Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Boris Reizis del Dipartimento di Microbiologia e Immunologia presso la Columbia University per le discussioni utili. Desideriamo inoltre ringraziare il Dr. Margaret Bynoe, il Dr. Rodman Getchell e Deequa Mahamed del Dipartimento di Microbiologia e Immunologia presso il College di Medicina Veterinaria, Cornell University di assistenza tecnica con la citometria a flusso e Huang Lu per l&#39;assistenza con l&#39;editing video. Gli autori desiderano ringraziare i membri del Duhamel e Weiss laboratori per la loro revisione critica del manoscritto e la produzione video, e Stephanie Yazinski dal laboratorio Weiss per l&#39;allevamento e la genotipizzazione p53 - / - topi. Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali Cornell Università Istituzionale e del Comitato Usa. Questa ricerca è stata sostenuta in parte dai fondi messi a disposizione dal Dipartimento dell&#39;Agricoltura degli Stati Uniti, la ricerca sullo stato Cooperativa, Educazione e Extension Service, la salute degli animali e della Ricerca Programma di Disease (a GED e RSW) e le sovvenzioni NIH R03 HD058220 e R01CA108773 (a RSW). Il video è stato prodotto utilizzando strutture in-house dal personale dei laboratori Duhamel &amp; Weiss.

1. Dissezione di tumore <ol><li> Per la dissezione del tumore, un tovagliolo di carta pulito o teli chirurgici monouso viene posto sulla rampa di dissezione e spruzzato con il 70% di etanolo. </li><li> I topi di questo protocollo sono regolarmente eutanasia con CO 2. Eutanasia Posizionare il mouse sul tappetino dissezione e spruzzare su entrambi i lati dell&#39;animale con etanolo. Il mouse è tenuto in posizione sul pad dissezione utilizzando quattro o più push-pin inseriti attraverso le gambe e spruzzato...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

In questo protocollo, forniamo le procedure particolareggiate per stabilire murino linee di cellule T da due genotipi differenti del mouse; Atm - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] e p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . Usando questo protocollo, per un totale di 6 (su 7 tentativi) Atm - / - e tre (su 5 tentativi) p53 - / - murini linee di cellule T sono state istituite nel nostro laboratorio. Dati rappresen...

<ul><li> Secchiello </li><li> Etanolo al 70% </li><li> Dissezione pad composto da blocco di schiuma ricoperto di un foglio di alluminio e perni </li><li> Due serie di piccole forbici e pinze sterili </li><li> Sterile 150 mm 2 piastra di Petri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA;. Cat # 08-757-13) </li><li> Calibro 18 aghi sterili </li><li> 50 ml provette coniche (Corning Inc., Corning NY; cat # 430829) </li><li> Tamponata al 10% formalina </li><li> Tessuto cultura fiaschi <ul><li> T-25 (TPP, Trasadingen, Svizzera; cat # 90025) </li><li> T-75 (TPP, Trasadingen, Svizzera; cat # 90075) </li></ul></li><li> 6 pozzetti (Corning Inc., Corning NY; cat # 3506) </li><li> Fosfato soluzione salina sterile tamponata pH 7,2 (PBS) </li><li> Terreno di coltura <ul><li> RPMI 1640 con 25 HEPES mm, 200 mm L-glutamina (Lonza, Walkersville, MD; gatto # 12-115F), integrato con il seguente: <ul><li> 10% inattivato con il calore (56 ° C, 30 min) di siero fetale bovino (FBS; Hyclone, Logan, UT; cat # SH30088.03) </li><li> 1% di penicillina e streptomicina (Mediatech, Manassas, VA; gatto # 30-002-CI) </li><li> 1% amino acidi essenziali (Mediatech, cat # 25-025-CI) </li><li> 55 mm 2β-mercaptoetanolo (Sigma, St Louis, MO; cat # M752) </li></ul></li></ul></li><li> Dimetil solfossido (DMSO; Calbiochem, La Jolla, CA; cat # 317275) </li><li> Anticorpi (eBioscience, San Diego, CA) <ul><li> anti-CD3-FITC (cat. # 11-0031-85) </li><li> anti-CD4-APC (cat. # 17-0041-83) </li><li> anti-CD8-PE (cat. # 12-081-85) </li></ul></li><li> Albumina di siero bovino (BSA; Life Technologies, Grand Island, NY;. Cat # 11018-017) </li><li> Concanavalina A (gatto # Sigma C5275) </li><li> 1,8 ml fiale congelamento (Nunc, Roskilde, Danimarca; cat # 368632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

Linee cellulari stabilizzate sono uno strumento di ricerca critica che può ridurre l&#39;uso di animali da laboratorio nella ricerca. Alcuni ceppi di topi geneticamente modificati, come Atm - / - e p53 - / - costantemente sviluppare linfoma timico primi anni di vita 1,2, e quindi, può servire come una fonte affidabile per la derivazione di cellule T murino linee. Qui vi presentiamo un protocollo dettagliato per lo sviluppo di linfoma timico stabilito murino linee di cellule T, senza la necessità di aggiungere interleuchine, come descritto in precedenti protocolli 1,3. I tumori sono stati raccolti dai topi di età compresa tra tre a sei mesi, alla prima indicazione di tumori visibili basa sull&#39;osservazione della postura ingobbita, respiro affannoso, governare poveri e sprecare in un 1,4 ceppo sensibile. Abbiamo stabilito con successo diverse linee di cellule T usando questo protocollo e ceppi inbred di Atm - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] 2 e p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 topi. Abbiamo inoltre dimostrato che oltre il 90% della stabilito cellule T popolazione esprime CD3, CD4 e CD8. Coerentemente con le linee cellulari in modo stabile, le T-cellule generate utilizzando il protocollo attuale sono stati diversi passaggi per oltre un anno.

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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

In questo video si dimostra un protocollo per stabilire le linee del mouse linfoma delle cellule del timo. Seguendo questo protocollo, abbiamo stabilito con successo diverse linee di cellule T da Atm-/ - e p53-/ - i topi con linfoma del timo.

Derivazione di timica linfoma a cellule T Linee da Atm - / -</sup E P53 - / -</sup Mouse

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

I topi con Transnuclear predefiniti Specificità cellule T contro il recettore Toxoplasma gondii Ottenuto Via SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Trasduzione retrovirale di recettori delle cellule T nel topo le cellule T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

Esame di Selezione timica positivi e negativi per Citometria a Flusso

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Il trapianto di coda della pelle per studiare allogenico di cellule T CD4 risposte in topi

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivazione di cellule T<em&gt; In Vitro</em&gt; Da cellule staminali embrionali di topo

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento T cellulare e<em&gt; In vitro</em&gt; Differenziazione in T sottopopolazioni cellulari

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Trasduzione retrovirale di cellule progenitrici del midollo osseo per generare cellule T del recettore Retrogenic Mice

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

Un metodo semplice ed efficace per stabilire NK e linee a cellula T da pazienti con infezione attiva cronica del Virus di Epstein - Barr

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Valutazione delle risposte a cellula T Zika Virus-specifici in organi di nuova di Ifnar1 infetti- / - Mice

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

Gene Knock-in di CRISPR/Cas9 e smistamento cellulare in macrofagi e linee cellulari T

Functional genomics studies of the immune system require genetic manipulations that involve both deletion of target genes and addition of elements to ...

Derivazione di timica linfoma a cellule T Linee da Atm - / - E P53 - / - Mouse

Derivazione di timica linfoma a cellule T Linee da Atm^{- / - E P53^{- / - Mouse}}