Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
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हम माउस प्रजनन और देखभाल के साथ सहायता के लिए और प्रयोगशाला प्रबंधन के लिए लालकृष्ण गिल धन्यवाद. Mukoyama तकनीकी मदद के लिए प्रयोगशाला के सदस्यों के लिए भी धन्यवाद. अनुदान स्वास्थ्य Naitonal संस्थानों के अंदर का रिसर्च प्रोग्राम द्वारा प्रदान की गई थी.

1. संग्रह माउस भ्रूणीय अंग त्वचा (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> Euthanize अनुमोदित प्रक्रिया द्वारा महिलाओं खामियों को दूर किया. हमारे अनुमोदित जानवर प्रोटोकॉल के अनुसार, महिलाओं के सीओ 2 के जोखिम से euthanized हैं और फिर गर्भाशय ग?...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

नाड़ी तंत्र embryogenesis दौरान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अंग रखरखाव और वयस्कों में प्रजनन कार्यों के लिए अंग के विकास के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह पर्याप्त ऑक्सीजन और अंगों के लिए पोषक तत्वों की आप...

एंटीबॉडी पान endothelial सेल मार्कर <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> अर्मेनियाई हम्सटर (एम) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 कमजोर पड़ने # 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> चूहा (एम) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 मन्दन </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> चूहा (एम) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> चूहा (एम) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 मन्दन </td></tr><tr><td> कोलेजन चतुर्थ </td><td> खरगोश (पी) </td><td> अब्द Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 कमजोर पड़ने # 2 </td></tr></tbody></table> धमनी endothelial सेल मार्कर <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> खरगोश (पी) </td><td> एलेक्स Kolodkin प्रयोगशाला # 3 </td><td></td><td> 1:3000 मन्दन </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> बकरी (पी) </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> AF1006 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr></tbody></table> शिरापरक endothelial सेल मार्कर <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> बकरी (पी) </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> AF446 </td><td> 1:100 मन्दन </td></tr></tbody></table> लसीका endothelial सेल मार्कर <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> # 4 LYVE-1 </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr><tr><td> # 4 LYVE-1 </td><td> चूहा (एम) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr><tr><td> प्रोक्स - 1 </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 मन्दन </td></tr><tr><td> प्रोक्स - 1 </td><td> बकरी (पी) </td><td> अनुसंधान एवं विकास </td><td> AF2727 </td><td> 1:50 मन्दन </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> खरगोश (पी) </td><td> सेल संकेतन </td><td> 3366 </td><td> 1, 100 मन्दन </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> सीरिया हम्सटर (एम) </td><td> हाइब्रिडोमा बैंक </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr></tbody></table> चिकनी पेशी मार्कर / सेल pericyte <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> αSMA - सीY3 </td><td> माउस (एम) # 5 </td><td> सिग्मा </td><td> ग - 6198 </td><td> 1:500 कमजोर पड़ने # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr></tbody></table> GFP रिपोर्टर के लिए एंटीबॉडी <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> GFP </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 मन्दन </td></tr><tr><td> GFP </td><td> चूहा (एम) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 मन्दन </td></tr><tr><td> GFP </td><td> चिकी (पी) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 मन्दन </td></tr></tbody></table> LacZ रिपोर्टर के लिए एंटीबॉडी <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> β - लड़की </td><td> खरगोश (पी) </td><td> सांसद बायोमेडिकल </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 मन्दन </td></tr><tr><td> β - लड़की </td><td> बकरी (पी) </td><td> अब्द Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 मन्दन </td></tr><tr><td> β - लड़की </td><td> चिकी (पी) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr></tbody></table> परिधीय अक्षतंतु के लिए एंटीबॉडी <table border="1"><tbody><tr><td> एंटीबॉडी </td><td> प्रजाति </td><td> कंपनी </td><td> कैटेलॉग # </td><td> काम करने की हालत </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> माउस (एम) # 7 </td><td> हाइब्रिडोमा बैंक </td><td> 2H3 </td><td> 1:200 मन्दन </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> माउस (एम) # 8 </td><td> Covance </td><td> एमएमएस-435P </td><td> 1:500 मन्दन </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> खरगोश (पी) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 मन्दन </td></tr></tbody></table> पलायन श्वान कोशिकाओं के लिए एंटीबॉडी <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> खरगोश (पी) </td><td> थॉमस मुलर प्रयोगशाला # 9 </td><td></td><td> 1:3000 मन्दन </td></tr></tbody></table> (पी): पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (एम): मोनोक्लोनल एंटीबॉडी # 1: बकरी विरोधी अर्मेनियाई एंटीबॉडी हम्सटर - Cy3 (जैक्सन 127-165-160 ImmunoResearch) एक माध्यमिक एंटीबॉडी के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए. # 2: कोलेजन चतुर्थ एंटीबॉडी के लिए स्वस्थानी संकरण में रक्त वाहिकाओं के बाद का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. # 3: Neuropilin1 एंटीबॉडी कृपया जॉन्स हॉपकिन्स विश्वविद्यालय में एलेक्स Kolodkin प्रयोगशाला द्वारा प्रदान की गई है. भेड़ विरोधी मानव Neuropilin1 एंटीबॉडी आर एंड डी (AF3870) में उपलब्ध है, हालांकि हम अभी तक यह परीक्षण नहीं किया है. # 4: एंटीबॉडी LYVE एक भी भ्रूण त्वचा में मैक्रोफेज के एक सबसेट का पता लगाने. # 5: विरोधी - αSMA एंटीबॉडी माउस IgG2a मोनोक्लोनल एंटीबॉडी है. # 6: Cy3 संयुग्मित αSMA एंटीबॉडी 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर incubated सेकंड के साथ साथअन्य प्राथमिक एंटीबॉडी के लिए ondary एंटीबॉडी. # 7: 2H3 एंटीबॉडी neurofilament के खिलाफ माउस IgG1 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी है. # 8: Tuj1 एंटीबॉडी न्यूरॉन विशिष्ट वर्ग बीटा ट्यूबिलिन III के खिलाफ माउस IgG2a मोनोक्लोनल एंटीबॉडी है. # 9: BFABP एंटीबॉडी (मस्तिष्क विशिष्ट फैटी एसिड बंधनकारी प्रोटीन) कृपया आण्विक चिकित्सा के लिए थॉमस मुलर मैक्स Delbrück केंद्र में प्रयोगशाला द्वारा प्रदान की गई है.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

पूरे माउंट इमेजिंग के लिए immunohistochemical विश्लेषण पूरे vasculature morphogenesis शाखाओं में बंटी के सेलुलर तंत्र को समझने के लिए निर्णायक है. हम अंग त्वचा vasculature को संवहनी विकास है जिसमें एक पूर्व मौजूदा आदिम केशिका जाल एक पदानुक्रम branched संवहनी नेटवर्क में पुनर्गठित अध्ययन मॉडल विकसित किया है. पूरे माउंट एकाधिक लेबलिंग के साथ confocal माइक्रोस्कोपी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बरकरार रक्त वाहिकाओं endothelial कोशिकाओं, pericytes और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं सहित उनके सेलुलर घटकों विशिष्ट फ्लोरोसेंट मार्करों का उपयोग कर के मजबूत इमेजिंग के लिए अनुमति देता है. आनुवंशिक अध्ययन के साथ इस अंग त्वचा vasculature मॉडल में अग्रिम संवहनी विकास और patterning के आणविक तंत्र को समझने में सुधार हुआ है. अंग त्वचा vasculature मॉडल के लिए अध्ययन कैसे परिधीय नसों और धमनियों का भेदभाव patterning के लिए एक स्थानिक टेम्पलेट प्रदान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. इस वीडियो में लेख एक सरल और मजबूत करने के लिए संवहनी विशिष्ट एंटीबॉडी और फ्लोरोसेंट माध्यमिक एंटीबॉडी, जो vascularized भ्रूण अंगों जहाँ हम संवहनी विकास की प्रक्रिया का पालन करने के लिए कर रहे हैं के लिए लागू होता है के साथ बरकरार रक्त वाहिकाओं दाग प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.

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Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

हम एक पूरी माउंट immunohistochemistry परिचय और लेजर माउस भ्रूणीय अंग त्वचा में जटिल संवहनी नेटवर्क के गठन का विश्लेषण करने के लिए एकाधिक लेबलिंग के साथ confocal माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग.

पूरे माउंट भ्रूणीय अंग त्वचा vasculature के लिए immunohistochemical विश्लेषण: एक मॉडल प्रणाली के अध्ययन भ्रूण में संवहनी शाखाओं में बंटी morphogenesis

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

प्रारंभिक चिकी भ्रूण के स्वस्थानी संकरण में डबल पूरा पर्वत

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

चिकी में पूरे माउंट एंटीबॉडी धुंधला के लिए विधि

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Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

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माउस भ्रूणीय फेफड़े संस्कृति, एक शाखाओं में बंटी के आणविक तंत्र का मूल्यांकन सिस्टम

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पूरे माउंट<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; E8.5 E11.5 माउस भ्रूण संकरण

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

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Cryopreserved नमूने की वसूली के लिए डिवाइस - यह खुद गलती क्रायोजेनिक भंडारण टैंक में गिरा

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

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के लिए एक प्रणाली<em&gt; पूर्व vivo</emभ्रूण अग्न्याशय&gt; संवर्धन

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

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एक सीरम मुक्त पूरे भ्रूण संस्कृति प्रणाली में माउस भ्रूण विकास

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

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The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

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सक्रिय कस्पासे 3 का पता लगाने के लिए पूरे माउंट immunofluorescence द्वारा zebrafish भ्रूण में apoptosis के विश्लेषण

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...