Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Мы благодарим К. Гилл за помощь в разведении мыши и ухода и для лабораторных управления. Спасибо также Mukoyama лаборатории членов за техническую помощь. Финансирование было предоставлено Внутренние программы исследований Naitonal института здоровья.

1. Сбор мышиных эмбриональных кожи конечностей (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> Эвтаназии подключен самок утвержденной процедурой. По нашим утвержденный протокол животных, самки эвтаназии СО 2 воздействия, а затем обеспечивается шейки дислокации. Положите животное на своих абсорбирующих бумажно?...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

Сосудистой системы имеет решающее значение для развития органов во время эмбриогенеза, а также для обслуживания органов и репродуктивных функций у взрослых, потому что он поставляет достаточное количество кислорода и питательных веществ к органам. Правильное сосудистой сети хорошо ?...

Антитела Пан-эндотелиальных клеток маркера <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Армянский хомячка (М) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 разбавления # 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Крыса (М) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 разбавления </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> Крыса (М) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> Крыса (М) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 разбавления </td></tr><tr><td> Коллаген IV </td><td> Кролик (Р) </td><td> Абд Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 разбавления # 2 </td></tr></tbody></table> Артериальная эндотелиальных маркер ячейки <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> Кролик (Р) </td><td> Алексей Колодкин в лаборатории № 3 </td><td></td><td> 1:3000 разбавления </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> Коза (Р) </td><td> R &amp; D </td><td> AF1006 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr></tbody></table> Венозная эндотелиальных маркер ячейки <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> Коза (Р) </td><td> R &amp; D </td><td> AF446 </td><td> 1:100 разбавления </td></tr></tbody></table> Лимфатический эндотелиальных маркер ячейки <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> LYVE-1 № 4 </td><td> Кролик (Р) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr><tr><td> LYVE-1 № 4 </td><td> Крыса (М) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Кролик (Р) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 разбавления </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Коза (Р) </td><td> R &amp; D </td><td> AF2727 </td><td> 1:50 разбавления </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> Кролик (Р) </td><td> Сотовые сигнализации </td><td> 3366 </td><td> 1, 100 разбавления </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> Сирийский хомячок (М) </td><td> Гибридома банка </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr></tbody></table> Гладкие мышечные клетки / перицитов маркера <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> αSMA-Cу3 </td><td> Мышь (М) # 5 </td><td> Сигма </td><td> с-6198 </td><td> 1:500 разбавления # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> Кролик (Р) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> Кролик (Р) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr></tbody></table> Антитела к репортеру GFP <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Кролик (Р) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 разбавления </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Крыса (М) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 разбавления </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Чик (Р) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 разбавления </td></tr></tbody></table> Антитела к репортеру LacZ <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> β-гал </td><td> Кролик (Р) </td><td> Депутат биомедицинских </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 разбавления </td></tr><tr><td> β-гал </td><td> Коза (Р) </td><td> Абд Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 разбавления </td></tr><tr><td> β-гал </td><td> Чик (Р) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr></tbody></table> Антитела для периферийных аксон <table border="1"><tbody><tr><td> Антитело </td><td> Вид </td><td> Компания </td><td> Catalogue # </td><td> Рабочее состояние </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> Мышь (М) # 7 </td><td> Гибридома банка </td><td> 2H3 </td><td> 1:200 разбавления </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> Мышь (М) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td><td> 1:500 разбавления </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> Кролик (Р) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 разбавления </td></tr></tbody></table> Антитела для мигрирующих клеток Шванн <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> Кролик (Р) </td><td> Томас Мюллер лаборатории # 9 </td><td></td><td> 1:3000 разбавления </td></tr></tbody></table> (Р): поликлональных антител (М): моноклональное антитело # 1: Коза антиармянской хомяка-Cy3 (Jackson ImmunoResearch 127-165-160) антитела должны быть использованы в качестве вторичных антител. # 2: антител коллагена IV может быть использован для обнаружения кровеносных сосудов после на месте гибридизации. # 3: антитела Neuropilin1 предоставлена ​​на тестирование лаборатории Алекс Колодкин в Университете Джона Хопкинса. Овцы против человеческих антител Neuropilin1 доступен в R &amp; D (AF3870), хотя мы не проверял еще. # 4: LYVE-1 антител также обнаружить подмножество макрофагов в эмбриональной кожи. # 5: анти-αSMA антитела мыши IgG2a моноклональных антител. # 6: Cy-3-сопряженных αSMA антитела инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре вместе с секвторичных антител для других первичных антител. # 7: 2H3 антитела мыши IgG1 моноклональные антитела против нейрофиламентов. # 8: Tuj1 антитела мыши IgG2a моноклональное антитело против Нейрон-определенного класса III бета-тубулина. # 9: BFABP (мозгоспецифических жирные кислоты связывающий белок) Антитела любезно предоставленные лабораторией Томас Мюллер в Макс-Дельбрюк-Центр молекулярной медицины.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

Всего монтажа иммуногистохимического анализа для работы с изображениями всего сосудистая сеть имеет решающее значение для понимания клеточных механизмов ветвления морфогенеза. Мы разработали сосудистой коже конечностей модель для изучения развития сосудов, в которых уже существующих примитивных капиллярного сплетения реорганизован в иерархически разветвленной сосудистой сети. Всего монтажа конфокальной микроскопии с несколькими маркировки позволяет надежной визуализации интактных кровеносных сосудов, а также их клеточных компонентов, включая эндотелиальные клетки, перицитов и гладкомышечных клеток, с использованием специфических флуоресцентных маркеров. Достижения в этой сосудистой коже конечностей модель с генетические исследования лучшему пониманию молекулярных механизмов развития сосудов и кучность стрельбы. Сосудистой коже конечностей модель была использована для изучения того, как периферические нервы обеспечивают пространственную шаблон для дифференциации и структурирования артерий. Это видео статье описан простой и надежный протокол пятно нетронутыми сосуды с сосудистыми специфических антител и флуоресцентного вторичными антителами, которая применима для васкуляризированной органов эмбриональных, где мы имеем возможность следить за процессом развития сосудов.

Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Введем целом монтажа иммуногистохимии и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии с несколькими маркировки для анализа сложных сосудистых формирование сети в мышиных эмбриональных коже конечностей.

Всего монтажа иммуногистохимического анализа для Эмбриональные сосудистой кожи конечностей: модельная система для исследования сосудистой Ветвление Морфогенез в зародыше

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Дважды Всего горе на месте гибридизация раннего куриных эмбрионов

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Метод полного окрашивания антител горе в Чик

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Данио рерио Всего горе высокого разрешения двумя люминесцентными В Ситу Гибридизация

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Мышиных эмбриональных легких культуры, системы оценки Молекулярные механизмы Ветвление

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Всего горы<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация E8.5 в E11.5 эмбрионов мыши

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Do-It-Yourself Устройство для восстановления криоконсервированных образцов случайно уронил в криогенных резервуаров

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Система<em&gt; Бывших естественных условиях</em&gt; Культивирования эмбриональных поджелудочной железы

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Мышь эмбрионального развития целая культура системе эмбрионов бессывороточных

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Анализ апоптоза у эмбрионов данио рерио по целом монтажа иммунофлуоресценции для обнаружения активированного каспазы 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...