Name: accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay
Uploaded: 2011-03-01T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃŽÂ² using a Whole Blood Stimulation Assay at JoVE.com

Questa ricerca è stata sostenuta dal Programma di Ricerca Intramural dell&#39;Istituto Nazionale di artrite e malattie muscolo-scheletriche e della pelle del National Institutes of Health.

1. Raccolta di sangue intero <ol><li> Ottenere un minimo di 10 ml di sangue periferico di individui affetti così come età e sesso controlli appaiati sano. Il sangue venoso devono essere raccolti in provette di sodio eparina vacutainer raccolta, piuttosto che utilizzare altri anticoagulanti quali EDTA, e capovolta diverse volte per garantire la corretta miscela con l&#39;eparina sodica. Si noti che 10 ml è il volume minimo di sangue intero richiesta per i campioni placcatura in duplice copia a questo particolare dos...

<ol>
	<li>Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+guardians+of+the+body.">The inflammasomes: guardians of the body.</a> Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).</li><li>Thurm, C. W., Halsey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+production+using+whole+blood.">Measurement of cytokine production using whole blood.</a> Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 .</li><li>Mariathasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopyrin+activates+the+inflammasome+in+response+to+toxins+and+ATP.">Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP.</a> Nature. 440, 228-232 (2006).</li><li>Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1+pathways+in+inflammation+and+human+diseases.">IL-1 pathways in inflammation and human diseases.</a> Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).</li><li>Franchi, L., Elgenbrod, T., Mu&#241;oz-Planillo, R., Nu&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasome:+a+caspase-1-activation+platform+that+regulates+immune+responses+and+disease+pathogenesis.">The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis.</a> Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).</li><li>Sims, J. E., Smith, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IL-1+family:+regulators+of+immunity.">The IL-1 family: regulators of immunity.</a> Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).</li><li>Haug, R., Jo&#248;, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+production+and+pattern+recognition+receptor+(PRR)+expression+in+whole+blood+stimulated+with+pathogen-associated+molecular+patterns+(PAMPs.">Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs.</a> Cytokine. 32, 304-315 (2005).</li><li>Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+requirement+for+the+activation+of+the+inflammasome+for+processing+and+release+of+IL-1bin+monocytes+and+macrophages.">Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages.</a> Blood. 113, 2324-2335 (2009).</li><li>Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+mechanisms+of+activation+and+function.">The inflammasomes: mechanisms of activation and function.</a> Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).</li><li>Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horror+autoinflammaticus:+the+molecular+pathophysiology+of+autoinflammtory+disease.">Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease.</a> Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).</li></ol>

Il test sangue intero descritto è un metodo semplice che più da vicino riproduce condizioni fisiologiche rispetto ad altre tecniche che richiedono l&#39;isolamento delle cellule e l&#39;elaborazione del campione esteso e manipolazione. Questo metodo utilizza la Visione Cellometer con AO per contare i globuli bianchi nel sangue e, quindi, fornisce un modo per standardizzare accuratamente i campioni in base ai numeri cell. E &#39;da notare che per questa analisi, sangue intero devono essere ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium Heparin Blood Collection Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>366480</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640 Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>21870-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acridine Orange</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A3568</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellometer Vision</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Cellometer Cell Counting Chambers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>CHT4-SD100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>24-well Tissue Culture Plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Costar</td>
<td>3524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Pure E. coli K12 LPS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>InvivoGen</td>
<td>tlrl-eklps</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenosine 5&#180;-tripohasphate disodium salt hydrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A26209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-plex 200 system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay

Processi infiammatori derivanti dalla secrezione di mediatori solubili da parte delle cellule immunitarie, portare a varie manifestazioni in pelle, le articolazioni e altri tessuti così come omeostasi citochina alterato. Il sistema immunitario innato ha un ruolo cruciale nel riconoscere gli agenti patogeni e altri stimoli endogeni pericolo. Una delle principali citochine rilasciate dalle cellule del sistema immunitario innato è interleuchina (IL) -1. Quindi, utilizziamo un intero saggio stimolazione del sangue per misurare la secrezione di citochine infiammatorie e in particolare della citochina pro-infiammatoria IL-1β 1, 2, 3. I pazienti con disfunzioni genetiche del sistema immunitario innato che causano sindromi autoinfiammatorie mostrano una versione esagerata di IL-1β matura sulla stimolazione con LPS solo. Al fine di valutare la componente immunitaria innata di pazienti che presentano patologie infiammatorie associate, usiamo un immunodosaggio specifico per rilevare le risposte immunitarie cellulari ai modelli molecolari patogeni associati (PAMPs), come il gram-negativi endotossine batteriche, lipopolisaccaride (LPS ). Queste PAMPs sono riconosciuti dai recettori di riconoscimento dei patogeni (PRR), che si trovano sulle cellule del sistema immunitario innato 4, 5, 6, 7. Un segnale primario, LPS, in concomitanza con un segnale secondario, ATP, è necessario per l&#39;attivazione del inflammasome, un complesso multiproteico che i processi pro-IL-1β alla sua maturazione, forma bioattivi 4, 5, 6, 8, 9, 10. Il test di sangue intero richiede la manipolazione minima del campione per valutare la produzione di citochine rispetto ad altri metodi che richiedono l&#39;isolamento e la coltura intensiva del lavoro di popolazioni di cellule specifiche. Questo metodo si differenzia da altre analisi del sangue intero stimolazione; piuttosto che diluire i campioni con un rapporto di RPMI mezzi di comunicazione, eseguiamo un globulo bianco contare direttamente dal sangue intero diluito e, quindi, stimolare un determinato numero di globuli bianchi nella cultura 2. I risultati di questo test particolare sangue intero dimostrare una nuova tecnica utile a chiarire coorti di pazienti affetti da pathophysiologies autoinfiammatorie.

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Descriviamo un immunodosaggio semplice per misurare la produzione di citochine pro-infiammatorie, come IL-1 beta di produzione, in pazienti con fenotipi autoinfiammatorie. Attivando le cellule in colture di sangue intero con i modelli molecolari patogeni associati, in particolare con lipopolisaccaride, la secrezione di citochine possono essere convenientemente valutati in surnatanti di sangue intero.

Misurazione accurata e semplice della citochina pro-infiammatoria IL-1β utilizzando un intero saggio stimolazione del sangue

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

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