Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
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我们感谢与小鼠的繁殖和护理援助和实验室管理K.吉尔。也Muko​​yama实验室成员的技术帮助表示感谢。经费是由美国卫生Naitonal研究所院内研究计划。

1。收集小鼠胚胎肢体皮肤（E13.5〜E17.5） <ol><li>安乐死插入女性的批准程序。根据我们批准的动物协议，女性安乐死的CO 2曝光，然后由颈椎脱位保证。奠定其吸水纸巾上的动物和彻底浸泡在70％乙醇/ H 2 O从挤压瓶。 </li><li>解剖子宫的完整性和它放置在一个100 × 15毫米的Petri菜含有冰冷汉克斯“平衡盐溶液（HBSS）洗出的血液。 </li><li>分离和解剖胚胎。从胚胎中取出非常薄的羊膜?...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

血管系统是胚胎发育过程中以及在成人器官维护和生殖功能的器官发育的关键，因为它提供充足的氧气和养分的器官。适当的血管网，以及建立与血管生成的复杂和多步既存的毛细血管网，是具有高度支化结构和层次结构重组的过程。虽然许多作品已被证明在这些过程中涉及的各种分子，它没有明确如何机关或者其组件提供的信号，以促进血管发展的循序渐进的过程，包括内皮分化和血管分支的?...

抗体 泛内皮细胞标记物 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td>亚美尼亚仓鼠（男） </td><td> Chemicon公司</td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100稀释＃1 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td>鼠（M） </td><td>屋宇署</td><td> 553369 </td><td> 1:300稀释</td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td>鼠（M） </td><td> eBioscience公司</td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200稀释</td></tr><tr><td> CD34 + </td><td>鼠（M） </td><td> eBioscience公司</td><td> 13-0341 </td><td> 1:300稀释</td></tr><tr><td> IV型胶原</td><td>兔（P） </td><td> ABD Serotec </td><td> 2150年至1470年</td><td> 1:300稀释＃2 </td></tr></tbody></table> 动脉内皮细胞标记物 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td>兔（P） </td><td>亚历科洛德金的实验室＃3 </td><td></td><td> 1:3000稀释</td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td>山羊（P） </td><td>研发</td><td> AF1006 </td><td> 1:200稀释</td></tr></tbody></table> 静脉内皮细胞标记物 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td>山羊（P） </td><td>研发</td><td> AF446 </td><td> 1:100稀释</td></tr></tbody></table> 淋巴管内皮细胞标记物 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> LYVE - 1＃4 </td><td>兔（P） </td><td> Abcam公司</td><td> ab14917 </td><td> 1:200稀释</td></tr><tr><td> LYVE - 1＃4 </td><td>鼠（M） </td><td> MBL </td><td> D225 - 3 </td><td> 1:200稀释</td></tr><tr><td>的Prox - 1 </td><td>兔（P） </td><td> Chemicon公司</td><td> AB5475 </td><td> 1:1000稀释</td></tr><tr><td>的Prox - 1 </td><td>山羊（P） </td><td>研发</td><td> AF2727 </td><td> 1:50稀释</td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td>兔（P） </td><td>细胞信号转导</td><td> 3366 </td><td> 1 100稀释</td></tr><tr><td> podoplanin的</td><td>叙利亚仓鼠（M） </td><td>杂交瘤细胞银行</td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200稀释</td></tr></tbody></table> 平滑肌细胞/周细胞标记 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> αSMA- CY3 </td><td>鼠标（M）＃5 </td><td>西格玛</td><td> C - 6198 </td><td> 1:500稀释＃6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td>兔（P） </td><td> Chemicon公司</td><td> AB5320 </td><td> 1:200稀释</td></tr><tr><td> SM22α </td><td>兔（P） </td><td> Abcam公司</td><td> ab14106 </td><td> 1:200稀释</td></tr></tbody></table> 用于绿色荧光蛋白记者的抗体<table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td>绿色荧光蛋白</td><td>兔（P） </td><td> Invitrogen公司</td><td> A11122 </td><td> 1:300稀释</td></tr><tr><td>绿色荧光蛋白</td><td>鼠（M） </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000稀释</td></tr><tr><td>绿色荧光蛋白</td><td>鸡（P） </td><td> Chemicon公司</td><td> P42212 </td><td> 1:300稀释</td></tr></tbody></table> LacZ报告的抗体<table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> β-半乳糖苷酶</td><td>兔（P） </td><td> MP生物医学</td><td> 55976 </td><td> 1:5000稀释</td></tr><tr><td> β-半乳糖苷酶</td><td>山羊（P） </td><td> ABD Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500稀释</td></tr><tr><td> β-半乳糖苷酶</td><td>鸡（P） </td><td> Abcam公司</td><td> ab9361 </td><td> 1:200稀释</td></tr></tbody></table> 周边轴突的抗体<table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 物种 </td><td> 公司 </td><td> 目录＃ </td><td> 工作条件 </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td>鼠标（M）＃7 </td><td>杂交瘤细胞银行</td><td> 2H3 </td><td> 1:200稀释</td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td>鼠标（M）＃8 </td><td> Covance公司</td><td> MMS - 435P </td><td> 1:500稀释</td></tr><tr><td>外周</td><td>兔（P） </td><td> Chemicon公司</td><td> AB1530 </td><td> 1:1000稀释</td></tr></tbody></table> 迁移的雪旺氏细胞的抗体<table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td>兔（P） </td><td>托马斯米勒的实验室＃9 </td><td></td><td> 1:3000稀释</td></tr></tbody></table> （P）多克隆抗体（M）：单克隆抗体 ＃1：山羊抗亚美尼亚仓鼠Cy3标记（杰克逊ImmunoResearch 127-165-160）抗体，应作为辅助抗体。 ＃2：IV型胶原抗体可以用来检测血管原位杂交后。 ＃3：Neuropilin1抗体请亚历科洛德金的约翰霍普金斯大学的实验室提供。羊抗人Neuropilin1抗体是在R＆D（AF3870），虽然我们还没有测试它。 ＃4：LYVE - 1抗体检测胚胎皮肤中的巨噬细胞的一个子集。 ＃5：反αSMA抗体小鼠IgG2a单克隆抗体。 ＃6：Cy3标记共轭αSMA抗体一起孵育1小时在室温下用秒其他初级抗体的次级抗体。 ＃7：2H3抗体对神经丝鼠IgG1单克隆抗体。 ＃8：Tuj1抗体小鼠IgG2a对神经元特异性III类β-微管蛋白的单克隆抗体。 ＃9：BFABP（脑特异性脂肪酸结合蛋白）抗体是好心的Thomas Müller的马克斯 - 德尔布吕克中心分子医学实验室提供。

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

全安装整个血管成像的免疫组织化学分析的关键是了解分支形态发生的细胞机制。我们已经开发出患肢皮肤血管的模型来研究血管发展，其中一个预先存在的原始毛细血管丛是一个层次的分支血管网络重组。全安装多个标签的共聚焦显微镜允许以及完整的血管内皮细胞，周细胞和平滑肌细胞的细胞成分，包括使用特定的荧光标记，强大的成像。这个患肢皮肤血管模型与遗传研究进展，更好地了解血管的发展和图案的分子机制。患肢皮肤血管模型已被用于研究的分化和图案动脉末梢神经如何提供一个空间模板。此视频文章介绍了一个简单而强大的协议染色完整的血管与血管特异性抗体和荧光抗体，这是适用于我们能够遵循的血管发育过程中的吻合​​血管的胚胎器官。

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Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

我们介绍整个安装的免疫组织化学和激光扫描共聚焦显微镜分析复杂的小鼠胚胎肢体皮肤血管网的形成多个标签。

全安装胚胎肢体皮肤血管的免疫组织化学分析：一个模型系统，研究在胚胎血管分支形态发生

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

双整装原位杂交技术在早期鸡胚

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

科研

生物学

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

整装在鸡的抗体染色方法

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

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斑马鱼整装高分辨率双荧光原位杂交

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

小鼠胚胎的龙文化，一个系统来评价分枝的分子机制

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

全山原位杂交E8.5，E11.5小鼠胚胎

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

做自己动手恢复冻存样品的设备不慎掉落到低温储罐

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

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一个系统<em&gt;体外</em培养的胚胎胰腺

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

鼠胚体外发育无血清全胚胎培养系统

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

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The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...