Name: vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti
Uploaded: 2011-06-17T13:00:00
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L&#39;auteur tient à remercier l&#39;utilisation de Core pour enfants de l&#39;Institut de recherche pour l&#39;imagerie de microscopie confocale et le Dr. Jian Zhang pour la suggestion de monter des sections en utilisant des billes d&#39;agarose. Ce travail a été financé par le NIH octroi DC010387.

1. L&#39;isolement et la fixation de l&#39;oreille interne <ol><li> Pour l&#39;analyse de la structuration cellulaire dans l&#39;organe de Corti, euthanasier correctement mis en scène des embryons ou des adultes. </li><li> Disséquer la capsule otique, contenant de l&#39;oreille interne membraneuse. Chez la souris, ce qui peut être facilement fait sur les embryons au embryonnaires (E) 14,5 jours et plus, dont E 0,5 est le jour où un bouchon vaginal a été détectée. La dissection de la capsule otique est accompli...

<ol>
	<li>Lim, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+structure+of+the+organ+of+Corti:+a+review.">Functional structure of the organ of Corti: a review.</a> Hear Res. 22, 117-146 (1986).</li><li>Raphael, Y., Altschuler, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+innervation+of+the+cochlea.">Structure and innervation of the cochlea.</a> Brain Res Bull. 60, 397-422 (2003).</li><li>Chung, W. S., Shin, C. H., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmp2+signaling+regulates+the+hepatic+versus+pancreatic+fate+decision.">Bmp2 signaling regulates the hepatic versus pancreatic fate decision.</a> Dev Cell. 15, 738-748 (2008).</li><li>Sun, X., Mariani, F. V., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+FGF+signalling+from+the+apical+ectodermal+ridge+in+limb+development.">Functions of FGF signalling from the apical ectodermal ridge in limb development.</a> Nature. 418, 501-508 (2002).</li><li>Trinh, L. A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+regulates+epithelial+organization+during+myocardial+migration+in+zebrafish.">Fibronectin regulates epithelial organization during myocardial migration in zebrafish.</a> Dev Cell. 6, 371-382 (2004).</li><li>Yin, C., Kikuchi, K., Hochgreb, T., Poss, K. D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hand2+regulates+extracellular+matrix+remodeling+essential+for+gut-looping+morphogenesis+in+zebrafish.">Hand2 regulates extracellular matrix remodeling essential for gut-looping morphogenesis in zebrafish.</a> Dev Cell. 18, 973-984 (2010).</li><li>Shim, K., Minowada, G., Coling, D. E., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sprouty2,+a+mouse+deafness+gene,+regulates+cell+fate+decisions+in+the+auditory+sensory+epithelium+by+antagonizing+FGF+signaling.">Sprouty2, a mouse deafness gene, regulates cell fate decisions in the auditory sensory epithelium by antagonizing FGF signaling.</a> Dev Cell. 8, 553-564 (2005).</li></ol>

La procédure de sectionnement vibratome, suivi par imagerie confocale immunohistochimie et permet la visualisation de l&#39;organe de Corti à une lésion tissulaire minime. De toute évidence, les images prises à partir confocale régions internes dans la section vibratome montrent une excellente conservation de la morphologie cellulaire qui n&#39;est limitée que par des artefacts de fixation. Images prises confocale à proximité des deux coupe-surfaces d&#39;une section vibratome sont souvent impossibles à distin...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Leica VT1000S lame vibrante microtome </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Zeiss LSM510 microscope confocal à balayage laser </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Étudiant Dumont # 5 forceps </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure bas point de fusion d&#39;agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 16520-050 </td><td></td></tr><tr><td> Moisissures intégration Peel-A-Way </td><td> Polysciences </td><td> 18986 ou 18646A </td><td></td></tr><tr><td> l&#39;albumine sérique bovine </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 001-000-162 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de chèvre </td><td> Invitrogen </td><td> 16210-064 </td><td></td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 568 de chèvre anti-IgG de lapin </td><td> Invitrogen </td><td> A-11036 </td><td> Dilution de 1:1000 </td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> Vector Labs </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> YO-PRO-1 </td><td> Invitrogen </td><td> Y3603 </td><td></td></tr><tr><td> graisse à vide </td><td> Fisher </td><td> S41718 </td><td></td></tr><tr><td> Affi-Gel Blue Gel </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7301 </td><td></td></tr></tbody></table>

vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti

L&#39;organe de Corti des mammifères est une mosaïque très ordonné cellulaires de cheveux et de mécano nonsensory cellules de soutien (Examiné en 1,2). Visualisation de cette mosaïque cellulaires exige souvent que l&#39;organe de Corti est à section. En particulier, le pilier nonsensory et les cellules de Deiters, dont les noyaux sont situés basale à l&#39;égard des cellules ciliées, ne peuvent être visualisées sans coupes transversales de l&#39;organe de Corti. Toutefois, la cytoarchitecture délicat de l&#39;organe de Corti des mammifères, y compris les processus cytoplasmiques fines du pilier et les cellules de Deiters, est difficile à conserver par la routine des procédures histologiques telles que la paraffine et cryo-coupe, qui sont compatibles avec les techniques standards de coloration immunohistochimique. Je décris ici une procédure simple et robuste composé de vibratome sectionnement de la cochlée, la coloration immunohistochimique de ces sections vibratome dans la montagne entière, suivie par microscopie confocale. Cette procédure a été largement utilisée pour l&#39;analyse immunohistochimique de multiples organes, y compris le bourgeon de membre de la souris, le poisson-zèbre intestins, le foie, le pancréas et le cœur (voir 3-6 pour des exemples choisis). En outre, cette procédure a été réussie pour les deux imagerie et quantitificaton du nombre de cellules dans les organes des piliers de mutants et de contrôle de Corti à la fois dans les embryons et des souris adultes 7. Cette méthode, cependant, n&#39;est pas largement utilisée pour examiner l&#39;organe de Corti des mammifères. Le potentiel de cette procédure à la fois à assurer la préservation accrue de la cytoarchitecture amende de l&#39;organe de Corti et les adultes permettent de quantifier les différents types de cellules est décrite.

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Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti

Une procédure simple de vibratome sectionner l&#39;organe de Corti, suivie par microscopie confocale immunohistochimie et est décrit. Cette procédure permet une meilleure conservation de l&#39;cytoarchitecture amende de l&#39;organe de Corti des mammifères, et permet par conséquent d&#39;une quantification précise des types de cellules.

Vibratome sectionnement pour la préservation accrue de la cytoarchitecture de l&#39;Organe de Corti des mammifères

The mammalian organ of Corti is a highly ordered cellular mosaic of mechanosensory hair and nonsensory supporting cells (reviewed in 1,2).Visualization of ...

Research

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Neuroscience

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Recherche

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