Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Les auteurs tiennent à remercier le Dr Boris Reizis du Département de microbiologie et immunologie à l&#39;Université Columbia pour des discussions utiles. Nous tenons aussi à remercier le Dr Margaret Bynoe, le Dr Rodman Getchell et Deequa Mahamed du Département de microbiologie et immunologie à la faculté de médecine vétérinaire, Université de Cornell pour l&#39;assistance technique avec la cytométrie de flux et Lu Huang de l&#39;aide pour le montage vidéo. Les auteurs souhaitent également remercier les membres de Duhamel et Weiss laboratoires pour leur examen critique de la production de manuscrits et de la vidéo, et Stephanie Yazinski du laboratoire Weiss pour la reproduction et le génotypage p53 - / - souris. Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et règlements établis par l&#39;Université Cornell en soins des animaux et du Comité institutionnel d&#39;utilisation. Cette recherche a été financée en partie par des fonds fournis par le département américain de l&#39;Agriculture, Cooperative State Research, Education, and Extension Service de santé animale, et de recherche pour la maladie (au GED et TSI) et des subventions des NIH R03 HD058220 et R01CA108773 (à RSW). La vidéo a été produite en utilisant des installations internes par le personnel des laboratoires de Duhamel &amp; Weiss.

1. La dissection de la tumeur <ol><li> Pour la dissection tumorale, une serviette en papier propre ou jetable drap chirurgical est placé sur le pavé de dissection et pulvérisé avec de l&#39;éthanol à 70%. </li><li> Souris pour ce protocole sont systématiquement euthanasiés avec du CO 2. Placez la souris euthanasiées sur le pavé de dissection et de pulvérisation des deux côtés de l&#39;animal avec de l&#39;éthanol. La souris est maintenu en place sur le pad de dissection en utilisant quatre ou ...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

Dans ce protocole, nous fournir des procédures détaillées pour établir murin lignées de lymphocytes T à partir de deux génotypes différents de souris; ATM - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] et p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . En utilisant ce protocole, un total de 6 (sur 7 tentatives) ATM - / - et trois (sur 5 tentatives) p53 - / - murins lignées de lymphocytes T ont été établis dans notre...

<ul><li> Seau à glace </li><li> 70% d&#39;éthanol </li><li> Dissection pad composé de bloc de mousse recouvert de papier d&#39;aluminium et des épingles </li><li> Deux séries de petits ciseaux stériles et </li><li> Stérile 150 mm 2 boîte de Petri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA;. # Cat 08-757-13) </li><li> Stérile aiguilles de calibre 18 </li><li> 50 ml tubes coniques (Corning Inc, Corning NY; cat # 430829) </li><li> 10% du formol tamponné </li><li> Flacons de culture tissulaire <ul><li> T-25 (PPT, Trasadingen, Suisse; cat # 90025) </li><li> T-75 (PPT, Trasadingen, Suisse; cat # 90075) </li></ul></li><li> Plaques 6 puits (Corning Inc, Corning NY; cat # 3506) </li><li> Phosphate stérile tamponné pH salines 7,2 (PBS) </li><li> Le milieu de culture <ul><li> RPMI 1640 avec 25 mM HEPES, 200 mM de L-glutamine (Lonza, Walkersville, MD; cat # 12-115F) complémenté avec les éléments suivants: <ul><li> Chaleur de 10% inactivé (56 ° C, 30 min) de sérum de veau fœtal (FBS; Hyclone, Logan, UT; # cat SH30088.03) </li><li> 1% et la pénicilline streptomycine (Mediatech, Manassas, en Virginie, cat # 30-002-CI) </li><li> 1% acides aminés non essentiels (Mediatech; cat # 25-025-CI) </li><li> 55 mM 2β-mercaptoéthanol (Sigma, St Louis, MO, chat # M752) </li></ul></li></ul></li><li> Diméthylsulfoxyde (DMSO; Calbiochem, La Jolla, en Californie, cat # 317275) </li><li> Anticorps (eBioscience, San Diego, CA) <ul><li> anti-CD3-FITC (cat. # 11-0031-85) </li><li> anti-CD4-APC (cat. # 17-0041-83) </li><li> anti-CD8-PE (cat. # 12-081-85) </li></ul></li><li> Albumine sérique bovine (BSA; Life Technologies, Grand Island, NY;. # Cat 11018-017) </li><li> Concanavaline A (chat Sigma # C5275) </li><li> 1,8 flacons de gel ml (Nunc, Roskilde, Danemark; cat # 368632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

Des lignées cellulaires établies sont un outil de recherche critique qui peut réduire l&#39;utilisation des animaux de laboratoire dans la recherche. Certaines souches de souris génétiquement modifiées, telles que ATM - / - et p53 - / - constamment développer un lymphome thymique tôt dans la vie 1,2, et donc, peut servir comme une source fiable pour la dérivation de cellules T murines lignes. Nous présentons ici un protocole détaillé pour le développement des établis murin thymique lymphome à cellules T lignes sans avoir besoin d&#39;ajouter les interleukines comme décrit dans les protocoles antérieurs 1,3. Les tumeurs ont été récoltés à partir des souris âgées de trois à six mois, à la première indication de tumeurs visibles basée sur l&#39;observation d&#39;une posture voûtée, respiration laborieuse, le toilettage pauvres et gaspiller dans une souche sensible 1,4. Nous avons établi avec succès plusieurs lignées de lymphocytes T en utilisant ce protocole et de souches pures de l&#39;ATM - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] 2 et p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 souris. Nous avons également démontré que plus de 90% de la place des cellules T CD3 population exprime, CD4 et CD8. Conformément aux lignées cellulaires établies de façon stable, les cellules T générées par l&#39;utilisation du présent protocole ont été repiquées pendant plus d&#39;un an.

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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Dans cette vidéo, nous démontrons un protocole pour établir la souris des lignées cellulaires de lymphome thymique. En suivant ce protocole, nous avons établi avec succès plusieurs lignées de lymphocytes T de l&#39;ATM-/ - et p53-/ - ont un lymphome thymique.

Dérivation des thymique lymphome à cellules T à partir des lignes Atm - / -</sup Et<emP53> - / -</sup Souris

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Souris Transnuclear avec des spécificités T pré-définis Cell Receptor contre Toxoplasma gondii Obtenues par TNCS

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Recherche

Immunologie et infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transduction rétrovirale des récepteurs de cellules T dans les lymphocytes T de souris

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

L&#39;examen de sélection positive et négative thymique par cytométrie en flux

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation de queue peau d&#39;étudier allogéniques CD4 réponses des cellules T chez la souris

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Dérivation des cellules T<em&gt; In Vitro</em&gt; De la souris les cellules souches embryonnaires

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Souris Naïf CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolement des cellules T et<em&gt; In vitro</em&gt; Différenciation en sous-ensembles de cellules T

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Rétrovirale transduction des cellules progénitrices de la moelle osseuse pour générer des cellules T Receptor Retrogenic Souris

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

Une méthode Simple et efficace pour établir les NK et les lymphocytes T lignes provenant de Patients avec une Infection chronique Active Virus Epstein - Barr

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Évaluation des réponses de cellules T spécifiques du Virus Zika dans les organes Immunoprivileged des Ifnar1 infecté les souris- / -

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

Knock-in de gènes par CRISPR/Cas9 et tri cellulaire dans les lignées de macrophages et de lymphocytes T

Functional genomics studies of the immune system require genetic manipulations that involve both deletion of target genes and addition of elements to ...

Dérivation des thymique lymphome à cellules T à partir des lignes Atm - / - Et - / - Souris

Dérivation des thymique lymphome à cellules T à partir des lignes Atm^{- / - Et^{- / - Souris}}