Name: passaging human neural stem cells
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passaging Human Neural Stem Cells at JoVE.com

<p> Författarna erkänner tacksamt Dr Philip H. Schwartz av den nationella människorättskommissionen Neural Stem Cell Resurs vid barnsjukhuset i Orange County Forskningscentralen för att ge hNSPCs och inledande undervisning i sin odling. </p>

<p class="jove_content"> <em>Obs:</em> För rutinmässig odling av våra hNSPCs, vi ändrar 50-100% av media varannan dag och oftast passagen dem 1:02 gång i veckan. Kulturen medier innehåller 20% BIT-9500, 1X antibiotika / antimykotika och tillväxtfaktorer (EGF, FGF och PDGF vardera 40 ng / ml) i DMEM: F12 basen medier. </p><p class="jove_step"> Förbereda Coated Flask och ta avstånd Celler </p><ol><li> För att förbereda nya flaskor för passerats celler, päls T25 kolvar med 10 mikrogram / ml humant fibronektin i EMEM i 4 timmar eller ?...

<ol>
	<li>Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins.">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurosci. Res</em>. <b>83</b>, 845-856 (2006).</li><li>Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cell+culture.">Neural stem cell culture.</a> <em style='font-style: italic'>Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide</em>. , (2007).</li><li>Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture.+Progenitor+cells+from+human+brain+after+death.">Cell culture. Progenitor cells from human brain after death.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>411</b>, 42-43 (2001).</li><li>Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O'Dowd, D. K., Klassen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+neural+progenitor+cells+from+post-mortem+human+cortex.">Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex.</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Res</em>. <b>74</b>, 838-851 (2003).</li></ol>

<p> Vi har funnit att detta protokoll ger tillförlitliga kulturer hNSPCs. En kritisk faktor för våra celler är att de måste hållas som tämligen tät kulturer och kan inte passerats till den grad att cellerna är gles. I våra händer, glesa kulturer växer mycket långsamt eller helt upphör att dela sig. Av denna anledning delar vi oftast våra kulturer 1:2 eller 1:3 när en kultur är mycket tät. Beläggning ytan av en kultur fat med fibronektin är viktigt eftersom det främjar god cellbindning och migration, men till skillnad från ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Stem Cell Technologies</td>
<td>09500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240-062</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM:F12 (1X)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11330-032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EMEM (1X)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>MT-10-010-CV</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF, human basic recombinant</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>100-18B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PDGF-AB</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>100-00AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EGF, human recombinant</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>CB40052</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>Cell Culture Flask, 25 cm2</td>
<td>Tool</td>
<td>Corning</td>
<td>10-126-28</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>Fibronectin, human, natural</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>CB40008A</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>Human Neural Stem/Precursor Cells</td>
<td>Cells</td>
<td>National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Dissociation Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13150-016</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

passaging human neural stem cells

<p class="jove_content">Förmågan att manipulera mänskliga neurala stamceller / föregångare celler (hNSPCs) in vitro ger en möjlighet att undersöka deras nytta som cell transplantationer för terapeutiska ändamål samt att utforska många grundläggande processer av mänskliga neurala utveckling och patologi. Detta protokoll utgör en enkel metod för odling och passaging hNSPCs i hopp om att standardisera denna teknik och ökad reproducerbarhet av mänskliga stamceller. Det hNSPCs vi använder var isolerade från avliden efter födsel hjärnans cortex av National Human Neural Stem Cell Resurs och vuxit som anhängare kulturer på flaskor belagda med fibronektin (Palmer et al, 2001;.. Schwartz et al, 2003). Vi kulturen våra hNSPCs i en DMEM: F12 serumfritt medier kompletteras med fonden, FGF och PDGF och passagen dem 01:02 ungefär var sjunde dag. Med hjälp av dessa villkor, majoriteten av cellerna i kulturen upprätthålla en bipolär morfologi och uttrycka markörer för odifferentierade neurala stamceller (som nestin och sox2).</p>

Watch this Scientific Journal Video about Passaging Human Neural Stem Cells at JoVE.com

Passaging Human Neural Stem Cells

<p class="jove_content">Förmågan att manipulera mänskliga neurala stamceller / föregångare celler (hNSPCs) in vitro gör det möjligt att undersöka deras nytta som cell transplantationer i terapeutiskt syfte och för att utforska människans neurala utveckling. Detta protokoll presenteras en metod för odling och passaging hNSPCs i hopp om att öka reproducerbarhet av mänskliga stamceller.</p>

Passaging mänskliga neurala stamceller

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Passaging nyanser mänskliga embryonala stamceller-linjer med Trypsin

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Spridning av mänskliga embryonala stamceller (ES-celler)

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

Transfecting mänskliga neurala stamceller med Amaxa Nucleofector

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Counting Human Neural Stem Cells

Räkna mänskliga neurala stamceller

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immuncytokemi: Mänskliga neurala stamceller

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivering av mänskliga embryonala stamceller genom Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Mus Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) kulturer

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Kromatin Immunoprecipitation från mänskliga embryonala stamcellslinjer

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Kultur och underhåll av mänskliga embryonala stamcellslinjer

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Nedfrysning och upptining mänskliga embryonala stamcellslinjer

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...