Name: accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay
Uploaded: 2011-03-01T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃŽÂ² using a Whole Blood Stimulation Assay at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch die Interne Research Program des National Institute of Arthritis and Bewegungsapparates und Hautkrankheiten der National Institutes of Health unterstützt.

1. Sammlung von Vollblut <ol><li> Besorgen Sie sich ein Minimum von 10 ml peripheres Blut von Betroffenen sowie Alter und Geschlecht gegenübergestellten gesunden Kontrollgruppe. Das venöse Blut muss in Natrium-Heparin enthaltende Vacutainer Blutentnahmeröhrchen gesammelt werden, anstatt die andere Gerinnungshemmer wie EDTA, und umgekehrt mehrmals, um die ordnungsgemäße Mischung mit dem Natrium-Heparin zu gewährleisten. Beachten Sie, dass 10 mL der minimalen Volumen von Vollblut für die Beschichtung Proben in zw...

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	<li>Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+guardians+of+the+body.">The inflammasomes: guardians of the body.</a> Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).</li><li>Thurm, C. W., Halsey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+production+using+whole+blood.">Measurement of cytokine production using whole blood.</a> Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 .</li><li>Mariathasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopyrin+activates+the+inflammasome+in+response+to+toxins+and+ATP.">Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP.</a> Nature. 440, 228-232 (2006).</li><li>Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1+pathways+in+inflammation+and+human+diseases.">IL-1 pathways in inflammation and human diseases.</a> Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).</li><li>Franchi, L., Elgenbrod, T., Mu&#241;oz-Planillo, R., Nu&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasome:+a+caspase-1-activation+platform+that+regulates+immune+responses+and+disease+pathogenesis.">The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis.</a> Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).</li><li>Sims, J. E., Smith, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IL-1+family:+regulators+of+immunity.">The IL-1 family: regulators of immunity.</a> Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).</li><li>Haug, R., Jo&#248;, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+production+and+pattern+recognition+receptor+(PRR)+expression+in+whole+blood+stimulated+with+pathogen-associated+molecular+patterns+(PAMPs.">Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs.</a> Cytokine. 32, 304-315 (2005).</li><li>Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+requirement+for+the+activation+of+the+inflammasome+for+processing+and+release+of+IL-1bin+monocytes+and+macrophages.">Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages.</a> Blood. 113, 2324-2335 (2009).</li><li>Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+mechanisms+of+activation+and+function.">The inflammasomes: mechanisms of activation and function.</a> Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).</li><li>Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horror+autoinflammaticus:+the+molecular+pathophysiology+of+autoinflammtory+disease.">Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease.</a> Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).</li></ol>

Die Vollblut-Assay beschrieben ist eine einfache Methode, die genauer imitiert physiologischen Bedingungen zu anderen Techniken, die Zell-Isolierung und umfangreiche Stichprobe Bearbeitung und Manipulation erfordern würde verglichen. Diese Methode nutzt die Cellometer Vision mit AO zum weißen Blutkörperchen im Vollblut zu zählen und daher bietet die Möglichkeit, präzise Standardisierung Proben auf Zell-Zahlen. Es ist zu beachten, dass für diesen Test, Vollblut in Heparin-Natrium-Röhr...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium Heparin Blood Collection Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>366480</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640 Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>21870-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acridine Orange</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A3568</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellometer Vision</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Cellometer Cell Counting Chambers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>CHT4-SD100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>24-well Tissue Culture Plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Costar</td>
<td>3524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Pure E. coli K12 LPS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>InvivoGen</td>
<td>tlrl-eklps</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenosine 5&#180;-tripohasphate disodium salt hydrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A26209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-plex 200 system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay

Entzündliche Prozesse, die sich aus der Sekretion von löslichen Mediatoren von Immunzellen, die verschiedenen Erscheinungsformen in der Haut, Gelenke und andere Gewebe sowie veränderte Zytokin-Homöostase führen. Das angeborene Immunsystem spielt eine entscheidende Rolle bei der Anerkennung Krankheitserreger und andere endogene Gefahr Reize. Einer der wichtigsten Zytokine durch angeborene Immunsystem Zellen freigesetzt wird Interleukin (IL) -1. Daher verwenden wir eine Vollblut-Stimulation Assays, um die Sekretion von inflammatorischen Zytokinen zu messen und gezielt der pro-inflammatorischen Zytokine IL-1β 1, 2, 3. Patienten mit genetischen Störungen des angeborenen Immunsystems verursacht autoinflammatorisches Syndrome zeigen eine übertriebene Version von reifen IL-1β nach Stimulation mit LPS allein. Um das angeborene Immunsystem Komponente der Patienten, die mit entzündlichen-assoziierten Erkrankungen derzeit zu bewerten, verwenden wir einen spezifischen Immunoassay für die zelluläre Immunantwort zu pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), wie die gram-negative bakterielle Endotoxine zu erkennen, Lipopolysaccharid (LPS ). Diese PAMPs werden durch Erreger recognition receptors (PRR), die auf die Zellen des angeborenen Immunsystems 4, 5, 6, 7 gefunden werden anerkannt. Eine primäre Signal, LPS, in Verbindung mit einem sekundären Signal, ATP, ist notwendig für die Aktivierung der Inflammasom, ein Multiproteinkomplex, dass Pro-IL-1β Prozesse ihrer reifen, bioaktive Form 4, 5, 6, 8, 9, 10. Die Vollblut-Assay erfordert nur minimale Probe Manipulation Zytokin-Produktion zu bewerten, wenn andere Methoden, die arbeitsintensive Isolierung und Kultivierung von spezifischen Zellpopulationen erfordern verglichen. Diese Methode unterscheidet sich von anderen Vollblut Stimulation Assays, sondern als Verdünnen von Proben mit einem Verhältnis von RPMI-Medium, führen wir eine weiße Blutzelle direkt count aus verdünntem Vollblut und damit zu stimulieren eine bekannte Anzahl von weißen Blutzellen in Kultur 2. Die Ergebnisse dieser besonderen Vollblut-Assay zeigen eine neuartige Technik nützlich bei der Aufklärung Patientengruppen präsentiert mit autoinflammatorisches Pathophysiologien.

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Wir beschreiben eine einfache Immunoassay auf die Produktion von pro-inflammatorischen Zytokinen wie IL-1 beta Produktion, bei Patienten mit autoinflammatorisches Phänotypen zu messen. Durch Aktivierung von Zellen in Vollblut-Kulturen mit pathogen-associated molecular patterns, speziell mit Lipopolysaccharid kann Zytokinsekretion bequem in Vollblut Überstände ausgewertet werden.

Genaue und einfache Messung der pro-inflammatorischen Zytokins IL-1β mit einem Vollblut Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Evaluation of Vascular Anastomoses in Monochorionic Placenta using Colored Dye

Präzise und einfache Auswertung der Gefäßanastomosen in Monochoriale Placenta mit Farbstoff

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia ...

Forschung

Medizin

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

Mit Hilfe Transkranielle Magnetstimulation auf die menschliche neuromuskuläre System zu studieren

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Epidurale Intrakranielle Druckmessung in Ratten mit einem LWL-Druckaufnehmer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Schnelle Point-of-Care-Test von Enoxaparin Gerinnungshemmer Wirksamkeit im Vollblut

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Exzitotoxische Stimulation der Hirn Microslices als<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell der Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Fast and Accurate Exhaled Breath Ammonia Measurement

Schnelle und genaue Messung der ausgeatmeten Luft Ammoniak

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

Echtzeit-Zytotoxizitätsassays in menschlichem Vollblut

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Eine einfache Vorrichtung, um schnell vorbereiten Whole Mounts des Mausdarm

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Mit Saccadometry mit Deep Brain Stimulation Normale und Pathologische Funktion des Gehirns zu studieren

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

Langzeit-Blutdruckmessung in sich frei bewegenden Mäuse Telemetrie

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...