Name: isolation of brain-infiltrating leukocytes
Uploaded: 2011-06-13T12:00:00
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यह काम NINDS (CLH) से NS64571 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, मेयो क्लीनिक (CLH) से एक प्रारंभिक कैरियर विकास पुरस्कार द्वारा, और डोनाल्ड और फ्रांसिस Herdrich (CLH) से एक उदार उपहार के द्वारा. हम सहायता के लिए मेयो क्लीनिक फ्लो Cytometry कोर धन्यवाद देना चाहूंगा.

1. Intracranial वायरस इंजेक्शन: निम्नलिखित तकनीक को संशोधित किया गया है और हमारी प्रयोगशाला और उनके सहयोगियों द्वारा बड़े पैमाने पर उपयोग. संक्षेप में, Theiler murine Encephalomyelitis (TMEV) वायरस या नकली संक्रमण के डैनियल ...

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	<li>Buenz, E. J., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picornaviruses+and+cell+death.">Picornaviruses and cell death.</a> Trends Microbiol. 14, 28-36 (2006).</li><li>Buenz, E. J., Limberg, P. J., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+3-parameter+flow+cytometry-based+cell+death+assay.">A high-throughput 3-parameter flow cytometry-based cell death assay.</a> Cytometry A. 71, 170-173 (2007).</li><li>Deb, C., Lafrance-Corey, R. G., Zoecklein, L., Papke, L., Rodriguez, M., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demyelinated+axons+and+motor+function+are+protected+by+genetic+deletion+of+perforin+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Demyelinated axons and motor function are protected by genetic deletion of perforin in a mouse model of multiple sclerosis.</a> J. Neuropath. Exp. Neurol. 68, 1037-1048 (2009).</li><li>Deb, C., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NKG2D+contributes+to+efficient+clearance+of+picornavirus+from+the+acutely+infected+murine+brain.">NKG2D contributes to efficient clearance of picornavirus from the acutely infected murine brain.</a> J. Neurovirol. 14, 261-266 (2008).</li><li>Donovan, J., &amp;amp, P. . B. r. o. w. n., , P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Euthanasia.">Euthanasia.</a> Current Protocols in Neuroscience. , A.4H.1-A.4H.4 (2005).</li><li>Donovan, J., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handling+&#38;+restraint.">Handling &#38; restraint.</a> Current Protocols in Immunology. 73, 1.3.1-1.3.6 (2006).</li><li>Donovan, J., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parenteral+injections.">Parenteral injections.</a> Current Protocols in Neuroscience. , A.4F.1-A.4F.9 (2005).</li><li>Holmes, K. L., Otten, G., Yokoyama, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+using+Becton+Dickinson+FACS+Calibur.">Flow cytometry analysis using Becton Dickinson FACS Calibur.</a> Current Protocols in Immunology. , 5.4.1-5.4.22 (2002).</li><li>Howe, C. L., Ure, D., Adelson, J. D., LaFrance-Corey, R., Johnson, A., Rodriguez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+directed+against+a+viral+peptide+contribute+to+loss+of+motor+function+by+disrupting+axonal+transport+in+a+viral+model+of+fulminant+demyelination.">CD8+ T cells directed against a viral peptide contribute to loss of motor function by disrupting axonal transport in a viral model of fulminant demyelination.</a> J Neuroimmunol. 188, 13-21 (2007).</li><li>Lipton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theiler's+virus+infection+in+mice:+An+unusual+biphasic+disease+process+leading+to+demyelination.">Theiler's virus infection in mice: An unusual biphasic disease process leading to demyelination.</a> Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).</li></ol>

हम नियमित रूप से प्रवाह cytometry का उपयोग करने के लिए मस्तिष्क सेल घुसपैठ की तैयारी के दोनों गुणवत्ता निर्धारित, और प्रतिरक्षा कोशिकाओं 2, 9 के विभिन्न आबादी भेद. तीव्र - समय अंक में, हमारे BILs विधि CD45hi के रूप ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक </th><th> कंपनी </th><th> सूचि संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> TMEV </td><td> होवे लैब </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> डैनियल तनाव </td><td> Invitrogen </td><td> 21063-029 </td><td></td></tr><tr><td> isoflurane </td><td> Novaplus </td><td> 0409-3292-49 एनडीसी </td><td></td></tr><tr><td> दौर नीचे ओक रिज अपकेंद्रित्र ट्यूबों </td><td> Nalgene </td><td> 3118-0030 </td><td></td></tr><tr><td> 1640 RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-093 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> जीई हेल्थकेयर </td><td> 17-0891-02 </td><td></td></tr><tr><td> 10X पीबीएस </td><td> रॉश </td><td> 11666789001 </td><td></td></tr><tr><td> प्लस Ficoll - Paque </td><td> जीई हेल्थकेयर </td><td> 17-1440-02 </td><td></td></tr><tr><td> Trypan 0.4% (w / v) ब्लू </td><td> Mediatech </td><td> 25 900-CI </td><td></td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> 7 एमएल कांच Pyrex ब्रांड Tenbroeck ऊतक बनाने की मशीन </td><td> मछुआ </td><td> 08-414-10B </td><td></td></tr><tr><td> 40 सुक्ष्ममापी सेल झरनी </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> 50 एमएल शंक्वाकार </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> गोजातीय सीरम albumin </td><td> सिग्मा </td><td> A9647 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम azide </td><td> सिग्मा </td><td> S8032 </td><td></td></tr><tr><td> सीएमएफ - पीबीएस </td><td> Mediatech </td><td> 21-040-CV </td><td></td></tr><tr><td> FACS ट्यूबों </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352054 </td><td></td></tr><tr><td> भ्रूण गोजातीय सीरम </td><td> सिग्मा </td><td> F4135 </td><td></td></tr><tr><td> 2.4G2 हाइब्रिडोमा </td><td> ATCC </td><td> एचबी - 197 </td><td></td></tr><tr><td> Costar थाली वी - नीचे </td><td> Corning </td><td> 3894 </td><td></td></tr><tr><td> Allegra X-22R अपकेंद्रित्र या समकक्ष </td><td> Beckman </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> 96 अच्छी तरह से थाली बाल्टी और रोटर </td><td> Beckman </td><td> S2096 </td><td></td></tr><tr><td> फिक्स्ड - कोण रोटर </td><td> Beckman </td><td> F0360 </td><td></td></tr><tr><td> paraformaldehyde </td><td> सिग्मा </td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td> बी.डी. FACS Calibur </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> 7.5 FlowJo </td><td> ट्री स्टार इंक, </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> CD45 </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> 557235 </td><td> क्लोन: 30 F11 </td></tr><tr><td> GR1 (Ly6C / G) </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> 553128 </td><td> क्लोन: RB6 8C5 </td></tr><tr><td> CD11b </td><td> ebiosciences </td><td> 17-0112-83 </td><td> क्लोन: M1/70 </td></tr><tr><td> F4/80 </td><td> ebiosciences </td><td> 17-4801-82 </td><td> क्लोन: BM8 </td></tr></tbody></table>

isolation of brain-infiltrating leukocytes

हम चूहों से मस्तिष्क घुसपैठ leukocytes (BILs) की तैयारी के लिए एक विधि का वर्णन. हम प्रदर्शन कैसे एक तेजी से intracranial इंजेक्शन तकनीक और कैसे पूरे दिमाग से घुसपैठ कोशिकाओं की ल्युकोसैट समृद्ध आबादी को शुद्ध के माध्यम से Theiler murine Encephalomyelitis वायरस (TMEV) के साथ चूहों को संक्रमित करने के लिए. संक्षेप में, चूहों के साथ एक कक्ष में बंद कर दिया isoflurane anesthetized हैं और मुक्त हाथ ललाट प्रांतस्था में एक हैमिल्टन सिरिंज के साथ अंतःक्षिप्त. चूहे तो isoflurane अधिक मात्रा और पूरे दिमाग से संक्रमण के बाद विभिन्न समय पर मारे गए हैं और निकाले homogenized RPMI में एक Tenbroeck ऊतक बनाने की मशीन के साथ. ब्रेन homogenates एक सतत 30% Percoll ढाल के माध्यम से centrifuged माइलिन और अन्य सेल मलबे को हटाने के. सेल निलंबन 40 सुक्ष्ममापी में फिर तनावपूर्ण है, धोया और एक असंतत ढाल Ficoll Paque प्लस पर centrifuged leukocytes का चयन करने के लिए और शुद्ध. leukocytes और फिर धो रहे हैं प्रवाह cytometry द्वारा immunophenotyping के लिए उपयुक्त बफ़र्स में resuspended. प्रवाह cytometry C57BL 6 / चूहों में संक्रमण के प्रारंभिक चरणों में सहज प्रतिरक्षा कोशिकाओं की आबादी का पता चलता है. 24 घंटे के बाद संक्रमण से कम, प्रतिरक्षा कोशिकाओं के कई सबसेट BILs में मौजूद GR1 +, CD11b + और ​​F4/80 + कोशिकाओं के एक समृद्ध आबादी के साथ, कर रहे हैं. इसलिए, इस विधि मस्तिष्क में तीव्र संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया निस्र्पक में उपयोगी है.

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Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

एक तेजी से विधि murine मस्तिष्क से घुसपैठ leukocytes प्राप्त वर्णित है. इस पद्धति का इस्तेमाल एक सतत Percoll ढाल और असंतत Ficoll का चयन करने के लिए और ढाल परत ल्युकोसैट समृद्ध शुद्ध. पृथक leukocytes तो प्रवाह cytometric माप द्वारा विशेषता जा सकता है.

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Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

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