Name: whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo
Uploaded: 2011-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

K. Gill, fare yetiştirme ve bakımı ile ilgili yardım ve laboratuvar yönetimi için teşekkür ederiz. Teknik yardım için Mukoyama laboratuar üyeleri de teşekkür ederiz. Finansman, Sağlık Naitonal Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından sağlanmıştır.

1. Toplama Fare Embriyonik Ekstremite Skin (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> Euthanize Onaylanan prosedür kadın takılı. Onaylı hayvan protokole göre, kadınlarda CO 2 maruz tarafından ötenazi ve sonra servikal dislokasyon ile güvence altına. Emici kağıt havlu üzerine yatırın ve hayvan sıkmak şişeden% 70 EtOH / H 2 O iyice ıslatın. </li><li> Rahim sağlam inceleyin ve kan yıkamak için buz Hanks &#39;Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) içeren 100 x 15 mm Petri kabı yerleştirin. </li><li>...

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

Organlara yeterli oksijen ve besin kaynakları nedeniyle vasküler sistem, embriyogenez sırasında yanı sıra yetişkinler organ bakım ve üreme fonksiyonları için organ gelişimi için çok önemlidir. Uygun damar ağı, önceden mevcut olan kapiller ağ çok dallı ve hiyerarşik yapıları ile yeniden düzenlenmiş olan anjiyogenez karmaşık ve çok adımlı işlemler ile kurulmuştur. Birçok eseri çeşitli moleküller bu süreçlere dahil olduğu gösterilmiş olsa da, organ veya bileşenleri vasküler dalla...

Antikorlar Pan-endotelyal hücre belirteci <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Ermeni, hamster (M) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 dilüsyon # 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Rat (M) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> Kollajen IV. </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abd Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 dilüsyon # 2 </td></tr></tbody></table> Arter endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Alex Kolodkin laboratuvar # 3 </td><td></td><td> 1:3000 dilüsyon </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF1006 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Venöz endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF446 </td><td> 1:100 dilüsyon </td></tr></tbody></table> Lenfatik endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> Rat (M) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF2727 </td><td> 01:50 seyreltme </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Hücre Sinyalizasyonu </td><td> 3366 </td><td> 1; 100 seyreltme </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> Suriye hamsteri (M) </td><td> Hibridoma Bankası </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Düz kas hücre / pericyte işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> αSMA-Cy3 </td><td> Fare (M) # 5 </td><td> Sigma </td><td> C-6198 </td><td> 1:500 dilüsyon # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> GFP muhabiri için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Tavşan (P) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Rat (M) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Civciv (P) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr></tbody></table> LacZ muhabiri için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Tavşan (P) </td><td> MP Biyomedikal </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 dilüsyon </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Keçi (P) </td><td> Abd Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 dilüsyon </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Civciv (P) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Periferik akson için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> Fare (M) # 7 </td><td> Hibridoma Bankası </td><td> 2H3 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> Fare (M) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td><td> 1:500 dilüsyon </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr></tbody></table> Schwann hücreleri göç için antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> Tavşan (P) </td><td> Thomas Müller laboratuvar # 9 </td><td></td><td> 1:3000 dilüsyon </td></tr></tbody></table> (P): poliklonal antikor (M): monoklonal antikor # 1: keçi anti-Ermeni hamster Cy3 (Jackson ImmunoResearch 127-165-160) antikor ikincil bir antikor olarak kullanılmalıdır. # 2: Kollajen IV antikor in situ hibridizasyon sonra kan damarlarını tespit etmek için kullanılabilir. # 3: Neuropilin1 antikor nazik Alex Kolodkin Johns Hopkins Üniversitesi laboratuvarı tarafından sağlanmaktadır. Koyun anti-insan Neuropilin1 antikor, henüz test edilmemiş olmasına rağmen Ar-Ge (AF3870) kullanılabilir. # 4: LYVE-1 antikorları da embriyonik deri makrofaj bir alt kümesi algılar. # 5: anti-αSMA antikor fare IgG2a monoklonal antikor. # 6: Cy3 konjuge αSMA antikor sn birlikte oda sıcaklığında 1 saat inkübediğer primer antikorları için ikincil antikorlar. # 7: 2H3 antikor nörofilaman karşı fare IgG1 monoklonal antikor. # 8: Tuj1 antikor Nöron-spesifik sınıf III beta-tubulin karşı fare monoklonal antikor IgG2a. # 9: BFABP (beyin özel yağ asidi bağlayıcı protein) antikoru nazik Thomas Müller Max-Delbrück Merkezi Moleküler Tıp laboratuarı tarafından sağlanmaktadır.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

Tüm montaj immünohistokimyasal analiz görüntüleme için tüm damarsal morfolojilerinden dallanma hücresel mekanizmaları anlamak için çok önemlidir. Biz önceden varolan ilkel kapiller pleksus hiyerarşik dallı bir damar ağına yeniden organize olduğu damar gelişimini incelemek için ekstremite deri vaskülatürü modeli geliştirdik. Birden fazla etiketleme ile tüm montaj konfokal mikroskopi belirli floresan belirteçleri kullanarak, endotel hücreleri perisitlerden ve düz kas hücreleri de dahil olmak üzere, sağlam kan damarlarının yanı sıra hücresel bileşenleri, güçlü görüntüleme için izin verir. Genetik çalışmalar ile bu uzuv deri vaskülatürü modeli gelişmeler, vasküler gelişimi ve desenlendirme moleküler mekanizmaları anlamak düzeldi. Ekstremite deri vaskülatürü modeli, periferik sinirleri arterlerin farklılaşma ve desenlendirme için mekansal bir şablon nasıl çalışmak için kullanılır olmuştur. Bu video makalede, vasküler gelişim sürecini takip edebilecek vaskülarize embriyonik organları için geçerli olan vasküler spesifik antikorlar ve floresan ikincil antikorlar, sağlam kan damarları leke için basit ve sağlam bir protokol tanımlamaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Biz bir bütün montaj immünohistokimya tanıtmak ve lazer fare embriyonik ekstremite cilt karmaşık damar ağı oluşumunu analiz etmek için birden fazla etiketleme ile konfokal mikroskopi tarama.

Embriyonik Ekstremite Cilt damarları Tüm montaj İmmünohistokimyasal Analizi: Embriyo vasküler dallanma Morphogenesis Eğitim Model Sistemi

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Research

JoVE Journal

Biology

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Erken Civciv Embriyolar in situ Hibridizasyon Çift Tüm Dağı

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Chick Tüm Dağı Antikor Boyama Yöntemi

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebra balığı Tüm Dağı Yüksek Çözünürlüklü Çift Floresan Yerinde Hibridizasyon

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Fare Embriyonik Akciğer Kültür, Dallanma Moleküler Mekanizmalar değerlendirin Bir Sistem

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Tüm Dağı<em&gt; In situ</emE11.5 fare embriyolarına E8.5 ve&gt; Hibridizasyon

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Için bir sistem<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Pankreas&gt; ekimi

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Serumsuz Tüm Embriyo Kültür Sistemde Fare Embriyonik Development

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Aktif Kaspaz 3 Algılama Tüm montaj immünofloresans tarafından Zebra balığı Embriyolar Apaptozun Analizi

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...