Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
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우리는 마우스 사육 및 관리와 지원 및 실험실 관리 K. 길 주셔서 감사합니다. 또한 기술적인 도움을 무코 야마 연구실 회원에게 감사드립니다. 자금은 보건 Naitonal 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 제공되었다.

1. 수집 마우스 배아 림브 스킨 (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> 안락사는 승인 절차에 의해 암컷을 연결. 우리의 승인된 동물 프로토콜에 따르면, 여자는 CO 2 노출에 의해 euthanized하고 다음 경추 전위에 의해 안심하시기 바랍니다. 의 흡수 종이 타월에 동물을 배치하고 스퀴즈 병에서 70% EtOH / H 2 O에서 철저하게 그것을 만끽해보세요. </li><li> 자궁은 그대로 해부하다 피로를 씻어 차가운 행크스...

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	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

그것이 충분한 산소와 장기에 영양분을 공급하기 때문에 혈관 시스템은 embryogenesis 동안뿐만 아니라 성인의 장기 유지 보수 및 생식 기능에 대한 장기 개발을 위해 매우 중요합니다. 적절한 혈관 네트워크는 기존의 모세관이 높은 분기와 계층 구조를 개편하고있는 angiogenesis에 의해 복잡하고 여러 단계의 프로세스를 잘 설정됩니다. 다수의 작품이 분자의 다양한 이러한 과정에 관여하는 것으로 나...

항체 판 - 내피 세포 마커 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td> 아르메니아어 햄스터 (M) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 희석 # 1 </td></tr><tr><td> PECAM - 1 </td><td> 랫 (M) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 희석 </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> 랫 (M) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200 희석 </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> 랫 (M) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 희석 </td></tr><tr><td> 콜라겐 IV </td><td> 래빗 (P) </td><td> AbD Serotec </td><td> 2150년부터 1470년까지 </td><td> 1:300 희석 # 2 </td></tr></tbody></table> 아티 내피 세포 마커 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> 래빗 (P) </td><td> 알렉스 Kolodkin의 실험실 # 3 </td><td></td><td> 1:3000 희석 </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> 염소 (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF1006 </td><td> 1:200 희석 </td></tr></tbody></table> 정맥 내피 세포 마커 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> 염소 (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF446 </td><td> 1:100 희석 </td></tr></tbody></table> 림프 내피 세포 마커 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> LYVE - 1 # 4 </td><td> 래빗 (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200 희석 </td></tr><tr><td> LYVE - 1 # 4 </td><td> 랫 (M) </td><td> MBL </td><td> D225 - 3 </td><td> 1:200 희석 </td></tr><tr><td> Prox - 1 </td><td> 래빗 (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 희석 </td></tr><tr><td> Prox - 1 </td><td> 염소 (P) </td><td> R &amp; D </td><td> AF2727 </td><td> 1시 50분 희석 </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> 래빗 (P) </td><td> 세포 신호 </td><td> 3366 </td><td> 1, 100 희석 </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> 시리아 햄스터 (M) </td><td> 하이 브리 도마 뱅크 </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200 희석 </td></tr></tbody></table> 평활근 세포 / pericyte 마커 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> αSMA - CY3 </td><td> 마우스 (M) # 5 </td><td> 시그마 </td><td> C - 6198 </td><td> 1:500 희석 # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> 래빗 (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200 희석 </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> 래빗 (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200 희석 </td></tr></tbody></table> GFP 기자에 대한 항체 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> GFP </td><td> 래빗 (P) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 희석 </td></tr><tr><td> GFP </td><td> 랫 (M) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 희석 </td></tr><tr><td> GFP </td><td> 칙 (P) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 희석 </td></tr></tbody></table> LacZ 기자에 대한 항체 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> β - 여자 </td><td> 래빗 (P) </td><td> MP 바이오 메디컬 </td><td> 55,976 </td><td> 1:5000 희석 </td></tr><tr><td> β - 여자 </td><td> 염소 (P) </td><td> AbD Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 희석 </td></tr><tr><td> β - 여자 </td><td> 칙 (P) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200 희석 </td></tr></tbody></table> 주변 축삭에 대한 항체 <table border="1"><tbody><tr><td> 항독소 </td><td> 종 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td><td> 근무 조건 </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> 마우스 (M) # 7 </td><td> 하이 브리 도마 뱅크 </td><td> 2H3 </td><td> 1:200 희석 </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> 마우스 (M) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS - 435P </td><td> 1:500 희석 </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> 래빗 (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 희석 </td></tr></tbody></table> 마이 그 레이션 Schwann 세포에 대한 항체 <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> 래빗 (P) </td><td> 토마스 뮐러의 실험실 # 9 </td><td></td><td> 1:3000 희석 </td></tr></tbody></table> (P) : polyclonal 항체 (M) : 단클론 항체 # 1 : 염소 방지 아르메니아어 햄스터 - Cy3 (잭슨 ImmunoResearch 127-165-160) 항체가 보조 항체로 사용해야합니다. # 2 : 콜라겐 IV 항체가 원위치 하이브리드화 이후 혈관을 감지하는 데 사용할 수 있습니다. # 3 : Neuropilin1 항체가 친절하게 존스 홉킨스 대학의 알렉스 Kolodkin의 실험실에 의해 제공됩니다. 우리는 아직 테스트하지 않았습니다 있지만, 양 안티 인간 Neuropilin1 항체는 R &amp; D (AF3870)에서 사용할 수 있습니다. # 4 : LYVE - 1 항체는 또한 배아 피부에 macrophages의 하위 집합을 감지합니다. # 5 : 안티 αSMA 항체 마우스 IgG2a 단클론 항체이다. # 6 : Cy3 - 복합 αSMA 항체는 초와 함께 실온에서 1 시간 incubated입니다다른 일차 항체에 대한 항체 ondary. # 7 : 2H3 항체가 neurofilament에 대한 마우스 IgG1 단클론 항체이다. # 8 : Tuj1 항체가 신경 세포 특정 클래스 III 베타 tubulin에 대한 마우스 IgG2a 단클론 항체이다. # 9 : BFABP (두뇌 특정 지방산 결합 단백질) 항체가 친절 분자 의학에 대한 최대 - Delbrück - 센터의 토마스 뮐러의 실험실에 의해 제공됩니다.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

이미지에 대한 전체 마운트 immunohistochemical 분석은 전체 vasculature는 morphogenesis을 분기의 세포 메커니즘을 이해하는 데 필수적입니다. 우리는 기존의 원시 모세관 신경 얼기가 계층 브랜츠드 혈관 네트워크에 개편되는 혈관 개발을 연구하기 위해 사지 피부 vasculature 모델을 개발했습니다. 여러 개의 라벨과 함께 전체 - 마운트 공촛점 현미경 특정 형광 마커를 사용하여 내피 세포, pericytes 및 평활근 세포를 포함하여 그대로 혈관뿐만 아니라 자신의 세포 구성 요소의 강력한 이미징을 허용합니다. 유전자 연구와 함께 사지 피부 vasculature 모델의 발전은 혈관 개발 및 patterning의 분자 메커니즘을 이해하고 개선합니다. 사지 피부 vasculature 모델은 말초 신경이 동맥의 차별과 patterning을위한 공간 템플릿을 제공하는 방법을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 동영상이 문서에서는 우리가 혈관 개발의 과정에 따라 수 있습니다 vascularized 배아 기관에 대한 적용 혈관 특정 항체 및 형광 항체 보조와 완전한 혈관을 얼룩이 간단하고 강력한 프로토콜을 설명합니다.

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Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

우리는 전체 마운트 immunohistochemistry를 소개하고 레이저 마우스 배아 사지 피부에 복잡한 혈관 네트워크 형성을 분석하는 데 여러 상표와 공촛점 현미경을 검사합니다.

배아 림브 스킨 Vasculature에 대한 전체 마운트 Immunohistochemical 분석 : 엠브료에 혈관 분기 Morphogenesis를 공부하는 모델 시스템

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

조기 칙 태아의 현장 하이브리드화에서 더블 전체 산

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

칙의 전체 마운트 항체 스테 이닝을위한 방법

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish 전체 마운트 고해상도 더블 형광등 현장에서 하이브 리다이 제이션

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

마우스 배아의 폐 문화, 분기의 분자 메커니즘을 평가하는 시스템

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

전체 산<em&gt; 현장에서</emE11.5 마우스 태아에 E8.5의&gt; 하이브리드

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

무 혈청 전체 배아 배양 시스템에서 마우스 배아 개발

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

사용<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...