Name: isolation of brain-infiltrating leukocytes
Uploaded: 2011-06-13T12:00:00
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この作品は、メイヨークリニック（CLH）から初期のキャリア開発賞で、NINDS（CLH）から助成金NS64571でサポートされており、ドナルドとフランシスHerdrich（CLH）からの寛大な贈り物がされました。我々は援助のためのメイヨークリニックのフローサイトメトリーコアを感謝したいと思います。

1。頭蓋内ウイルスの注入： 次のテクニックは変更と私たちの研究室と同僚によって広く利用されています。簡単に言うと、タイラーのマウス脳脊髄炎ウイルス（TMEV）または偽感染のダニエルの菌株の頭蓋内注射は、（1、10）脳浸潤白血球（BILs）を引き出すために若いマウス（年齢、好ましくは5-6週間）に実行されます。結果は、ダニエルの歪み、Beanのひずみ、およびGD...

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	<li>Buenz, E. J., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picornaviruses+and+cell+death.">Picornaviruses and cell death.</a> Trends Microbiol. 14, 28-36 (2006).</li><li>Buenz, E. J., Limberg, P. J., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+3-parameter+flow+cytometry-based+cell+death+assay.">A high-throughput 3-parameter flow cytometry-based cell death assay.</a> Cytometry A. 71, 170-173 (2007).</li><li>Deb, C., Lafrance-Corey, R. G., Zoecklein, L., Papke, L., Rodriguez, M., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demyelinated+axons+and+motor+function+are+protected+by+genetic+deletion+of+perforin+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Demyelinated axons and motor function are protected by genetic deletion of perforin in a mouse model of multiple sclerosis.</a> J. Neuropath. Exp. Neurol. 68, 1037-1048 (2009).</li><li>Deb, C., Howe, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NKG2D+contributes+to+efficient+clearance+of+picornavirus+from+the+acutely+infected+murine+brain.">NKG2D contributes to efficient clearance of picornavirus from the acutely infected murine brain.</a> J. Neurovirol. 14, 261-266 (2008).</li><li>Donovan, J., &amp;amp, P. . B. r. o. w. n., , P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Euthanasia.">Euthanasia.</a> Current Protocols in Neuroscience. , A.4H.1-A.4H.4 (2005).</li><li>Donovan, J., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handling+&#38;+restraint.">Handling &#38; restraint.</a> Current Protocols in Immunology. 73, 1.3.1-1.3.6 (2006).</li><li>Donovan, J., Brown, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parenteral+injections.">Parenteral injections.</a> Current Protocols in Neuroscience. , A.4F.1-A.4F.9 (2005).</li><li>Holmes, K. L., Otten, G., Yokoyama, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+using+Becton+Dickinson+FACS+Calibur.">Flow cytometry analysis using Becton Dickinson FACS Calibur.</a> Current Protocols in Immunology. , 5.4.1-5.4.22 (2002).</li><li>Howe, C. L., Ure, D., Adelson, J. D., LaFrance-Corey, R., Johnson, A., Rodriguez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+directed+against+a+viral+peptide+contribute+to+loss+of+motor+function+by+disrupting+axonal+transport+in+a+viral+model+of+fulminant+demyelination.">CD8+ T cells directed against a viral peptide contribute to loss of motor function by disrupting axonal transport in a viral model of fulminant demyelination.</a> J Neuroimmunol. 188, 13-21 (2007).</li><li>Lipton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theiler's+virus+infection+in+mice:+An+unusual+biphasic+disease+process+leading+to+demyelination.">Theiler's virus infection in mice: An unusual biphasic disease process leading to demyelination.</a> Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).</li></ol>

我々は日常的に脳浸潤細胞調製物の品質の両方を決定するためにフローサイトメトリーを使用し、免疫細胞2,9の異なる集団を区別する。急性の時間の時点で、私たちのBILsメソッドはCD45hi集団内の炎症性単球と同様にCD45lo集団におけるマクロファージの高い割合の高い割合を得られます。これは、脳内で再現性の免疫応答が確実に私たちの方法によって特徴付けることができることを?...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td> TMEV </td><td>ハウラボ</td><td> N / </td><td></td></tr><tr><td>ダニエルの歪み</td><td>インビトロジェン</td><td> 21063-029 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td> Novaplus </td><td> NDC 0409-3292-49 </td><td></td></tr><tr><td>丸底オークリッジ遠心管</td><td> Nalgene </td><td> 3118-0030 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td>インビトロジェン</td><td> 11875-093 </td><td></td></tr><tr><td>パーコール</td><td> GEヘルスケア</td><td> 17-0891-02 </td><td></td></tr><tr><td> 10 × PBS </td><td>ロッシュ</td><td> 11666789001 </td><td></td></tr><tr><td>をFicoll - Paqueプラス</td><td> GEヘルスケア</td><td> 17-1440-02 </td><td></td></tr><tr><td>トリパンブルー0.4％（w / v）の</td><td> Mediatech </td><td> 25から900 - CI </td><td></td></tr><tr><td> 15 mlコニカルチューブ</td><td> BDファルコン</td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> 7 mLのガラスパイレックスブランドTenbroeck組織グラインダー</td><td>フィッシャー</td><td> 08から414 - 10B </td><td></td></tr><tr><td> 40μmのセルストレーナー</td><td> BDファルコン</td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> 50 mLコニカル</td><td> BDファルコン</td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマ</td><td> A9647 </td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S8032 </td><td></td></tr><tr><td> CMF - PBS </td><td> Mediatech </td><td> 21から040 - CV </td><td></td></tr><tr><td> FACSチューブ</td><td> BDファルコン</td><td> 352054 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>シグマ</td><td> F4135 </td><td></td></tr><tr><td> 2.4G2ハイブリドーマ</td><td> ATCC </td><td> HB - 197 </td><td></td></tr><tr><td>コスターV -底板</td><td>コー​​ニング</td><td> 3894 </td><td></td></tr><tr><td>アレグラX - 22R遠心分離機または同等の</td><td>ベックマン</td><td> N / </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェルプレートのバケットとローター</td><td>ベックマン</td><td> S2096 </td><td></td></tr><tr><td>アングルローター</td><td>ベックマン</td><td> F0360 </td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ</td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td> BD FACSキャリバー</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> N / </td><td></td></tr><tr><td> FlowJo 7.5 </td><td>ツリースター株式会社</td><td> N / </td><td></td></tr><tr><td> CD45 </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 557235 </td><td>クローン：30 - F11 </td></tr><tr><td> GR1（Ly6C / G） </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 553128 </td><td>クローン：RB6 - 8C5 </td></tr><tr><td> CD11b </td><td> ebiosciences </td><td> 17-0112-83 </td><td>クローン：M1/70 </td></tr><tr><td> F4/80 </td><td> ebiosciences </td><td> 17-4801-82 </td><td>クローン：BM8 </td></tr></tbody></table>

isolation of brain-infiltrating leukocytes

我々は、マウスからの脳浸潤白血球（BILs）を調製するための方法を説明します。我々はどのように脳全体から浸潤細胞の白血球に富む集団を精製するために迅速な頭蓋内注入法とを経由してタイラーのマウス脳脊髄炎ウイルス（TMEV）をマウスに感染させる方法を示します。簡単に言えば、マウスは、密閉チャンバーのイソフルランで麻酔し、前頭皮質にハミルトンシリンジで注入フリーハンドです。マウスはその後Tenbroeck組織グラインダーを含むRPMIで抽出し、均質化されイソフルラン過剰摂取と全脳による感染後の様々な時点で殺されている。脳ホモジネートを、ミエリン及び他の細胞破片を除去するために、連続30％Percoll勾配を通じて遠心分離されています。細胞懸濁液を、40μmの時に緊張洗浄し、白血球を選択し、精製する不連続をFicoll - Paqueプラス勾配で遠心分離される。白血球を洗浄し、フローサイトメトリーで免疫表現するための適切な緩衝液に再懸濁する。フローサイトメトリーはC57BL / 6マウスにおける感染の初期段階での自然免疫細胞の集団を明らかにする。 24時間後に感染症で、免疫細胞の複数のサブセットにはGR1 +、CD11b +とF4/80 +細胞の濃縮の人口で、BILsに存在しています。したがって、この方法は、脳内の急性感染症に対する免疫応答を特徴づけるのに便利です。

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Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

マウス脳から浸潤白血球を得るために迅速な方法が記載されている。この方法は連続Percoll勾配と白血球に富む層を選択し、精製する不連続フィコール勾配を利用しています。分離された白血球は、フローサイトメトリー測定によって特徴付けることができる。

脳浸潤白血球の分離

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

機能心臓の免疫細胞の単離

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

マウス肺樹状細胞の分離

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

脳から隔離された白血球の単離と解析<em&gt;マラリアベルゲイ</em&gt; ANKA感染マウス

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

Bioenergetics and the Oxidative Burst: Protocols for the Isolation and Evaluation of Human Leukocytes and Platelets

ヒト白血球と血小板の単離と評価のためのプロトコル：生体エネルギーと酸化バースト

Mitochondrial dysfunction is known to play a significant role in a number of pathological conditions such as atherosclerosis, diabetes, septic shock, and ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

フローから白血球の補充に間質細胞の影響を分析する

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

ヒト母体·胎児のインターフェイスから白血球の単離

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

母体·胎児界面におけるマウス組織からの白血球の分離

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

酵素消化および勾配分離を使用したマウス皮膚から浸潤白血球の単離

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Selective Harvesting of Marginating-pulmonary Leukocytes

Marginating肺白血球の選択的ハーベスティング

Marginating-pulmonary (MP) leukocytes are leukocytes that adhere to the inner endothelium of the lung capillaries. MP-leukocytes were shown to exhibit ...

Selective Harvesting of Marginating-hepatic Leukocytes

Marginating-肝白血球の選択的ハーベスティング

Marginating-hepatic (MH) leukocytes (leukocytes adhering to the sinusoids of the liver), were shown to exhibit unique composition and characteristics ...