Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Wir danken K. Gill für die Unterstützung bei der Maus Zucht und Pflege sowie für Labor-Management. Danke auch an Mukoyama lab Mitglieder für technische Hilfe. Die Finanzierung wurde von Intramural Research Program der Nationalfeiertag Institutes of Health zur Verfügung gestellt.

1. Sammeln embryonalen Maus-Limb Skin (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> Euthanize gesteckt Weibchen durch zugelassene Verfahren. Nach unseren zugelassenen Tier-Protokoll sind die Weibchen von CO 2 Belastung eingeschläfert und dann durch Genickbruch gewährleistet. Legen Sie das Tier auf seinen saugfähigen Papiertuch und legen Sie ihn gründlich in 70% EtOH / H 2 O aus einer Spritzflasche. </li><li> Präparieren Sie die Gebärmutter intakt und legen Sie sie in einem 100 x 15 mm Petrischale mit eiskaltem ...

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	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

Das Gefäßsystem ist entscheidend für die Entwicklung der Organe während der Embryonalentwicklung sowie für Orgel Wartung und reproduktiven Funktionen in die Erwachsenen, weil es genügend Sauerstoff und Nährstoffe zu den Organen liefert. Proper Gefäßnetz ist mit komplexen und mehrstufigen Verfahren durch Angiogenese, in dem bereits bestehenden Netz von Kapillaren mit stark verzweigten und hierarchischen Strukturen neu organisiert ist gut etabliert. Obwohl zahlreiche Arbeiten haben gezeigt worden, dass eine Vielz...

Antibodies Pan-Endothelzell-Marker <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Armenische Hamster (M) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100-Verdünnung Nr. 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Rat (M) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 Verdünnung </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 Verdünnung </td></tr><tr><td> Collagen IV </td><td> Rabbit (P) </td><td> AbD Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 Verdünnung Nr. 2 </td></tr></tbody></table> Arterielle Endothelzellen Marker <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> Rabbit (P) </td><td> Der Alex Kolodkin Labor # 3 </td><td></td><td> 1:3000 Verdünnung </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> Goat (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF1006 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Venöse Endothelzellen Marker <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> Goat (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF446 </td><td> 1:100-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Lymphatische Endothelzellen Marker <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> LYVE-1 Nr. 4 </td><td> Rabbit (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr><tr><td> LYVE-1 Nr. 4 </td><td> Rat (M) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Rabbit (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000-Verdünnung </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Goat (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF2727 </td><td> 1:50-Verdünnung </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> Rabbit (P) </td><td> Cell Signaling </td><td> 3366 </td><td> 1; 100-Verdünnung </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> Goldhamster (M) </td><td> Hybridoma der Bank </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Glatte Muskelzellen / Perizyten Marker <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> αSMA-Cy3 </td><td> Maus (M) # 5 </td><td> Sigma </td><td> c-6198 </td><td> 1:500-Verdünnung Nr. 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> Rabbit (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> Rabbit (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Antikörper für GFP-Reporter <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Rabbit (P) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 Verdünnung </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Rat (M) </td><td> Nacalai Tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000-Verdünnung </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Chick (P) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 Verdünnung </td></tr></tbody></table> Antikörper für LacZ Reporter <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> Rabbit (P) </td><td> MP Biomedical </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 Verdünnung </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> Goat (P) </td><td> AbD Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 Verdünnung </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> Chick (P) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Antikörper für periphere Axon <table border="1"><tbody><tr><td> Antikörper </td><td> Spezies </td><td> Firma </td><td> Katalog # </td><td> Arbeitsbedingung </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> Maus (M) # 7 </td><td> Hybridoma der Bank </td><td> 2H3 </td><td> 1:200-Verdünnung </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> Maus (M) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td><td> 1:500 Verdünnung </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> Rabbit (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000-Verdünnung </td></tr></tbody></table> Antikörper für die Migration von Schwann-Zellen <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> Rabbit (P) </td><td> Die Thomas Müller-Labor Nr. 9 </td><td></td><td> 1:3000 Verdünnung </td></tr></tbody></table> (P): polyklonaler Antikörper, (M): monoklonaler Antikörper # 1: Goat anti-armenischen Hamster-Cy3 (Jackson ImmunoResearch 127-165-160) Antikörper sollte als sekundärer Antikörper verwendet werden. # 2: Die Collagen IV Antikörper kann verwendet werden, um die Blutgefäße nach in-situ-Hybridisierung nachgewiesen werden. # 3: Die Neuropilin1 Antikörper wird freundlicherweise von der Alex Kolodkin Labor in der Johns Hopkins University zur Verfügung gestellt. Sheep anti-human Neuropilin1 Antikörper ist in R &amp; D (AF3870), obwohl wir es noch nicht getestet noch. # 4: Die LYVE-1-Antikörper auch erkennen, eine Teilmenge von Makrophagen in der embryonalen Haut. # 5: Die Anti-αSMA Antikörper Maus IgG2a monoklonaler Antikörper. # 6: Die Cy3-konjugierten αSMA Antikörper für 1 Stunde bei Raumtemperatur zusammen mit sec inkubiertondary Antikörper für andere primäre Antikörper. # 7: 2H3-Antikörper IgG1 monoklonaler Antikörper gegen Neurofilament. # 8: Tuj1 Antikörper Maus IgG2a monoklonaler Antikörper gegen Neuron-spezifische Klasse III beta-Tubulin. # 9: Die BFABP (Gehirn-spezifische fatty acid binding protein)-Antikörper wird freundlicherweise von der Thomas Müller-Labor in Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin zur Verfügung gestellt.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

Whole-mount immunhistochemische Analyse zur Abbildung des gesamten Gefäßsystem ist von zentraler Bedeutung für das Verständnis der zellulären Mechanismen der Verzweigung Morphogenese. Wir haben das Bein Haut Gefäßsystem Modell der vaskulären Entwicklung, in der eine bereits bestehende primitive Kapillarplexus in eine hierarchisch verzweigten Gefäßnetz reorganisiert wird Studie entwickelt. Whole-mount konfokalen Mikroskopie mit mehreren Kennzeichnung ermöglicht robuste Bildgebung von intakten Blutgefäßen sowie deren zelluläre Komponenten, einschließlich Endothelzellen, Perizyten und glatte Muskelzellen, mit spezifischen fluoreszierenden Marker. Advances in diesem Teil der Haut Gefäßsystem Modell mit genetischen Studien haben ein besseres Verständnis molekularer Mechanismen der vaskulären Entwicklung und Strukturierung. Das Glied Haut Gefäßsystem Modell wurde verwendet, zu untersuchen, wie peripheren Nerven eine räumliche Vorlage liefern für die Differenzierung und Strukturierung von Arterien. Dieses Video Artikel beschreibt eine einfache und robuste Protokoll zu intakten Blutgefäßen mit vaskulären spezifische Antikörper und fluoreszierende Sekundärantikörper werden, die für vaskularisierte embryonale Organe, wo wir in der Lage sind, den Prozess der vaskulären Entwicklung folgen Fleck.

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Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Wir stellen Ihnen eine ganze-mount Immunhistochemie und konfokaler mit mehreren Kennzeichnung für die Analyse von komplizierten Gefäßnetz Bildung in embryonalen Maus Gliedmaßen Haut.

Whole-mount Immunhistochemische Analyse für Embryonale Limb Haut Gefäßsystem: ein Modellsystem zur Vascular Branching Morphogenese in Embryo-Studie

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Forschung

Biologie

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Verfahren zur Whole Mount Antikörper-Färbung in Küken

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafisch Whole Mount High-Resolution Doppel Fluorescent In-situ Hybridisierung

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Embryonalen Maus-Lung Kultur, A-System, die molekularen Mechanismen des Branching Bewerten

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Ganze Berge In-situ Hybridisierung von E8.5 bis E11.5 Maus Embryonen

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Do-It-Yourself Einrichtung zur Rückgewinnung von kryokonservierten Proben versehentlich fallengelassen in Kryo-Lagerbehälter

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Ein System für<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultivierung von embryonalen Pankreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Maus embryonalen Entwicklung in einem Serum-freien Whole Embryo Culture-System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Die Analyse der Apoptose in Zebrafischembryonen von Whole-mount Immunfluoreszenz an aktivierte Caspase 3 Detect

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...