Name: flow cytometry purification of mouse meiotic cells
Uploaded: 2011-04-15T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells at JoVE.com

Этот проект был поддержан частично денежные средства от штата Флорида в Scripps и наградить номера R01GM085079 и R21HD061304 из Национального Института общей медицинских наук и Национального института здоровья ребенка и развития человека, соответственно. Это рукописи номер 20917 из исследовательского института Скриппса.

Этот протокол может быть разделен на два основных этапа: (1) диссоциация и Hoechst 33342 окрашивание мышиные клетки семенников затем, при необходимости, (2) FACS сортировки соответствующих фракций мейоза, включая все стадии мейоза, из половых клеток, чтобы круглые сперматиды. После сбора этих обо...

<ol>
	<li>Meistrich, M. L., Bruce, W. R., Clermont, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+fractions+of+mouse+testis+cells+following+velocity+sedimentation+separation.">Cellular composition of fractions of mouse testis cells following velocity sedimentation separation.</a> Exp. Cell Res. 79, 213-227 (1973).</li><li>Grabske, R. J., Lake, S., Gledhill, B. L., Meistrich, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrifugal+elutriation:+separation+of+spermatogenic+cells+on+the+basis+of+sedimentation+velocity.">Centrifugal elutriation: separation of spermatogenic cells on the basis of sedimentation velocity.</a> J. Cell. Physiol. 86, 177-189 (1975).</li><li>Purification, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=culture,+and+fractionation+of+spermatogenic+cells.">culture, and fractionation of spermatogenic cells.</a> Methods Enzymol. 225, 84-113 (1993).</li><li>Romrell, L. J., Bellve, A. R., Fawcett, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+mouse+spermatogenic+cells+by+sedimentation+velocity.+A+morphological+characterization.">Separation of mouse spermatogenic cells by sedimentation velocity. A morphological characterization.</a> Dev. Biol. 49, 119-131 (1976).</li><li>Meistrich, M. L., Trostle, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+mouse+testis+cells+by+equilibrium+density+centrifugation+in+renografin+gradients.">Separation of mouse testis cells by equilibrium density centrifugation in renografin gradients.</a> Exp. Cell Res. 92, 231-244 (1975).</li><li>Namekawa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postmeiotic+sex+chromatin+in+the+male+germline+of+mice.">Postmeiotic sex chromatin in the male germline of mice.</a> Curr. Biol. 16, 660-667 (2006).</li><li>Lassalle, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Side+Population'+cells+in+adult+mouse+testis+express+Bcrp1+gene+and+are+enriched+in+spermatogonia+and+germinal+stem+cells.">Side Population' cells in adult mouse testis express Bcrp1 gene and are enriched in spermatogonia and germinal stem cells.</a> Development. 131, 479-487 (2004).</li><li>Bastos, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+characterization+of+viable+meiotic+and+postmeiotic+cells+by+Hoechst+33342+in+mouse+spermatogenesis.">Flow cytometric characterization of viable meiotic and postmeiotic cells by Hoechst 33342 in mouse spermatogenesis.</a> Cytometry A. 65, 40-49 (2005).</li><li>Chowdhury, R., Bois, P. R., Feingold, E., Sherman, S. L., Cheung, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+variation+in+human+meiotic+recombination.">Genetic analysis of variation in human meiotic recombination.</a> PLoS Genet. 5, e1000648-e1000648 (2009).</li><li>Roig, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+TRIP13/PCH2+is+required+for+recombination+and+normal+higher-order+chromosome+structure+during+meiosis.">Mouse TRIP13/PCH2 is required for recombination and normal higher-order chromosome structure during meiosis.</a> PLoS Genet. 6, (2010).</li><li>Getun, I. V., Wu, Z. K., Khalil, A. M., Bois, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleosome+occupancy+landscape+and+dynamics+at+mouse+recombination+hotspots.">Nucleosome occupancy landscape and dynamics at mouse recombination hotspots.</a> EMBO Rep. 11, 555-560 (2010).</li><li>Romanienko, P. J., Camerini-Otero, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+Spo11+gene+is+required+for+meiotic+chromosome+synapsis.">The mouse Spo11 gene is required for meiotic chromosome synapsis.</a> Mol. Cell. 6, 975-987 (2000).</li></ol>

Протокол, представленные здесь, позволяет одновременно очистить от взрослых самцов мышей весь спектр мейоза клетки сцене с очень высокой чистоты, что позволяет исследователям для изучения динамики этого фундаментального процесса. Очищенные клетки могут быть использованы для многоч?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Collagenase Type-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington</td>
<td>CLSS1</td>
<td>Dissolve to 12,000U/ml in GBSS, store at 4&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Worthington</td>
<td>TRL3</td>
<td>Dissolve in 1mM HCl to 50mg/ml, store at 4&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Hoechst 33342</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Arcos</td>
<td>230001000</td>
<td>Saturated solution (10mg/ml in DMSO, store at 4&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>DNAse I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>DNEP</td>
<td>Dissolve in water/50% glycerol to 1mg/ml, store at -20&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Gey&#x2019;s Balance Salt Solution </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G9779</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6" Transfer Pipet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>137119D</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

flow cytometry purification of mouse meiotic cells

Гетерогенный характер типов клеток в яичках и отсутствие мейоза модели культуры клеток были значительные препятствия для изучения уникальных программ дифференциации, которые проявляются во время мейоза. Два основных метода были разработаны для очистки, в разной степени, различных фракций мейоза от взрослых, так и незрелых животных: отмучивания или Staput (осаждение) с помощью BSA и / или Перколла градиентов. Оба эти методы основаны на размер ячейки и плотности отдельных мейоза клетки 1-5. В целом, за исключением нескольких клеточных популяций 6, эти протоколы не сможет привести к достаточной чистоты многочисленные мейоза клеточных популяций, которые необходимы для подробного молекулярного анализа. Кроме того, с такими методами как правило, один тип мейоза клетки могут быть очищены в данный момент времени, который добавляет дополнительный уровень сложности в отношении воспроизводимости и однородности при сравнении образцов мейоза клетки. Здесь мы описываем точный метод, который позволяет легко визуализировать, идентифицировать, очистить и мейоза клетки, из половых клеток в круглых сперматид, используя FACS в сочетании с Hoechst 33342 окрашивание 7,8. Этот метод обеспечивает общий снимок всего процесса мейоза и позволяет очистить высоко жизнеспособных клеток от большинства стадии мейоза. Эти очищенные клетки могут затем быть детально проанализированы для молекулярных изменений, которые сопровождают прогрессии через мейоз, например, изменения в экспрессии генов, 9,10 и динамика нуклеосом размещение в горячих точках мейотических рекомбинации 11.

Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells at JoVE.com

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Эффективный метод получения высокоочищенного жизнеспособной мейоза фракций из семенников мышей описана, который сочетает в себе изысканный клеточной диссоциации протокол с люминесцентными активированный сортировки клеток (FACS). Этот метод использует различия в содержании ДНК и ядерной плотности дискретных мейоза фракций.

Проточной цитометрии Очистка мыши мейоза клетки

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

Meiosis

SCIENTISTS IN ACTION

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Проточной цитометрии на основе очистки<em&gt; S. CEREVISIAE</em&gt; Зиготы

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Оптимизирован Окрашивание и распространения методов моделирования для деления клеток Мониторинг использования красителей сотовых слежения

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

Cytosolic Calcium Measurements in Renal Epithelial Cells by Flow Cytometry

Цитозольные Измерения кальция в почечных эпителиальных клеток методом проточной цитометрии

A variety of cellular processes, both physiological and pathophysiological, require or are governed by calcium, including exocytosis, mitochondrial ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

Мейоза шпинделя оценка в мышь ооцитов по миРНК-обеспечиваемого молчания

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

LED Thermo Flow &#8212; Combining Optogenetics with Flow Cytometry

LED Thermo Flow - Сочетание оптогенетика с проточной цитометрии

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the ...

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Spermatocytes

Подготовка Meiotic хромосомы спреды от мыши Spermatocytes

Mammalian meiosis is a dynamic developmental process that occurs in germ cells and can be studied and characterized. Using a method to spread nuclei on ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Анализ Суспензии клеток, выделенная из твердых тканей с помощью спектральной проточной цитометрии

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Транс внутренняя ячейка массы впрыска эмбриональных стволовых клеток приводит к более высоким ставкам химеризма

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Isolation and Characterization of the Immune Cells from Micro-dissected Mouse Choroid Plexuses

Выделение и характеристика иммунных клеток из микрорасчлененных мышиных сосудисто-мозговых сплетений

The brain is no longer considered as an organ functioning in isolation; accumulating evidence suggests that changes in the peripheral immune system can ...