Name: accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay
Uploaded: 2011-03-01T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃŽÂ² using a Whole Blood Stimulation Assay at JoVE.com

Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Artrit ve Kas-iskelet ve Cilt Hastalıkları Ulusal Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.

1. Tam Kan Toplanması <ol><li> Etkilenen bireylerin yanı sıra yaş ve cinsiyet eşleştirilmiş sağlıklı kontroller en az 10 ml periferik kan alın. Venöz kan sodyum heparin ile uygun bir karışım sağlamak için diğer antikoagülanlar, EDTA, ve ters birkaç kez kullanarak daha ziyade, sodyum heparin vacutainer kan alma tüpleri içine alınmalıdır. 10 ml tam kan, bu özel tahlil için yinelenen kaplama örnekleri için gerekli minimum hacmi olduğunu unutmayın. </li><li> Örnekleri, en iyi sonuçlar içi...

<ol>
	<li>Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+guardians+of+the+body.">The inflammasomes: guardians of the body.</a> Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).</li><li>Thurm, C. W., Halsey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cytokine+production+using+whole+blood.">Measurement of cytokine production using whole blood.</a> Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 .</li><li>Mariathasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopyrin+activates+the+inflammasome+in+response+to+toxins+and+ATP.">Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP.</a> Nature. 440, 228-232 (2006).</li><li>Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1+pathways+in+inflammation+and+human+diseases.">IL-1 pathways in inflammation and human diseases.</a> Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).</li><li>Franchi, L., Elgenbrod, T., Mu&#241;oz-Planillo, R., Nu&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasome:+a+caspase-1-activation+platform+that+regulates+immune+responses+and+disease+pathogenesis.">The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis.</a> Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).</li><li>Sims, J. E., Smith, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IL-1+family:+regulators+of+immunity.">The IL-1 family: regulators of immunity.</a> Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).</li><li>Haug, R., Jo&#248;, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+production+and+pattern+recognition+receptor+(PRR)+expression+in+whole+blood+stimulated+with+pathogen-associated+molecular+patterns+(PAMPs.">Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs.</a> Cytokine. 32, 304-315 (2005).</li><li>Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+requirement+for+the+activation+of+the+inflammasome+for+processing+and+release+of+IL-1bin+monocytes+and+macrophages.">Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages.</a> Blood. 113, 2324-2335 (2009).</li><li>Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammasomes:+mechanisms+of+activation+and+function.">The inflammasomes: mechanisms of activation and function.</a> Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).</li><li>Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horror+autoinflammaticus:+the+molecular+pathophysiology+of+autoinflammtory+disease.">Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease.</a> Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).</li></ol>

Açıklanan tüm kan testi, hücre izolasyonu ve geniş bir örnek işleme ve manipülasyon gerektirir diğer tekniklere göre daha fizyolojik koşulları yakından taklit eden basit bir yöntem. Bu yöntem, beyaz kan hücrelerinin tüm kan sayımı ve bu nedenle, doğru hücre sayıları dayalı örnekleri standartlaştırmak için bir yol sağlar AO ile Cellometer Vizyon kullanır. Bu testte, tam kan, diğer antikoagülanlar kalsiyum şelatlar bilinen sodyum heparin toplama tüpleri içine...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sodium Heparin Blood Collection Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>366480</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640 Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>21870-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acridine Orange</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A3568</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellometer Vision</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Cellometer Cell Counting Chambers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom Bioscience</td>
<td>CHT4-SD100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>24-well Tissue Culture Plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Costar</td>
<td>3524</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Pure E. coli K12 LPS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>InvivoGen</td>
<td>tlrl-eklps</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenosine 5&#180;-tripohasphate disodium salt hydrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A26209</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-plex 200 system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contact company for instrument information</td>
</tr>
<tr>
<td>Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

accurate and simple measurement of the pro-inflammatory cytokine il-1&beta; using a whole blood stimulation assay

İnflamatuar süreçleri, bağışıklık hücreleri tarafından çözünür mediatörlerin salgılanmasını kaynaklanan cilt, eklemler ve diğer dokular gibi değişmiş sitokin homeostazı çeşitli tezahürleri yol. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi, patojenler ve diğer endojen tehlike uyaranlara tanıma çok önemli bir rol oynar. Doğuştan gelen bağışıklık hücreleri tarafından yayımlanan önemli sitokinlerin biri İnterlökin (IL) -1. Bu nedenle, inflamatuvar sitokinlerin salgılanmasını ölçmek için ve özellikle pro-inflamatuar sitokin IL-1β 1, 2, 3, tam kan stimülasyon tahlil kullanmaktadır. Autoinflammatory sendromlar neden olan doğuştan gelen bağışıklık sisteminin genetik işlev bozuklukları olan hastalar sadece LPS ile uyarılması üzerine IL-1β olgun abartılı bir sürümü göstermektedir. Doğuştan gelen bağışıklık bileşeni ile ilişkili inflamatuar patolojileri ile başvuran hastaların değerlendirilmesi amacıyla, gram-negatif bakteriyel endotoksin gibi patojen ilişkili moleküler kalıplarını (PAMPs), hücresel immün yanıtları tespit etmek için belirli bir immunoassay, lipopolisakkarit (LPS .) Bu PAMPs, doğuştan gelen bağışıklık sistemi 4, 5, 6, 7 hücreleri üzerinde bulunan patojen tanıma reseptörleri (PRRs) tarafından kabul edilmektedir . Ile birlikte ikincil bir sinyal, ATP, inflammasome, olgun, biyoaktif formda 4, 5, 6, 8, 9 pro-IL-1β işlediği bir multiprotein kompleksinin aktivasyonu için gerekli bir temel sinyal, LPS, 10 Tam kan tahlil belirli hücre popülasyonlarının emek yoğun izolasyon ve kültür gerektiren diğer yöntemleri ile kıyaslandığında sitokin üretimini değerlendirmek için minimum numune manipülasyon gerektirir. Bu yöntem diğer tüm kan stimülasyon testleri farklıdır; RPMI medya oranına sahip numunelerin seyreltilmesi daha ziyade, bir beyaz kan hücresi doğrudan seyreltilmiş tam kan sayımı ve bu nedenle, kültür 2 beyaz kan hücrelerinin sayısı bilinen bir teşvik gerçekleştirmek. Özellikle tüm bu kan testinin sonuçları autoinflammatory pathophysiologies ile başvuran hasta kohortlarında nedenlerine açıklık kullanışlı yeni bir teknik ortaya koymaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃŽÂ² using a Whole Blood Stimulation Assay at JoVE.com

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Biz autoinflammatory fenotipleri ile başvuran hastalarda, IL-1 beta üretim gibi pro-inflamatuar sitokinlerin üretimi, ölçmek için basit bir immunoassay açıklar. Özellikle lipopolisakkarid patojen ilişkili moleküler paternleri, tam kan kültürlerinde hücreleri aktive ederek, sitokin salgılanması tam kan Süpernatantları rahatlıkla değerlendirilebilir.

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Evaluation of Vascular Anastomoses in Monochorionic Placenta using Colored Dye

Renkli Boya kullanarak Monokoryonik Plasenta vasküler anastomozlar doğru ve basit Değerlendirme

The presence of placental vascular anastomoses is a conditio sine qua non for the development of twin-to-twin transfusion syndrome (TTTS) and twin anemia ...

Utilizing Transcranial Magnetic Stimulation to Study the Human Neuromuscular System

İnsan Nöromusküler Sistem Eğitim Transkraniyal Manyetik Uyarım kullanımı

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been in use for more than 20 years 1, and has grown exponentially in popularity over the past decade.  While ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Bir Fiber optik Basıç kullanarak Sıçanlarda Epidural İntrakraniyal Basınç Ölçümü

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Fast and Accurate Exhaled Breath Ammonia Measurement

Hızlı ve Doğru Üfürükle Amonyak Ölçüm

This exhaled breath ammonia method uses a fast and highly sensitive spectroscopic method known as quartz enhanced photoacoustic spectroscopy (QEPAS) that ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

İnsan Tüm Kan gerçek zamanlı sitotoksisite deneyleri

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Basit Aygıt Hızla Fare Bağırsak Tüm Mounts Hazırlanır

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Derin Beyin Uyarım ile Saccadometry kullanarak normal ve patolojik beyin fonksiyonlarını incelemek için

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

Telemetri kullanarak Serbestçe Hareketli Fare Uzun süreli Tansiyon Ölçümü

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...