embryon för att visualisera utvecklingen av framhjärnan neurala stamceller in vivo. Vi använder elektroporation till genetiskt och glest etikett enskilda neurala stamceller. Kortfattat bygger DNA som kodar för fluorescerande markörer var injiceras i framhjärnan kammare 22 timmar efter befruktning (HPF) zebrafisk embryon och elektriska pulser levererades omedelbart. Sex timmar senare var electroporated zebrafisk embryon monteras med låg smältpunkt agaros i glas rätter botten kultur. Fluorescerande neurala stamceller har sedan avbildade för 36hours med jämna mellanrum under ett konfokalmikroskop med vatten att doppa objektiv. Denna metod ger ett sätt att få insikt i in vivo utvecklingen av framhjärnan neurala stamceller och kan tillämpas på andra delar av centrala nervsystemet i zebrafisk embryot.

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain at JoVE.com

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Den nuvarande videon demonstrerar en metod som drar nytta av kombinationen av elektroporation och konfokalmikroskopi att utföra Bildproduktion på enskilda neurala stamceller i utvecklingsländerna zebrafisk framhjärnan.<em&gt; In vivo</em&gt; Analys av utvecklingen av framhjärnan neurala stamceller till en klonal nivå kan uppnås på detta sätt.

Time-lapse Live avbildning av kloner som är närbesläktade neurala stamceller i utvecklingsländerna Zebrafish framhjärnan

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging av sensoriska celler orgel Precursor i intakt Drosophila Puppor

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

Högupplöst Live avbildning av cellens beteende i utvecklingsländerna neuroepitelet

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

Time-lapse avbildning av Neuroblast Migration i akuta skivor av vuxen mus framhjärnan

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Framhjärna Elektrofysiologiska inspelning i larver Zebrafish

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

Motorisk nerv transection och Time-lapse avbildning av stödjeceller Beteenden Live Zebrafish

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal elektroporation och Time-lapse avbildning av neuroblast migration i mus Akut hjärnan skivor

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

Uppskatta cellcykelprogression av neurala stam och progenitorceller i musen framkallande hjärnan efter genotoxisk stress

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Live avbildning av Mitos i utvecklings Mouse embryonala Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder fria Härledning av neurallisten progenitorceller från Human pluripotenta stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Cell Sortering av neurala stamceller och progenitorceller från vuxen mus subventrikulära zonen och Live-avbildning av sina cellcykeln Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...