Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
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我々はマウスの繁殖と介護の支援のために、実験室の管理のためのK.ギルに感謝。また、技術的なヘルプのための向山研究室のメンバーに感謝します。資金は、保健のNaitonal研究所の学内研究プログラムによって提供されていました。

1。マウス胚の四肢の皮膚の収集（E13.5〜E17.5） <ol><li>安楽死は、承認された手順によって女性を差し込む。私達の承認された動物のプロトコルによると、女性はCO 2曝露により安楽死され、その後、頚椎脱臼により保証。その吸水性のペーパータオルに動物を置くと、スクイーズボトルから70％エタノール/ H 2 Oでそれを徹底的に浸します。 </li><li>子宮はそのままに摘出し、?...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

それが臓器に十分な酸素と栄養を供給するので、血管系は、胚形成の間だけでなく、臓器のメンテナンスと成人の生殖機能のための器官の開発にとって極めて重要である。適切な血管網は、既存の毛細血管網が高度に分岐したと階層構造で編成されている血管新生により、複雑で多段階のプロセスで十分に確立されている。数々の作品は様々な分子がこ​​れらのプロセスに関与しているこ?...

抗体 汎血管内皮細胞のマーカー <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td>アルメニアハムスター（M） </td><td>ケミコン</td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100希釈＃1 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td>ラット（M） </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300希釈</td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td>ラット（M） </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200希釈</td></tr><tr><td> CD34 </td><td>ラット（M） </td><td>ベイバイオサイエンス</td><td> 13から0341 </td><td> 1:300希釈</td></tr><tr><td>コラーゲンIV </td><td>ウサギ（P） </td><td> ABD Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300希釈＃2 </td></tr></tbody></table> 動脈内皮細胞のマーカー <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td>ウサギ（P） </td><td>アレックスKolodkinのラボ第3位 </td><td></td><td> 1:3000希釈</td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td>ヤギ（P） </td><td> R＆D </td><td> AF1006 </td><td> 1:200希釈</td></tr></tbody></table> 静脈内皮細胞のマーカー <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td>ヤギ（P） </td><td> R＆D </td><td> AF446 </td><td> 1:100希釈</td></tr></tbody></table> リンパ管内皮細胞マーカー <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> LYVE - 1＃4 </td><td>ウサギ（P） </td><td>アブカム</td><td> ab14917 </td><td> 1:200希釈</td></tr><tr><td> LYVE - 1＃4 </td><td>ラット（M） </td><td> MBL </td><td> D225 - 3 </td><td> 1:200希釈</td></tr><tr><td> PROX - 1 </td><td>ウサギ（P） </td><td>ケミコン</td><td> AB5475 </td><td> 1:1000希釈</td></tr><tr><td> PROX - 1 </td><td>ヤギ（P） </td><td> R＆D </td><td> AF2727 </td><td> 1:50希釈</td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td>ウサギ（P） </td><td>細胞シグナリング</td><td> 3366 </td><td> 1、100希釈</td></tr><tr><td>ポドプラニン</td><td>シリアンハムスター（M） </td><td>ハイブリドーマバンク</td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200希釈</td></tr></tbody></table> 平滑筋細胞/周皮細胞マーカー <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> αSMA- CY3 </td><td>マウス（M）＃5 </td><td>シグマ</td><td> C - 6198 </td><td> 1:500希釈＃6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td>ウサギ（P） </td><td>ケミコン</td><td> AB5320 </td><td> 1:200希釈</td></tr><tr><td> SM22α </td><td>ウサギ（P） </td><td>アブカム</td><td> ab14106 </td><td> 1:200希釈</td></tr></tbody></table> GFPレポーターのための抗体 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> GFP </td><td>ウサギ（P） </td><td>インビトロジェン</td><td> A11122 </td><td> 1:300希釈</td></tr><tr><td> GFP </td><td>ラット（M） </td><td>ナカライテスク</td><td> 04404〜84 </td><td> 1:1000希釈</td></tr><tr><td> GFP </td><td>チック（P） </td><td>ケミコン</td><td> P42212 </td><td> 1:300希釈</td></tr></tbody></table> LacZレポーターのための抗体 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> β- galを</td><td>ウサギ（P） </td><td> MPバイオメディカル</td><td> 55976 </td><td> 1:5000希釈</td></tr><tr><td> β- galを</td><td>ヤギ（P） </td><td> ABD Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500希釈</td></tr><tr><td> β- galを</td><td>チック（P） </td><td>アブカム</td><td> ab9361 </td><td> 1:200希釈</td></tr></tbody></table> 末梢軸索のための抗体 <table border="1"><tbody><tr><td> 抗体 </td><td> 種 </td><td> 会社 </td><td> カタログ＃ </td><td> 労働条件 </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td>マウス（M）＃7 </td><td>ハイブリドーマバンク</td><td> 2H3 </td><td> 1:200希釈</td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td>マウス（M）＃8 </td><td> Covance </td><td> MMS - 435P </td><td> 1:500希釈</td></tr><tr><td>ペリフェリン</td><td>ウサギ（P） </td><td>ケミコン</td><td> AB1530 </td><td> 1:1000希釈</td></tr></tbody></table> シュワン細胞を移行するための抗体 <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td>ウサギ（P） </td><td>トーマスミュラーの研究室第9位 </td><td></td><td> 1:3000希釈</td></tr></tbody></table> （P）：ポリクローナル抗体、（M）：モノクローナル抗体第1位：ヤギ抗アルメニアハムスター- Cy3の（ジャクソンイムノ127-165-160）抗体を二次抗体として使用する必要があります。 第2位：コラーゲンIV抗体は、in situハイブリダイゼーションの後に血管を検出するために使用することができます。 ＃3：Neuropilin1の抗体は、親切にジョンズホプキンス大学のアレックスKolodkinの研究室によって提供されます。我々はまだそれをテストしていないもののヒツジ抗ヒトNeuropilin1の抗体は、R＆D（AF3870）で利用可能です。 ＃4：LYVE - 1抗体はまた、胚性皮膚におけるマクロファージのサブセットを検出する。 ＃5：抗αSMA抗体マウスIgG2aモノクローナル抗体です。 ＃6：Cy3結合αSMAの抗体は、秒と一緒に室温で1時間インキュベートする他の一次抗体のための二次抗体。 ＃7：2H3抗体神経フィラメントに対するマウスIgG1モノクローナル抗体です。 ＃8：Tuj1抗体はニューロン固有のクラスIIIβ-チューブリンに対するマウスIgG2aモノクローナル抗体である。 ＃9：BFABP（脳特異的脂肪酸結合タンパク質）抗体は、親切に分子医学のマックスデルブリュック - センターのトーマスミュラーの研究室によって提供されます。

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

イメージングのためのホールマウント免疫組織化学分析は、全​​体の血管系は分岐形態形成の細胞メカニズムを理解するために極めて重要である。我々は、既存のプリミティブ毛細血管叢が階層的に分岐した血管網に再編成されている血管の発達を研究するために四肢の皮膚の血管系モデルを開発した。複数のラベルを持つホールマウント共焦点顕微鏡は、特定の蛍光マーカーを使用して、無傷の血管の堅牢な画像だけでなく、内皮細胞、周皮細胞および平滑筋細胞を含むそれらの細胞成分が可能になります。遺伝学的研究でこの四肢の皮膚の血管系モデルの進歩により、血管の開発とパターン形成の分子機構を理解改善している。四肢の皮膚の血管系のモデルは、末梢神経、動脈の分化とパターン形成のために空間的なテンプレートを提供する方法を研究するために使用されています。このビデオの記事では、我々は血管の開発のプロセスに従うことができる血管新生化胚の臓器に適用可能な血管特異的な抗体と蛍光二次抗体、で無傷の血管を染色するためのシンプルで堅牢なプロトコルを記述します。

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Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

我々はマウス胚の四肢の皮膚に複雑な血管網の形成を分析するために複数のラベルで共焦点顕微鏡を走査型ホールマウントの免疫組織化学とレーザーをご紹介。

胚肢の皮膚の血管系のためのホールマウント免疫組織化学的解析：胚における血管分岐形態形成を研究するモデルシステム

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

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