Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

著者らは、有用な議論をコロンビア大学で微生物学免疫学教室から博士ボリスReizisに感謝したい。我々はまた、フローサイトメトリーおよびビデオ編集の支援のための陸黄との技術援助のために獣医学部の大学、コーネル大学で微生物学免疫学専攻から博士マーガレットバイノー、博士ロッドマンゲッチェルとDeequa Mahamedに感謝したい。 - / -マウス著者らはまた、p53を繁殖し、遺伝子型決定のためにワイス研究所からその重要な原稿や映像制作の見直し、そしてステファニーYazinskiためデュアメルとワイスの研究室のメンバーに感謝したい。動物実験は、コーネル大学動物実験用の委員会が定めるガイドラインおよび規則に従って行った。この研究は米国農務省、協同組合の国家研究、教育、および拡張サービス、動物の健康と疾病の研究プログラム（GEDおよびRSWに）とNIHの助成金R03 HD058220とR01CA108773（RSWまで）で提供される資金によって部分的にサポートされていました。ビデオはデュアメル＆ヴァイス研究所から担当者が社内の設備を用いて作製した。

1。腫瘍の解剖<ol><li>腫瘍切開の場合は、きれいなペーパータオルや使い捨て外科用ドレープは、解剖のパッド上に配置され、70％エタノールを噴霧。 </li><li>このプロトコルのためのマウスは、定期的にCO 2で安楽死されています。解剖パッドで安楽死させたマウスを重ね、エタノールで動物の両面をスプレー。マウスは足を通して挿入し、70％エタノールで十分に噴霧し、4つ以上の?...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

このプロトコルでは、我々は二つの異なるマウスの遺伝子型からマウスT細胞株を樹立するための詳細な手順を提供し、 - / - [FVB/N- 櫃tm1Led / J] と p53 - / -櫃 [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 。 / - -三（5回の試行のうち）p53の- / -このプロトコルは、6の合計（7回のうち）ATMを使って、マウスのT細胞株は、?...

<ul><li>氷のバケット</li><li> 70％エタノール</li><li>アルミ箔と端子で覆われた発泡体のブロックで構成される解剖パッド</li><li>小さな滅菌済みのハサミとピンセットの二組</li><li>無菌150ミリメートル2シャーレ（サーモフィッシャーサイエンティフィック、ウォルサム、マサチューセッツ州、猫＃08-757-13。） </li><li>滅菌18ゲージの針</li><li> 50 mLコニカルチューブ（コーニング社、ニューヨーク州コーニング、猫＃430829） </li><li> 10％緩衝ホルマリン</li><li>組織培養フラスコ<ul><li> T - 25（TPP、Trasadingen、スイス、猫＃90025） </li><li> T - 75（TPP、Trasadingen、スイス、猫＃90075） </li></ul></li><li> 6ウェルプレート（コーニング社、ニューヨーク州コーニング、猫＃3506） </li><li>滅菌リン酸緩衝食塩水pH7.2の（PBS）を</li><li>培地<ul><li> ：以下を補った、25mMのHEPES、200 mMのL -グルタミン（猫＃12 - 115Fロンザ、ウォーカー、MD）を含むRPMI 1640 <ul><li> 10％の熱不活性化（56℃、30分）ウシ胎児血清（FBS; Hyclone、ローガン、ユタ州、猫＃SH30088.03） </li><li> 1％のペニシリンとストレプトマイシン（Mediatech、マナサス、バージニア州、猫＃30 - 002 - CI） </li><li> 1パーセント非必須アミノ酸（Mediatech、猫＃25 - 025 - CI） </li><li> 55 mmの2β-メルカプトエタノール（シグマ、セントルイス、MO、猫＃M752） </li></ul></li></ul></li><li>ジメチルスルホキシド（DMSO、カルビオケム、ラホーヤ、カリフォルニア州、猫＃317275） </li><li>抗体（eBioscience社、サンディエゴ、カリフォルニア州） <ul><li>抗CD3 - FITC（カタログ番号11-0031-85） </li><li>抗CD4 - APC（カタログ番号17-0041-83） </li><li>抗CD8 - PE（カタログ番号12-081-85） </li></ul></li><li>ウシ血清アルブミン（BSA、ライフテクノロジーズ、グランドアイランド、ニューヨーク;猫＃11018〜017） </li><li>コンカナバリンA（Sigmaカタログ＃C5275） </li><li> 1.8mlの凍結バイアル（Nunc社製、Roskilde、デンマーク、猫＃368632） </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

確立された細胞株は、研究に実験動物の使用を減らすことができる重要な研究ツールです。特定のATMのような遺伝子改変マウスの系統、 - / - および p53 - / -は一貫して、人生の早い段階1,2の胸 ​​腺リンパ腫を開発し、その結果、マウスのT細胞株の導出のための信頼できるソースとして利用することができます。ここでは、前述のプロトコール1,3で説明されているインターロイキンを追加することなく、確立されたマウス胸腺リンパ腫のT細胞株の開発のための詳細なプロトコールを提示する。腫瘍が3〜6カ月歳のマウスから採取した、猫背の姿勢の観察に基づいて、目に見える腫瘍の最も初期に通知されたときに、貧しいグルーミングおよび感受性株の1,4の浪費、呼吸をこじつけ。 / - - [FVB/N- 櫃tm1Led / J] 2 と p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5匹のマウス我々は正常にこのプロトコルを使用していくつかのT -細胞株および ATMの近交系を確立している。我々はさらに確立されたT細胞集団の90％以上がCD3、CD4とCD8を発現していることを示しています。安定的に確立された細胞株と一致し、現在のプロトコルを使用して生成されるT細胞は、一年以上継代されています。

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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

このビデオでは、マウス胸腺リンパ腫細胞株を確立するためのプロトコルを示す。およびp53 - / - - 胸腺リンパ腫を有するマウスはこのプロトコルに従うことによって、我々は成功したいくつかのATM - /からT -細胞株を確立している。

から胸腺リンパ腫のT細胞株の導出 ATM - / -</supと p53の - / -</supマウス

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

に対する事前定義されたT細胞受容体の特異性をもつTransnuclearマウストキソプラズマ SCNTを介して取得

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

免疫・感染学

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

マウスT細胞におけるT細胞受容体のレトロウイルス導入

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

フローサイトメトリーによる胸腺正と負の選択の検討

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

マウスにおける同種のCD4 T細胞応答を研究する尾皮膚の移植

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T細胞の導出<em&gt;体外</em&gt;マウス胚性幹細胞からの

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

マウスナイーブCD4<sup&gt; +</sup&gt; T細胞の単離と<em&gt;インビトロ</em&gt; T細胞サブセットへの分化

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

骨髄前駆細胞のレトロウイルス形質導入は、T細胞受容体Retrogenicマウスを生成するために、

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

NK と慢性的なアクティブなエプスタイン ‐ バーウイルス感染症から T 細胞株を確立する効率的かつ簡単な方法

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

ジカ ウイルス特異 Immunoprivileged 臓器感染 Ifnar1-/-マウスの T 細胞応答の評価

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines

CRISPR/Cas9による遺伝子ノックインとマクロファージおよびT細胞株における細胞分類

Functional genomics studies of the immune system require genetic manipulations that involve both deletion of target genes and addition of elements to ...

から胸腺リンパ腫のT細胞株の導出 ATM - / -と p53の - / -マウス

から胸腺リンパ腫のT細胞株の導出 ATM^{- / -と p53の^{- / -マウス}}