Name: insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster
Uploaded: 2011-06-30T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions de la NIA à YW.CF (AG21068, AG31086).

1. Préparation de la solution d&#39;insuline <ol><li> Préparer une nouvelle solution insuline bovine en dissolvant l&#39;insuline dans le PBS pour obtenir la concentration de 0,01 mg / ml. L&#39;insuline / PBS et le contrôle des solutions PBS doit être conservé sur la glace pendant toute la procédure d&#39;injection. Ces solutions doivent être préparées avec 0,5% (v / v) bleu FD &amp; C non. 1 colorant alimentaire. </li></ol> 2. Préparation d&#39;aiguille et l&#39;injection Set-up <...

<ol>
	<li>Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+insulin-producing+neurons+in+flies:+growth+and+diabetic+phenotypes.">Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes.</a> Science. 296, 1118-1118 (2002).</li><li>Kim, S. K., Rulifson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+mechanisms+of+glucose+sensing+and+regulation+by+Drosophila+corpora+cardiaca+cells.">Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora cardiaca cells.</a> Nature. 431, 316-316 (2004).</li><li>Broughton, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longer+lifespan,+altered+metabolism,+and+stress+resistance+in+Drosophila+from+ablation+of+cells+making+insulin-like+ligands.">Longer lifespan, altered metabolism, and stress resistance in Drosophila from ablation of cells making insulin-like ligands.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 3105-3105 (2005).</li><li>Haselton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+ablation+of+adult+Drosophila+insulin-producing+neurons+modulates+glucose+homeostasis+and+extends+life+span+without+insulin+resistance.">Partial ablation of adult Drosophila insulin-producing neurons modulates glucose homeostasis and extends life span without insulin resistance.</a> Cell Cycle. 9, 3063-3063 (2010).</li><li>Haselton, A. T., Fridell, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+the+study+of+glucose+homeostasis.">Adult Drosophila melanogaster as a model for the study of glucose homeostasis.</a> Aging (Albany NY). 2, 523-523 (2010).</li><li>Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+insulin+pathways+alters+trehalose+level+and+abolishes+sexual+dimorphism+in+locomotor+activity+in+Drosophila.">Disruption of insulin pathways alters trehalose level and abolishes sexual dimorphism in locomotor activity in Drosophila.</a> J Neurobiol. 66, 19-19 (2006).</li><li>Demerec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Drosophila. , (1950).</li></ol>

La technique décrite dans ce rapport est potentiellement utile dans toute étude qui examine les processus physiologiques entraînant des altérations décelables dans la composition de l&#39;hémolymphe de drosophile. En combinant l&#39;injection et la collecte de l&#39;hémolymphe de cette manière, il est possible de déterminer les effets immédiats physiologiquement pertinents d&#39;un traitement expérimental particulier ou de manipulation. Le principal avantage de cette «saignée» la technique dans la...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif / équipements </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> L&#39;insuline bovine </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td></tr><tr><td> Réactif du glucose Infinity </td><td> Thermo Electron Corporation </td><td> TR1541 </td></tr><tr><td> Manuel microinjecteur </td><td> Instrument Sutter </td><td></td></tr><tr><td> P-87 Flamming / Brown micropipette extracteur </td><td> Instrument Sutter </td><td></td></tr><tr><td> Simple cylindre en verre de borosilicate capillaires </td><td> Systèmes AM </td><td> 626000 </td></tr><tr><td> FD &amp; C bleu n º 1 </td><td> McCormick &amp; Company </td><td></td></tr><tr><td> 1 pl tubes microcapillaires </td><td> Drummond </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulateur manuelle à trois axes et de la base </td><td> Instruments de précision du monde </td><td></td></tr></tbody></table>

insulin injection and hemolymph extraction to measure insulin sensitivity in adult drosophila melanogaster

Conservé en nutriments des mécanismes de détection existent entre les mammifères et la mouche des fruits, où les peptides ressemblant d&#39;insuline et de glucagon chez les mammifères, respectivement la fonction de maintenir l&#39;homéostasie du glucose au cours du développement 1,2 stades larvaires. Les études sur les mouches adultes largement post-mitotiques ont révélé une perturbation de l&#39;homéostasie du glucose comme le résultat d&#39;ablation génétique de l&#39;insuline-like peptide (PAI) de cellules productrices (IPC) 3. Ainsi, les mouches à fruits pour adultes sont très prometteurs en tant que système modèle génétique adapté à des troubles métaboliques, y compris le diabète de type II. Pour développer davantage le système de la mouche des fruits, des dosages physiologiques comparables utilisés pour mesurer la tolérance au glucose et la sensibilité à l&#39;insuline chez les mammifères doivent être établis. À cette fin, nous avons récemment décrit une nouvelle procédure pour la mesure de la réponse orale de tolérance au glucose chez la mouche adulte et démontré l&#39;importance d&#39;IPC pour adultes dans le maintien de l&#39;homéostasie du glucose 4,5. Ici, nous avons modifié la procédure décrite précédemment pour 6 injections d&#39;insuline et l&#39;a combiné avec une méthode d&#39;extraction hémolymphe roman pour mesurer la sensibilité périphérique à l&#39;insuline chez la mouche adulte. Unique, notre protocole permet des mesures physiologiques directs de la capacité de la mouche adulte est de disposer d&#39;une charge en glucose périphériques après injection d&#39;insuline, une méthodologie qui rend possible de caractériser les mutants signalisation de l&#39;insuline et les interventions possibles concernant la tolérance au glucose et la sensibilité à l&#39;insuline chez la mouche adulte.

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Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Signalisation de l&#39;insuline conservées voies trouvés dans la mouche des fruits<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Faire de cet organisme un outil potentiel pour la modélisation des troubles métaboliques, notamment le diabète de type II. À cette fin, il est essentiel d&#39;établir des analyses physiologiques pour mesurer efficacement l&#39;insuline d&#39;action systémique dans l&#39;élimination du glucose périphérique dans la mouche adulte.

Injection d&#39;insuline et d&#39;extraction hémolymphe pour mesurer la sensibilité d&#39;insuline dans les adultes Drosophila melanogaster</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Research

JoVE Journal

Biology

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Suivi vidéo haute résolution de la locomotion chez les adultes Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Recherche

Biologie

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection de Oenocytes d&#39;adultes Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

A Quantitative Assay for Insulin-expressing Colony-forming Progenitors

Un dosage quantitatif de l&#39;insuline exprimer formant colonie Progéniteurs

The field of pancreatic stem and progenitor cell biology has been hampered by a lack of in vitro functional and quantitative assays that allow for the ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Mesure de la durée de vie en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

L&#39;utilisation du test Ramsay mesurer la sécrétion de liquide et de flux d&#39;ions dans le Tarifs<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Tubule Malpighian

Modulation of renal epithelial ion transport allows organisms to maintain ionic and osmotic homeostasis in the face of varying external conditions. The ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Mesure de l&#39;absorption de glucose et réponse à la stimulation de l&#39;insuline dans<em&gt; In Vitro</em&gt; Myotubes primaires humains cultivés

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...

Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

Confocale, imagerie du Neuropeptide Y-pHluorin : une Technique pour visualiser l’insuline granules cytotoxiques dans les îlots murins et humains intacts

Insulin secretion plays a central role in glucose homeostasis under normal physiological conditions as well as in disease. Current approaches to study ...

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Détermination de zone optique transversale musculaire des Muscles de vol Indirect adulte de Drosophila Melanogaster

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Oral Infection bactérienne et excrétion chez Drosophila melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualisation et suivi des ARNm endogènes dans Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...