Name: mouse model of middle cerebral artery occlusion
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح NS057195 ، UCSF راكوشبالوتاي الجائزة ، وجامعة كينت ستيت بدء صندوق لWH تشو.

<html> 1. أسلوب MCAO وتمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل رعاية الحيوان المؤسسية واللجان استخدم في سان فرانسيسكو وجامعة كينت الدولة ، وتلتزم المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لاستخدام حيوانات التجارب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع خياطة حيدة 5-0 (جهاز هارفارد ، Holliston ، MA) في 20 قطاعات ملم. جولة غيض من كل قطعة بتسخينه بالقرب من cauterizer (برينتري العلمية ، وشركة ، برينتري ، MA). قياس قطرها من طرف باستخدام ميكرومتر (صورة التطبيقية ، وشركة روتشستر ، نيويورك). نستخدم خياطة مع قطر الحافة النهائية لل0،21-0،22 مم للماوس مع وزن الجسم من 25-30 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم جميع الأدوات الجراحية بواسطة التعقيم (الحد الأدنى 121 درجة مئوية ، 15 PSI ، لمدة 15 دقيقة). تعقيم طاولة الجراحة والمعدات المرتبطة باستخدام الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير an 8-12 أسبوع من العمر الماوس (25-30 ز) مع 5 ٪ isoflurane (Aerrane ، باكستر ، ديرفيلد ، IL) في 30 ٪ O 2 / 70 ٪ N 2 O باستخدام نظام V - 10 التخدير (VetEquip ، المؤتمر الوطني العراقي . ، بليزانتون ، كاليفورنيا). بعد التخدير ، وخفض مستوى isoflurane والحفاظ عليه عند 1.5 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على وسادة التدفئة. ادخال مسبار المستقيم ، ورصد والمحافظة على درجة حرارة الجسم بين 36،5-37،5 درجة مئوية باستخدام نظام TR - 200 درجة حرارة homeothermic (العلوم أدوات الجميلة ، وشركة فوستر سيتي ، كاليفورنيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفراء على منطقة الرقبة بطني مع كليبرز الكهربائية (برينتري العلمية) لفضح الجلد. تطهير الموقع الجراحية باستخدام ثلاثة طلبات من الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر ستيريو تشريح (نيكون ، اليابان) ، وجعل خط الوسط 1 سم شق طويل على الرقبة. استخدام الكامشات (برينتري العلمية) لفضح الجراحي الميداني والتعرف على حق الشريان السباتي المشترك (CCA) ، الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والشريان السباتي الداخلي (ICA). تشريح بعناية الشرايين خالية من الأعصاب المحيطة واللفافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بشكل أقصى زيادة تخثر واللجنة الاقتصادية لأفريقيا في الغدة الدرقية والشريان متفوقة (STA) فرع باستخدام مخثار القطبين (هوارد الصك ، وشركة توسكالوسا ، AL). اللجنة الاقتصادية لأفريقيا وخفض STA في الجزء متخثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط خيوط الحرير two فضفاضة حول الجذع 8-0 اللجنة الاقتصادية لأفريقيا. تطبيق المشبك الأوعية الدموية (أدوات العلوم الجميلة) في التشعب من التقييم القطري المشترك في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا والتحالف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في نهاية الجذع اللجنة الاقتصادية لأفريقيا مع مقص الربيع Vannas على غرار (أدوات العلوم الجميلة). وسجل قياس طول الخيط حيدة 5-0 مدورة على الحافة. تضاف الى خياطة الفتحة وتقدم إلى المشبك. تشديد خيوط الحرير two حول تجويف ما يكفي لضمان الحفاظ على بعد التنقل من الدرز حيدة داخل المسكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المشبك من التشعب. تقدم بلطف خياطة حيدة من التجويف للجنة الاقتصادية لأفريقيا في ICA لمسافة 9-10 ملم وراء انشعاب CCA لتسد أصل MCA. مدة الجراحة حوالي 30-45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة الفتحة على الرقبة ووضع الماوس في مربع 35 درجة مئوية التمريض للتعافي من التخدير ، وإعادته إلى القفص. يستغرق عادة 50-10 دقيقة للفئران للتعافي من التخدير. لأداء MCAO عابرة ، يمكن للباحث إعادة تخدير الماوس وسحب الخيط مرة أخرى إلى اللجنة الاقتصادية لأفريقيا جدعة بعد فترة من الزمن ، عادة ما بين 0،5-2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أربع وعشرين ساعة بعد تحريض MCAO ، تخدير الفأر مع 5 ٪ isoflurane والموت ببطء من قبل خلع عنق الرحم. قطع رأس الفأر وجمع الدماغ. شريحة الدماغ coronally إلى شرائح 2 ملم الأربع مع مصفوفة الدماغ (برينتري العلمية) على الجليد. احتضان شرائح الدماغ في 2 ٪ 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) (سيغما الدريخ) في برنامج تلفزيوني لمدة 20 دقيقة 1X في درجة حرارة الغرفة لتحديد حجم ومدى احتشاء. إصلاح شرائح المخ في 10 ٪ محايدة مخزنة حل الفورمالين (سيغما الدريخ) في 4 درجات مئوية حتى التصوير. ويمكن قياس مدى احتشاء كما هو موضح في البروتوكول إن الرب 955 ( <a href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">http://www.jove.com/index/Details.stp؟ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. ممثل النتائج وينظر للعوائق التي تولدها MCAO في المخطط والقشرة ظهراني. والمخطط هو أكثر حساسية لنقص تروية من القشرة الدماغية. وثلاثين دقيقة من إنتاج MCAO احتشاء فقط في المخطط ، بينما أكثر من ساعة واحدة من MCAO سيضر كل من المخطط والقشرة. بعد 24 ساعة MCAO دائمة ، فإن النسبة المئوية الإجمالية احتشاء ~ 40 ± 5 ٪ من الكرة الأرضية ومعدل وفيات بعد الجراحة ~ 10 ٪. استثنينا الفئران من إجراء المزيد من الدراسات إذا يحدث النزيف أثناء الجراحة ، ووقت تشغيل يتجاوز 90 دقيقة ، والفئران فشل في التعافي من التخدير في غضون 15 دقيقة ، أو وجدت نزيف في الدماغ أو شرائح في القاعدة من دائرة ويليس خلال الفحص بعد الوفاة . 61/2761fig1.jpg &quot;بديل =&quot; الشكل 1 &quot;/&gt; صور الممثل الشكل 1. شرائح الدماغ TTC الملطخة (المستوى الإكليلي 1-4) بعد 24 ساعة من MCAO دائمة. في المعيشة ينخفض ​​إنزيمي الأنسجة TTC بواسطة dehydrogenases لtriphenylformazan - 1،3،5 (TPF) ، وهو أحمر اللون ، بينما في المناطق نخرية يبقى الأبيض بسبب عدم وجود مثل هذا النشاط الأنزيمي. ولذلك ، يمكن تحديد المنطقة التي من احتشاء لونه أبيض بسبب عدم وجود لتحويل TTC ​​TPF. ملاحظة : TTC الحرارة والضوء إلى حد ما غير مستقر حتى المقاطع ملطخة حماية من الحرارة والضوء قدر الإمكان.

<ol>
	<li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex. , 3-12 (2004).</li><li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li><li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Middle cerebral artery disease. , 123-166 (2004).</li><li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury.">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li><li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+electrocautery,+atmospheric+exposure,+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier.">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke:+overview+of+major+experimental+rodent+models,+pathophysiology,+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia.">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

ليس لدينا أية مصالح متضاربة المحتملة في الكشف عنها.

ويشيع استخدام MCAO في الفئران لنقص تروية الدماغ نموذج التنسيق بين البشر. أصبح استخدام الفئران لدراسات السكتة الدماغية أكثر تواترا بسبب توافر سلالات معدلة وراثيا وخروج المغلوب. هناك بعض التفاصيل الهامة أن نلاحظ في البروتوكول : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فمن الضروري للحفاظ على درجة حرارة الجسم الماوس أثناء الجراحة وقبل أن يتعافى تماما من التخدير. درجة حرارة الجسم له تأثيرات على مدى احتشاء ؛ انخفاض درجة حرارة الجسم وارتفاع الحرارة يزيد من حجم احتشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حين فضح وعزل التقييم القطري المشترك واللجنة الاقتصادية لأفريقيا ، وتجنب إلحاق أضرار العصب المبهم في مكان قريب والقصبة الهوائية ، التي يمكن أن تزيد من حجم واستمرارية انخفاض احتشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أبدا إدراج خياطة حيدة أكثر من 10 ملم تمرير التشعب. ويمكن للخياطة إدراج بعيدا خرم الشريان الدماغي الأمامي ويؤدي إلى نزف في الدماغ. يمكن رأى المقاومة عندما متقدمة حول خياطة 90-10 ملم وراء النقطة التشعب. إذا حدث هذا ، يجب على الباحث وقف التقدم في خياطة الجروح وتأكيد المسافة. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Chemical	</td>
<td>Aerrane, Baxter</td>
<td>95045-588</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>V-10 Anesthesia system</td>
<td>Equipment</td>
<td>VetEquip</td>
<td>901807</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TR-200 Temp Controller</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>21060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric clipper</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>CLP-9931</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ745T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Retractor system</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>ACD-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bipolar coagulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Howard Instrument</td>
<td>64000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>510479</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monofilament suture</td>
<td>Material</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>723351</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vascular clamp</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>00396-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vannas scissor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15000-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Brain matrix</td>
<td>Equipment</td>
<td>Braintree</td>
<td>BS-2000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10% neutral buffer formalin</td>
<td>Chemical</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT5011</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

mouse model of middle cerebral artery occlusion

السكتة الدماغية هي الأكثر شيوعا مرض عصبي قاتل في الولايات المتحدة (1). الغالبية من السكتات الدماغية (88 ٪) نتيجة انسداد الأوعية الدموية في الدماغ (السكتة الدماغية) 2. منذ السكتات الدماغية أكثر (~ 80 ٪) تحدث في أراضي الشريان الدماغي الأوسط (MCA) 3 ، وركزت العديد من النماذج الحيوانية السكتة الدماغية التي تم وضعها على هذا الشريان. نموذج حيدة داخل اللمعة من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) ينطوي على ادراج خيوط جراحية في الشريان السباتي الخارجي والترابط إلى الأمام في الشريان السباتي الداخلي (ICA) حتى غيض occludes أصل MCA ، مما أدى إلى وقف تدفق الدم واحتشاء الدماغ لاحقة في 4 أراضي MCA. ويمكن استخدام هذه التقنية لنموذج إطباق دائمة أو عابرة 5. إذا تمت إزالة خياطة بعد فترة معينة (30 دقيقة ، ح 1 ، ح ​​أو 2) ، ويتحقق ضخه (MCAO عابرة) ، وإذا ترك خيوط في مكانه (24 ساعة) الإجراء هو مناسبة كنموذج للMCAO دائمة . هذه التقنية لا تتطلب قطع القحف ، وهو إجراء جراحة الأعصاب لإزالة جزء من الجمجمة ، والتي قد تؤثر على الضغط داخل الجمجمة ، ودرجة الحرارة 6. أصبح الأسلوب الأكثر استخداما لتقليد دائم ونقص تروية دماغية عابر التنسيق في الجرذان والفئران 7،8. لتقييم مدى احتشاء دماغي ، ونحن وصمة عار شرائح الدماغ مع 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) لتحديد نقص تروية أنسجة المخ 9. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح طريقة MCAO وتحديد حجم احتشاء بواسطة تلطيخ TTC.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

علينا أن نظهر في شريط الفيديو وسيلة لإنتاج وسط انسداد الشريان الدماغي في فئران بالغة باستخدام حيدة داخل اللمعة. علينا أن نبين كيفية تقييم مدى احتشاء الدماغ بواسطة 2،3،5 - triphenyltetrazolium تلطيخ (TTC) كلوريد.

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

الشريان الدماغي الأوسط انسداد داخل اللمعة (MCAO) النموذجي للاصابة بالسكتة الدماغية مع توجيه الليزر دوبلر Flowmetry في الفئران

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

تطبيق الربط الدائم الشريان المخي الأوسط في الماوس

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endothelin-1 المستحثة انسداد الشريان الدماغي الأوسط نموذج للالسكتة الدماغية مع التوجيه بالليزر Flowmetry دوبلر في الجرذ

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

الاستفادة من وجود نافذة القحف لتصور الشريان الدماغي الأوسط خلال Endothelin-1 انسداد الشريان الدماغي الأوسط المستحثة

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

الأمثل نظام لرصد الإرواء الدماغي في نموذج الفئران من السكتة الدماغية داخل اللمعة انسداد الشريان الدماغي الأوسط

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

صمي الأوسط انسداد الشريان الدماغي (MCAO) لالدماغية السكتة الدماغية مع مثلي تجلط الدم في الجرذان

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

الكمي لحماية عائية عصبية بعد المتكرر نقص الأوكسجين شروط مسبقة وعابر الأوسط الشريان الدماغي انسداد في الفئران

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

أداء الدائم القاصي الأوسط الدماغي مع السباتي المشترك انسداد الشريان في الجرذان المسنين لدراسة القشرية نقص التروية ذوي الإعاقة المستديمة

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...