Name: high-throughput screening and biosensing with fluorescent c. elegans strains
Uploaded: 2011-05-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains at JoVE.com

وقدمت جيم ايليجانس الجينات المحورة من قبل مركز علم الوراثة انواع معينة (جامعة مينيسوتا ، مينيابوليس ، مينيسوتا). وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح NS0667678 R21 - 01 إلى KS. وشارك جميع المؤلفين في مجال جمع وتحليل وتفسير البيانات. شارك CKL ، KS ، ومؤسسة البترول الكويتية في كتابة وتنقيح المخطوطات.

1. إعداد الطعام دودة البكتيرية اليوم 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل من E. المشبعة القولونية مل مرق OP50 ثقافة البكتيرية إلى 500 رائع تستكمل مع الستربتوميسين ميكروغرام / مل 50 و تنمو في حاضنة تهتز (225...

<ol>
	<li>Simeonov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+high-throughput+screen+identifies+inhibitors+of+the+Schistosoma+mansoni+redox+cascade.">Quantitative high-throughput screen identifies inhibitors of the Schistosoma mansoni redox cascade.</a> PLoS Negl Trop Dis. 2, e127-e127 (2008).</li><li>Giacomotto, J., Segalat, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+small+animal+models,+where+are+we.">High-throughput screening and small animal models, where are we.</a> Br J Pharmacol. 160, 204-216 (2010).</li><li>Artal-Sanz, M., de Jong, L., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans:+a+versatile+platform+for+drug+discovery.">Caenorhabditis elegans: a versatile platform for drug discovery.</a> Biotechnol J. 1, 1405-1418 (2006).</li><li>An, J. H., Blackwell, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1+links+C.+elegans+mesendodermal+specification+to+a+conserved+oxidative+stress+response.">SKN-1 links C. elegans mesendodermal specification to a conserved oxidative stress response.</a> Genes Dev. 17, 1882-1893 (2003).</li><li>Choe, K., Przybysz, A., Strange, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+WD40+repeat+protein+WDR-23+functions+with+the+CUL4/DDB1+ubiquitin+ligase+to+regulate+nuclear+abundance+and+activity+of+SKN-1+in+Caenorhabditis+elegans.">The WD40 repeat protein WDR-23 functions with the CUL4/DDB1 ubiquitin ligase to regulate nuclear abundance and activity of SKN-1 in Caenorhabditis elegans.</a> Mol Cell Biol. 29, 2704-2715 (2009).</li><li>Hasegawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylamide-responsive+genes+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Acrylamide-responsive genes in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Toxicol. Sci. 101, 215-225 (2008).</li><li>Tullet, J. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+inhibition+of+the+longevity-promoting+factor+SKN-1+by+insulin-like+signaling+in+C.+elegans.">Direct inhibition of the longevity-promoting factor SKN-1 by insulin-like signaling in C. elegans.</a> Cell. 132, 1025-1038 (2008).</li><li>Oliveira, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Condition-adapted+stress+and+longevity+gene+regulation+by+Caenorhabditis+elegans+SKN-1/Nrf.">Condition-adapted stress and longevity gene regulation by Caenorhabditis elegans SKN-1/Nrf.</a> Aging Cell. , (2009).</li><li>Park, S. -. K., Tedesco, P. M., Johnson, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+longevity+in+Caenorhabditis+elegans+as+mediated+by+SKN-1.">Oxidative stress and longevity in Caenorhabditis elegans as mediated by SKN-1.</a> Aging Cell. 8, 258-269 (2009).</li><li>Hayes, J. D., McMahon, M., Chowdhry, S., Dinkova-Kostova, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+chemoprevention+mechanisms+mediated+through+the+Keap1-Nrf2+pathway.">Cancer chemoprevention mechanisms mediated through the Keap1-Nrf2 pathway.</a> Antioxid Redox Signal. , (2010).</li><li>Kwak, M. K., Kensler, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+NRF2+signaling+for+cancer+chemoprevention.">Targeting NRF2 signaling for cancer chemoprevention.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 244, 66-76 (2010).</li><li>Leiser, S. F., Miller, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+signaling,+a+mechanism+for+cellular+stress+resistance+in+long-lived+mice.">Nrf2 signaling, a mechanism for cellular stress resistance in long-lived mice.</a> Mol Cell Biol. 30, 871-884 (2010).</li><li>Link, C. D., Johnson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+transgenes+for+study+of+oxidant+stress+in+Caenorhabditis+elegans.">Reporter transgenes for study of oxidant stress in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Enzymol. 353, 497-505 (2002).</li><li>Vanduyn, N., Settivari, R., Wong, G., Nass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SKN-1/Nrf2+inhibits+dopamine+neuron+degeneration+in+a+Caenorhabditis+elegans+model+of+methylmercury+toxicity.">SKN-1/Nrf2 inhibits dopamine neuron degeneration in a Caenorhabditis elegans model of methylmercury toxicity.</a> Toxicol Sci. , (2010).</li><li>Hasegawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+and+inexpensive+method+to+screen+for+common+foods+that+reduce+the+action+of+acrylamide,+a+harmful+substance+in+food.">A rapid and inexpensive method to screen for common foods that reduce the action of acrylamide, a harmful substance in food.</a> Toxicol Lett. 175, 82-88 (2007).</li><li>Chase, D. L., Pepper, J. S., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+extrasynaptic+dopamine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Mechanism of extrasynaptic dopamine signaling in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Neuroscience. 7, 1096-1103 (2004).</li><li>Hope, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> C. elegans, a Practical Guide. , (2005).</li><li>Pulak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+analysis,+sorting,+and+dispensing+of+C.+elegans+on+the+COPAS+flow-sorting+system.">Techniques for analysis, sorting, and dispensing of C. elegans on the COPAS flow-sorting system.</a> Methods Mol Biol. 351, 275-286 (2006).</li></ol>

نقدم طريقة لزراعة وتوزيع أعداد كبيرة من الديدان الخيطية جينيا. والمعدات المستخدمة لزراعة الديدان هو المعيار لأداء مختبرات الاستنساخ الجزيئي وسائل ومعدات مناولة الاستشعاع معيارية للمختبرات معالجة أعداد كبيرة من microplates. الأساليب الأخرى الاستغناء أعداد كبيرة من يعي?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> LB مرق </td><td> منتجات شركة البحوث الدولية </td><td> L24066 </td><td></td></tr><tr><td> رائع مرق </td><td> منتجات شركة البحوث الدولية </td><td> T15100 </td><td></td></tr><tr><td> التآزر ™ HT موضوع وضع القارئ Microplate </td><td> BioTek </td><td></td><td> مرشحات : GFP 485/20ex 528/20em ؛ RFP 540/25ex 590/35em </td></tr><tr><td> حدد مصدر MicroFlo </td><td> BioTek </td><td></td><td></td></tr><tr><td> قارورة دودة الاستغناء </td><td> جنوب العلمية المحدودة ، Micanopy ، FL </td><td></td><td> مخصص تجميعها (352) 284-2531 </td></tr><tr><td> 384 microplates </td><td> غرينر بيو واحد </td><td> 5678-1209 </td><td></td></tr><tr><td> تنفس ختم الشريط </td><td> نونك </td><td> 241205 </td><td></td></tr><tr><td> (5 - P - هيدروكسي naphthoqinone) جغلون </td><td> ACROS </td><td> 121640010 </td><td> يذوب في جغلون DMSO </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D - 5879 </td><td></td></tr><tr><td> جيم ايليجانس سلالة معدلة وراثيا </td><td> البلاغ المختبري </td><td> VP596 </td><td> Pgst - 4 : : GFP وPDOP 3 : : RFP </td></tr></tbody></table>

high-throughput screening and biosensing with fluorescent c. elegans strains

الفرز الفائق الإنتاجية (HTS) هو طريقة فعالة لتحديد جهري من العمليات البيولوجية الكيميائية. ومع ذلك ، غالبا ما توجد العديد من المركبات التي تم تحديدها في شاشات باستخدام نماذج ثقافة الخلية لتكون سامة أو غير نشط في الجسم الحي عقاقيري 1-2. يمكن الفرز في النماذج الحيوانية كلها تساعد على تجنب هذه المزالق وتبسيط مسار التنمية المخدرات. ايليجانس جيم هو كائن نموذج متعددة الخلايا مناسبة تماما للHTS. انها صغيرة (&lt;1 مم) ويمكن الاستغناء اقتصاديا وتربيتها في السوائل. جيم ايليجانس هي أيضا واحدة من أكثر النماذج الحيوانية الانقياد تجريبيا يتيح التعرف السريع والمفصل لوضع المخدرات مقابل عمل 3. وصفنا بروتوكول للزراعة وصرفها من سلالات الفلورسنت C. ايليجانس الإنتاجية العالية لفحص المكتبات الكيميائية أو الكشف عن الملوثات البيئية التي تغير التعبير عن جينة معينة. تزرع أعداد كبيرة من الديدان متزامنة تنمويا في الثقافة السائل ، وحصادها ، وغسلها ، وعلقت في مناطق ذات كثافة المعرفة. ثم تضاف الديدان إلى الأسود ، لوحات 384 جيدا مسطحة باستخدام موزع تحوي السائل. يمكن إضافة جزيئات صغيرة من مكتبة الكيميائية أو عينات الاختبار (على سبيل المثال ، الماء ، الغذاء ، أو التربة) من الآبار مع الديدان في الجسم الحي ، ويقاس في الوقت الحقيقي مع كثافة مضان قارئ microplate مضان. ويمكن تكييف هذه الطريقة على أي الجينات محرض في C. ايليجانس التي مراسل مناسبة متاحة. وتعرف جيدا العديد من الإجهاد محرض والمسارات التنموية في الترانسكربتي C. ايليجانس والسلالات المعدلة وراثيا GFP مراسل موجودة بالفعل بالنسبة للكثيرين منهم 4. عندما يقترن المعدلة وراثيا للصحفيين ان المناسبة ، يمكن استخدام أسلوب لدينا للكشف عن جهري ممرا أو المقايسات لتطوير جهاز الاستشعار البيولوجي قوية للملوثات البيئية. نحن لدينا تثبت C. ايليجانس الثقافة والاستغناء عن بروتوكول مع مقايسة HTS ضعنا لرصد C. &#39;ن&#39; ايليجانس قبعة عامل النسخ طوق SKN - 1. SKN - 1 و Nrf2 لها نديد الثدييات تنشيط الجينات cytoprotective خلال الاكسدة وأجنبي بيولوجيا 5-10. Nrf2 الثدييات يحمي من الاضطرابات المتعلقة بالعمر عديدة مثل السرطان ، وتنكس عصبي ، والتهاب مزمن ، وأصبح هدفا رئيسيا الكيميائي 11-13. يستند على فحص لدينا مراسل GFP المعدلة وراثيا لSKN - 1 هدف الجينات GST -4 14 الذي يشفر 6 - S ترانسفيراز الجلوتاثيون. مراسل GST -4 هو أيضا جهاز الاستشعار البيولوجي للمواد الكيميائية وأجنبي بيولوجيا الاكسدة التي تنشط SKN - 1 ، ويمكن استخدامها للكشف عن مستويات منخفضة من الملوثات ، مثل الأكريلاميد وميثيل الزئبق 15-16.

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains at JoVE.com

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

إجراءات لبناء زراعة السائل وصرف<em&gt; C. ايليجانس</emيوصف&gt; سلالات معربا عن البروتينات مراسل الفلورسنت التي لا تتطلب معدات باهظة الثمن الفرز. ويمكن تطبيق هذا النهج في العديد من محرض<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; الجينات لاكتشاف المخدرات أو biosensing من الملوثات.

الفرز الفائق الإنتاجية وBiosensing مع نيون C. ايليجانس سلالات

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Research

JoVE Journal

Biology

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

لإنتاج C. ايليجانس الجينات المحورة عبر Recombineering مع galK إختيار ماركر

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in Escherichia coli

High Throughput Screening of Fungal Endoglucanase Activity in Escherichia coli

ارتفاع المناولة فحص النشاط Endoglucanase الفطرية في القولونية</em

Cellulase enzymes (endoglucanases, cellobiohydrolases, and &beta;-glucosidases) hydrolyze cellulose into component sugars, which in turn can be converted ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

[رني الفرز لتحديد الظواهر تال للمرحلة الجنينية في C. ايليجانس</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

الكمية والآلي عالية الإنتاجية الجينوم على نطاق شاشات رني في C. ايليجانس</em

RNA interference is a powerful method to understand gene function, especially when conducted at a whole-genome scale and in a quantitative context. In C. ...

High-throughput Screening for Small-molecule Modulators of Inward Rectifier Potassium Channels

الفرز الفائق الإنتاجية الصغيرة للجزيء المغيرون من الداخل قنوات البوتاسيوم المعدل

Specific members of the inward rectifier potassium (Kir) channel family are postulated drug targets for a variety of disorders, including hypertension, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. ايليجانس الانجذاب الكيميائي الفحص

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

الكيمياء الحيوية والعليا تقييم مجهرية مرت من كتلة الدهون في<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

الإنتاجية العالية فحص وظيفية باستخدام محلية الصنع ثنائي توهج luciferase الفحص

We present a rapid and inexpensive high-throughput screening protocol to identify transcriptional regulators of alpha-synuclein, a gene associated with ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

الإنتاجية العالية للكشف عن المغيرون الكيميائية من الجينات المشاركة ما بعد transcriptionally الخاضعة للرقابة

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

تحديد أزواج كيناز الركيزة عن طريق فحص إنتاجية عالية


We have developed a screening platform to identify dedicated human protein kinases for phosphorylated substrates which can be used to elucidate novel ...