Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

אנו מודים ק גיל לסיוע עם גידול העכבר טיפול לניהול מעבדה. תודה גם לחברי Mukoyama מעבדה לעזרה טכנית. המימון ניתן על ידי תוכנית המחקר עירונית של מכוני Naitonal הבריאות.

1. איסוף לימב עובריים בעכבר העור (E13.5 ~ E17.5) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים פקוק נוהל שאושר על ידי נשים. על פי פרוטוקול שאושר שלנו חיה, הנקבות מומתים על ידי חשיפה CO 2 והבטיחה מכן על ידי נקע בצוואר הרחם. הנח את חיה על מגבת נייר סופג שלה ולספוג ?...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

מערכת כלי הדם חיונית להתפתחות איבר במהלך embryogenesis כמו גם עבור פונקציות תחזוקה איבר הרבייה אצל מבוגרים, כי הוא מספק מספיק חמצן וחומרים מזינים את האיברים. רשת כלי דם תקין היא מבוססת היטב עם תהליכים מורכבים ורב צעד אנגיוגנזה שבו קיימים רשת נימי הוא מחדש עם מבנים מסועפת מא...

נוגדנים פאן תא האנדותל סמן <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> אוגר ארמני (M) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 דילול # 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> עכברוש (ז) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> דילול 1:300 </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> עכברוש (ז) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> עכברוש (ז) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> דילול 1:300 </td></tr><tr><td> קולגן IV </td><td> הארנב (P) </td><td> עבד Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 דילול # 2 </td></tr></tbody></table> העורקים תא האנדותל סמן <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> הארנב (P) </td><td> Kolodkin אלכס מעבדה # 3 </td><td></td><td> 1:3000 דילול </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> עיזים (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF1006 </td><td> דילול 1:200 </td></tr></tbody></table> ורידי סמן תא האנדותל <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> עיזים (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF446 </td><td> דילול 1:100 </td></tr></tbody></table> תא האנדותל הלימפה סמן <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> הארנב (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> עכברוש (ז) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> הארנב (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 דילול </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> עיזים (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF2727 </td><td> 1:50 דילול </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> הארנב (P) </td><td> תא האיתות </td><td> 3366 </td><td> 1; 100 דילול </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> אוגר סורי (M) </td><td> Hybridoma בנק </td><td> 8.1.1 </td><td> דילול 1:200 </td></tr></tbody></table> שריר חלק תא / pericyte סמן <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> αSMA-Cy3 </td><td> עכבר (M) # 5 </td><td> סיגמא </td><td> c-6198 </td><td> 1:500 דילול # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> הארנב (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> הארנב (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> דילול 1:200 </td></tr></tbody></table> נוגדנים עבור עיתונאי ה-GFP <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> GFP </td><td> הארנב (P) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> דילול 1:300 </td></tr><tr><td> GFP </td><td> עכברוש (ז) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 דילול </td></tr><tr><td> GFP </td><td> צ&#39;יק (P) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> דילול 1:300 </td></tr></tbody></table> נוגדנים עבור כתב LacZ <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> הארנב (P) </td><td> MP ביו </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 דילול </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> עיזים (P) </td><td> עבד Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> דילול 1:500 </td></tr><tr><td> β-gal </td><td> צ&#39;יק (P) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> דילול 1:200 </td></tr></tbody></table> נוגדנים עבור האקסון הפריפריה <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> נוגדן </td><td> מין </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td><td> תנאי עבודה </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> עכבר (M) # 7 </td><td> Hybridoma בנק </td><td> 2H3 </td><td> דילול 1:200 </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> עכבר (M) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td><td> דילול 1:500 </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> הארנב (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 דילול </td></tr></tbody></table> נוגדנים להעברת בתאי שוואן <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> הארנב (P) </td><td> תומאס מולר המעבדה # 9 </td><td></td><td> 1:3000 דילול </td></tr></tbody></table> (P): נוגדן polyclonal, (M): נוגדנים חד שבטיים # 1: אנטי ארמני עיזים אוגר-Cy3 (ImmunoResearch ג&#39;קסון 127-165-160) נוגדן צריך לשמש נוגדן משנית. # 2: הנוגדן IV קולגן יכול לשמש כדי לזהות כלי דם לאחר הכלאה ב באתרה. # 3: הנוגדן Neuropilin1 מסופק על ידי חביב במעבדה Kolodkin של אלכס באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס. כבשה נגד נוגדן אנושי Neuropilin1 זמין במו&quot;פ (AF3870), למרות שאנו לא צריך לבדוק את זה עדיין. # 4: LYVE-1 נוגדנים גם לזהות תת קבוצה של מקרופאגים בעור עובריים. # 5: נוגדנים נגד αSMA הוא עכבר נוגדנים חד שבטיים IgG2a. # 6: נוגדן Cy3-מצומדות αSMA הוא מודגרות שעה 1 בטמפרטורת החדר יחד עם שניותנוגדנים ondary עבור נוגדנים ראשוניים אחרים. # 7: 2H3 נוגדן הוא עכבר נוגדנים חד שבטיים נגד IgG1 neurofilament. # 8: Tuj1 נוגדן הוא עכבר נוגדנים חד שבטיים נגד IgG2a Neuron ספציפיים בכיתה ג&#39;בטא טובולין. # 9: נוגדן (מוח ספציפיים חומצת שומן חלבון מחייב) BFABP מסופק בחביבות על ידי המעבדה של תומאס מולר ב-Max-Delbrück המרכז לרפואה מולקולרית.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

Whole-Mount ניתוח immunohistochemical הדמיה vasculature כולו מרכזי להבנת מנגנוני הסלולר של הסתעפות המורפוגנזה. פיתחנו את העור איבר vasculature מודל ללמוד פיתוח כלי הדם שבו קיימים מקלעת נימי פרימיטיבי הוא ארגן מחדש לתוך רשת מסועפת של כלי הדם הירארכי. Whole-Mount מיקרוסקופיה confocal עם תיוג מרובים מאפשר הדמיה החזקה של כלי הדם ללא פגע, כמו גם מרכיבים תאיים שלהם כולל תאים, pericytes אנדותל ותאי שריר חלק, באמצעות סמנים ניאון ספציפיים. ההתקדמות מודל זה עור vasculature איבר עם מחקרים גנטיים השתפרו הבנה של המנגנונים המולקולריים דפוסים התפתחות כלי הדם. העור האיבר מודל vasculature נעשה שימוש כדי ללמוד איך העצבים ההיקפיים לספק תבנית מרחבית על בידול ועל דפוסים של העורקים. מאמר זה מתאר וידאו פרוטוקול פשוט חזקים כדי כתם הדם שלם עם נוגדנים ספציפיים כלי הדם נוגדנים משני פלורסנט, אשר ישים עבור איברים עובריים vascularized שבו אנו מסוגלים לבצע את תהליך ההתפתחות של כלי הדם.

Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

אנחנו מציגים אימונוהיסטוכימיה כל הר לייזר מיקרוסקופיית confocal עם תיוג מרובים לניתוח רשת סבוכה היווצרות כלי דם בעור איבר עכבר עובריים.

Whole-mount עבור ניתוח immunohistochemical vasculature לימב עובריים עור: מערכת מודל לחקר המורפוגנזה מסעף דם בעובר

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

שיטת מכתים נוגדן שלם הר ב צ&#39;יק

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

דג הזברה שלמים הר ברזולוציה גבוהה פעמיים פלורסנט באתרו הכלאה

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

עכבר עובריים תרבות ריאות, מערכת הערכת המנגנונים המולקולריים של מסעף

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

הר שלם<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה של E8.5 לעוברי E11.5 עכבר

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

עשה זאת בעצמך התקן להבראת דוגמאות Cryopreserved בטעות ירד לתוך טנקים אחסון קריוגני

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

מערכת ל<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; Culturing של לבלב עוברי

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

עכבר עוברי פיתוח במערכת סרום ללא תרבות שלמה עובר

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

ניתוח של אפופטוזיס בעוברי דג הזברה על ידי כל הר Immunofluorescence לזיהוי caspase הופעל 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...